王明珠，譚詩云，王 軍

武漢大學(xué)人民醫(yī)院消化內(nèi)科，湖北 武漢430060

大腸癌是癌癥的第三大最常見的類型，近幾年，大腸癌在中國(guó)的發(fā)病率逐年上升，城市地區(qū)占總癌癥比例約為6. 5%，農(nóng)村地區(qū)占總癌癥的比例約為4.6%［1］。男性和女性大腸癌的發(fā)病率分別居所有惡性腫瘤的第3 位、第2 位;而其死亡率分別居所有男性和女性惡性腫瘤的第4 位、第3 位［2］。與大腸癌發(fā)生相關(guān)的因素目前尚未完全明確，但流行病學(xué)研究揭示，微量元素缺乏、吸煙、飲酒及遺傳等與大腸癌的發(fā)展相關(guān)，而遺傳因素又是諸多因素中與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展最為密切的一個(gè)［3］。

P53 是一種腫瘤抑制基因，在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分裂及細(xì)胞凋亡中起著不可替代的作用［4］。它位于染色體17p13 上，在人類所有類型的癌癥中，是一種最常見的突變基因［5］。除了突變外，野生型P53 基因多態(tài)性也可以改變其功能，在一般人群中，與癌癥發(fā)展相關(guān)的常見多態(tài)性是P53 基因密碼子72 所編碼的的精氨酸(CGC)被脯氨酸(CCC)替代［6］。氨基酸序列的改變，可以改變P53 蛋白結(jié)合靶基因中反應(yīng)元件的能力，并改變翻譯后修飾的識(shí)別基序，或改變P53 的穩(wěn)定性及與其他蛋白的相互作用［7］。這種變化可能有助于腫瘤的發(fā)展，且預(yù)后不良［8］。

在過去的20 年中，大量的病例對(duì)照研究探討了人P53 基因密碼子72 多態(tài)性與人類大腸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)聯(lián)。然而，這些研究的結(jié)論不盡相同。2010 年-2011 年有兩個(gè)薈萃分析曾發(fā)表評(píng)價(jià)P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)聯(lián)。這兩項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，這種多態(tài)性與大腸癌風(fēng)險(xiǎn)無相關(guān)性，并建議進(jìn)一步研究來證實(shí)這些結(jié)果。然而，這兩項(xiàng)研究有一定的局限性，如樣本量相對(duì)較小，而且很少有研究是基于亞洲人群。此后，也有一些研究相繼發(fā)表。為了更全面的估計(jì)P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌之間的關(guān)聯(lián)風(fēng)險(xiǎn)，我們收集了25 個(gè)病例對(duì)照進(jìn)行了一項(xiàng)薈萃分析研究，來評(píng)估它們之間的聯(lián)系。

1 材料與方法

1.1 材料 計(jì)算機(jī)檢索PubMed、Medline、EMbase、CBM、CNKI、萬方和維普等數(shù)據(jù)庫。中文檢索以P53、TP53、密碼子72、大腸癌、基因多態(tài)性為檢索詞，英文檢索以P53、TP53、codon 72、mutation、variation、polymorphism、colorectal cancer 等為檢索詞，無語言限制，搜索由兩位研究人員獨(dú)立進(jìn)行，檢索時(shí)間從建庫至2014 年2 月，同時(shí)輔以手工檢索。

1.2 方法

1.2.1 納入和排除標(biāo)準(zhǔn):納入標(biāo)準(zhǔn):(1)研究是基于無相關(guān)的個(gè)人;(2)必須是病例對(duì)照研究;(3)必須提供大腸癌的病例數(shù)和對(duì)照數(shù);(4)必須提供病例組及對(duì)照組Arg/Arg、Arg/Pro 和Pro/Pro 各基因型頻數(shù)，以計(jì)算OR 值及95%CI，若文獻(xiàn)中無基因型頻率，聯(lián)系作者后獲取的方可納入研究。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)研究重復(fù)發(fā)表或者無可用數(shù)據(jù)報(bào)道;(2)未提供基因型頻率且向作者索取無果;(3)研究對(duì)象非人類;(4)控制組的基因分布不符合Hardy-Weinberg 平衡(HWE)。

