王春蘭

(韶關(guān)市畜牧研究所,廣東韶關(guān) 512026)

乳酸芽孢桿菌及光合細菌的聯(lián)合添加對蛋鴨免疫性能的影響

王春蘭

(韶關(guān)市畜牧研究所,廣東韶關(guān) 512026)

為了研究乳酸芽孢桿菌和光合細菌對蛋鴨免疫性能的影響，通過在飼料中聯(lián)合添加乳酸芽孢桿菌和光合細菌，測定蛋鴨的免疫功能指標(biāo)。結(jié)果顯示：實驗組血清中的CK、T-AOC、GSH-PX和MAD的活性分別比對照組分別提高了41.08%、22.93%、35.31%和25.41%，SOD的活性比對照組降低了0.48%。T-AOC、GSH-PX和MAD的活力差異不顯著（P＞0.05），CK活力差異顯著（P＜0.05）；肌肉組織中的GSH-PX活性比對照組提高了62.56%，T-AOC和MAD活性比對照組分別降低了15.15%、27.02%，GSH-PX活力差異極顯著（P ＜0.01），T-AOC和MAD活性差異不顯著（P＞0.05）；肝組織的T-AOC、LDH的活性比對照組分別降低了45.56%和23.67%，GSH-PX的活性比對照組提高了25.96%，差異不顯著（P＞0.05）。

乳酸芽孢桿菌 免疫 益生菌

我國有著悠久的鴨養(yǎng)殖和鴨產(chǎn)品的消費習(xí)慣，養(yǎng)鴨業(yè)是我國農(nóng)業(yè)的支柱產(chǎn)業(yè)之一，而我國現(xiàn)普遍的“禽-魚”生產(chǎn)體系造成了很大的矛盾，魚的生產(chǎn)需要肥沃水質(zhì)，需要水體中有充分的浮游生物甚至細菌，但水禽則需要清潔的水質(zhì)，必須降低浮游和細菌含量。益生菌是指對動物有益的微生物制劑，具有抑制腸道有害微生物生長、維持腸道正常微生物平衡的作用。乳酸芽孢桿菌是一種常見的微生態(tài)制劑，目前，芽孢桿菌成為一個熱點研究項目，在畜牧業(yè)生產(chǎn)中，該菌一直作為益生菌被用于畜禽和生產(chǎn)養(yǎng)殖中[1]。

作為鴨業(yè)養(yǎng)殖的副產(chǎn)品，鴨蛋食用及藥用功能，可與雞蛋媲美。長期以來，人們對蛋鴨的農(nóng)藥中毒和過量的獸藥殘留以及飼料的霉菌毒素中毒一直比較重視，也積累了較為豐富的防范經(jīng)驗。然而對水環(huán)境造成的中毒則比較生疏，缺乏必要的防治手段。近年來，為了追求經(jīng)濟效益，許多農(nóng)戶不斷擴大生產(chǎn)規(guī)模，導(dǎo)致養(yǎng)殖密度不斷增大，水體污染嚴(yán)重。一方面，鴨排泄物排到水體中，使水體中的N、P含量不斷上升；另一方面腸道微生物中的有害細菌，如大腸桿菌、沙門氏菌也同時排放到水體中。這些細菌利用水體中豐富的營養(yǎng)物質(zhì)進行增值。蛋鴨通過飲水?dāng)z入革蘭氏陰性菌在腸道內(nèi)分解后會釋放出內(nèi)毒素，同時通過飲水鴨也會大量攝入細菌在水中死亡裂解后釋放的內(nèi)毒素進入體內(nèi)。蛋鴨一旦發(fā)生水污染物中毒，其損失十分嚴(yán)重不僅發(fā)病率、死亡率大幅增加，而且由于這類中毒往往造成遷延性的實質(zhì)臟器及生殖器官損傷，而使產(chǎn)蛋量發(fā)生持續(xù)性的下降，同時也導(dǎo)致免疫、造血、解毒功能的減退而使鴨群極易發(fā)生多種病原的感染。益生素芽孢桿菌能夠殺滅腸道內(nèi)有害微生物，減少糞便中有害微生物的排放，從而間接減少向水體中排放有害微生物[2]。光合細菌能夠有效凈化水質(zhì)，減少水體微生物污染。本實驗通過在飼料中添加乳酸芽孢桿菌和在水體中添加光合細菌，一方面減少對水體污染程度，另一方面減少有害微生物及其內(nèi)毒素對蛋鴨免疫性能的影響。

1 實驗方法

1.1 飼養(yǎng)與管理

本次實驗是選用廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所提供的蛋鴨為實驗對象，在廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所大豐基地飼養(yǎng)。分為兩個組，即實驗組跟對照組；每個組設(shè)4個重復(fù)，每個重復(fù)45只鴨。實驗組在飼料中添加0.4g/kg的由廣州光牧豐公司提供的乳酸芽孢桿菌，水體中每10d按1kg/畝水面用量添加一次購自廣州生物有限公司的光合細菌，對照組則不做任何處理，飼喂基礎(chǔ)飼料。本次試驗時間為60d，每天投喂2次，每羽鴨每次喂170g。

1.2 樣品采集與制備

添加乳酸芽孢桿菌及光合細菌第55d采集樣品。

1.2.1 血清的制備

于實驗中期跟實驗結(jié)束時，在實驗組與對照組的各重復(fù)組中選擇接近平均體重的蛋鴨進行頸靜脈采血約10ml，分離血清，分若干等份，放入-20℃冰箱中冷凍保存，用于測定血液生化指標(biāo)。

1.2.2 肌肉組織勻漿和肝臟組織勻漿的制作

準(zhǔn)確稱取0.5g肌肉組織塊和0.5g肝臟組織塊，用冰凍生理鹽水沖洗后，剪碎，分別加入5ml冰凍生理鹽水中，放入超聲波粉碎機中粉碎。

1.3 免疫指標(biāo)的測定

所有步驟均嚴(yán)格按照南京建成生物工程研究所提供的試劑盒說明書的方法測定血清中肌酸激酶（Creatine Kinase簡稱CK）、過氧化氫酶（Catalase簡稱CAT）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase 簡稱SOD）、總抗氧化能力（Oxidative capacity簡稱T-AOC）、丙二醛（Maleic Dialdehyde簡稱MDA）和谷胱甘胱肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase簡稱GSH-PX）的含量；肌肉組織中總抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MAD）和谷胱甘胱肽過氧化物酶（GSH-PX）的含量；肝組織中總抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘胱肽過氧化物酶（GSH-PX）和乳酸脫氫酶（Lactate dehydrogenase簡稱LDH）的含量。測定儀器為722型分光光度計。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

試驗數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行單因子方差分析（one-way ANOVA），用獨立T檢驗方法進行多重比較。結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 試驗結(jié)果

2.1 對蛋鴨血清抗氧化指標(biāo)的影響

表1 對蛋鴨血清抗氧化指標(biāo)的影響

表2 對蛋鴨肌肉組織勻漿抗氧化指標(biāo)的影響

由表3可得出，實驗組中肝組織的T-AOC和LDH的活性比對照組分別降低了45.56%和23.67%，實驗組中肝組織的GSH-PX的活性比對照組提高了25.96%。各處理組統(tǒng)計檢驗差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

光合細菌（Photosynthetic bacteria簡稱PSB），廣泛存在于水域及土壤中。光合細菌的共用特點是含有光合色素，能利用光進行光合作用，合成有機物質(zhì)。光合細菌含有60%以上的蛋白質(zhì)以及多種維生素，特別是葉酸、生物素含量是酵母的幾十倍。此外，還含有生物活性物質(zhì)，如抗病毒物質(zhì)及促生長因子等。將光合細菌應(yīng)用于畜牧水產(chǎn)業(yè)，已越來越顯示出其對動物生長、疾病預(yù)防等方面的多功能前景。

T-AOC是近幾年研究發(fā)現(xiàn)的用于衡量機體抗氧化系統(tǒng)功能的綜合性指標(biāo)。它的大小可以代表和反映機體抗氧化酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)對外來刺激的代償能力以及機體自由基代謝的狀態(tài)，是反映機體抗氧化功能的一個重要指標(biāo)。本實驗結(jié)果顯示T-AOC的含量比對照組提高很多，從而提高機體免疫功能，與實驗吻合。

SOD是動物體內(nèi)一種重要的抗氧化酶，體內(nèi)SOD活性在一定程度上能反映機體抗氧化能力的強弱[3]。SOD活力的下降可導(dǎo)致機體抗氧化能力的下降，而增加的氧自由基也可能直接損傷組織細胞，另外血清中SOD活力明顯下降，也可能與氧自由基對蛋白質(zhì)的操作作用有關(guān)[4]。

GSH-PX主要催化脂質(zhì)過氧化物轉(zhuǎn)化為無害物[2]，而且GSHPX是機體內(nèi)抗氧化的重要酶類，可以使其脂質(zhì)過氧化反應(yīng)明顯減弱，而抗氧化能力明顯增強。此含量提高是動物機體抗氧化性增強的標(biāo)志之一，本實驗結(jié)果顯示GSH-PX活性是逐步提高的，證明乳酸芽孢桿菌和光合細菌的聯(lián)合添加可有效提高蛋鴨機體的免疫能力。

CK是由兩個亞單位組成的二聚體。正常情況下，肌細胞膜結(jié)構(gòu)完整，CK很少透出細胞膜，故血清中CK活性很低。LDH在腎臟、肝臟等器官中廣泛存，定位于細胞胞漿中，是無氧代謝的標(biāo)志酶，如果機體乳酸供能系統(tǒng)發(fā)生障礙，腎臟與肝臟等無氧氧化能力將會減弱，LDH大量逸出細胞也反映了對此機體組織的損傷情況。本實驗顯示了聯(lián)合添加乳酸芽孢桿菌和光合細菌的LDH量明顯低于對照組，說明其可有效提高蛋鴨機體的免疫能力。

MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，可使含氨基的蛋白質(zhì)、核酸和腦磷脂發(fā)生交聯(lián)并喪失活性，其含量可以反映機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接反映細胞受損程度[4]。MDA作為脂質(zhì)過氧化程度的檢測指標(biāo)，試驗觀察到添加量過高使蛋鴨抗氧化能力有所下降，這與飲水中添加芽孢桿菌復(fù)合微生態(tài)制劑可極顯著提高血液SOD和GSH-PX的活性[5]，極顯著地降低MDA的含量的結(jié)論不太吻合?？赡苁怯捎谄渥杂苫鶟舛冗^高對蛋鴨體內(nèi)SOD、GSH-PX等酶活力產(chǎn)生副作用，從而導(dǎo)致活力的減弱并使其抗氧化機能有所下降，其機理有待進一步的試驗探討。

4 結(jié)論

綜上所述，通過測定機體T-AOC、GSH-PX、SOD、LDH活力以及MDA含量與分析，乳酸芽孢桿菌和光合細菌的聯(lián)合添加可顯著提高蛋鴨的免疫功能。

出現(xiàn)此結(jié)果的分析原因可能是：

（1）芽孢桿菌隨飼料進入動物機體后作為抗氧化激活劑或不斷產(chǎn)生抗氧化成分，提高機體的抗氧化能力，減少自由基對生物膜的損傷。

（2）菌體本身作為抗原可以刺激機體抗氧化系統(tǒng)中的酶分泌，從而可有效清除因環(huán)境等應(yīng)激產(chǎn)生的自由基，調(diào)節(jié)機體自由基平衡，阻止脂質(zhì)過氧化，修復(fù)機體損傷。

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