1.2.2 資料提取:由兩名研究者獨(dú)立對(duì)文獻(xiàn)進(jìn)行篩選并核對(duì)，不一致的地方通過商討或第三方介入?yún)f(xié)調(diào)。提取的資料主要有第一作者的名字、發(fā)表年份、國(guó)家、病例組和對(duì)照組Arg/Arg、Arg/Pro 和Pro/Pro 各基因型頻數(shù)、對(duì)照組H-W 平衡檢驗(yàn)值(P 值)，P ＜0.05 認(rèn)為不符合H-W 平衡規(guī)律)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用Cochrane 協(xié)作網(wǎng)提供的Rev-Man 5.2 版軟件。(1)異質(zhì)性的檢驗(yàn):用Q 檢驗(yàn)和I2檢驗(yàn)，當(dāng)P≥0.1、I2＜50%時(shí)，認(rèn)為不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性，用固定效應(yīng)模型進(jìn)行Meta 分析;當(dāng)P ＜0.10，I2＞50%時(shí)各研究結(jié)果不同質(zhì)，可使用敏感性分析或分層分析等異質(zhì)性處理方法，使之達(dá)到同質(zhì)后，再用固定效應(yīng)模型;若經(jīng)過異質(zhì)性分析和處理后，多個(gè)同類研究的結(jié)果仍然不具有同質(zhì)性時(shí)，可選擇隨機(jī)效應(yīng)模型。(2)H-W 遺傳平衡檢驗(yàn):其方法是利用在線軟件(http://ihg. gsf. de/cgi-bin/hw/hwa1. pl)進(jìn)行計(jì)算，P ＞0.05 說明群體是隨機(jī)婚配，符合H-W 平衡，可以用于遺傳學(xué)分析，否則剔除掉。(3)偏倚的評(píng)價(jià):以漏斗圖的對(duì)稱性及寬度范圍來評(píng)價(jià)。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)檢索結(jié)果 初檢獲得文獻(xiàn)108 篇，無中文文獻(xiàn)，全部為英文文獻(xiàn)，通過閱讀題目和摘要剔除67 篇(其中包括研究非大腸癌類文獻(xiàn)44 篇，重復(fù)21 篇，Meta 分析2 篇)，剩余41 篇通過閱讀全文剔除14 篇(均為機(jī)制研究)，初納入文獻(xiàn)27 篇，因Sotamaa 等研究包括美國(guó)及芬蘭人口的兩個(gè)獨(dú)立研究，合并分析時(shí)將其視為兩個(gè)研究，即27 篇［9-35］文獻(xiàn)(28 個(gè)研究)。通過H-W 遺傳平衡檢驗(yàn)計(jì)算，其中有3 個(gè)研究［33-35］(Sameer 等PHWE = 0. 025;Dakouras 等PHWE =0.002;Sjalander 等PHWE =0.049)的P 值＜0.05，不符合H-W 平衡規(guī)律，將其剔除，最終納入24 篇［9-32］文獻(xiàn)(25 個(gè)研究)，其中有6 753 例患者，8 562 例對(duì)照者。納入研究的一般情況如表1 所示。

表1 納入文獻(xiàn)的基本情況Tab 1 Characteristics of studies included in the Meta-analysis

續(xù)表1

2.2 Meta 分析結(jié)果 對(duì)納入的25 個(gè)研究合并進(jìn)行Meta 分析，結(jié)果如表2 所示，4 個(gè)模型中，由于顯性模型(I2=57%)及PP vs AA 模型(I2=58%)存在異質(zhì)性，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并，其余兩個(gè)模型不存在異質(zhì)性，因此，采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并。結(jié)果表明隱性模型PP vs AP +AA 與大腸癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)有明顯相關(guān)性(隱性模型:OR=1.13，95% CI:1.02 ～1.26，P=0.02)，其余基因模型與大腸癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)無明顯相關(guān)性(顯性模型:OR =0.99，95% CI:0.88 ～1.11，P=0.84;PP vs AA:OR=1，95% CI:0.82 ～1.22，P=1.00;AP vs AA:OR=1.04，95% CI:0.96 ～1.11，P=0.33)(見表2、圖1)。

表2 P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌易感性的Meta 分析Tab 2 Meta-analysis of the P53 codon 72 polymorphism and colorectal cancer risk

圖1 總?cè)巳篜53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)性隱性遺傳模型的Meta 分析Fig 1 Forest plots for the association of the P53 gene codon 72 polymorphism and colorectal cancer risk in the recessive model

2.3 敏感性分析 對(duì)各項(xiàng)研究進(jìn)行依次剔除，每次僅剔除1 篇，發(fā)現(xiàn)剔除Zhu 等［19］的研究后，其研究間的異質(zhì)性也隨之消失，但是各個(gè)模型的合并效應(yīng)量OR值無明顯變化，表明我們得到的結(jié)果是穩(wěn)定的，具有可靠性。

2.4 發(fā)表偏倚分析 從漏斗圖的對(duì)稱性來看，隱性模型及PP vs AA 模型不對(duì)稱，可能存在潛在的發(fā)表偏倚。而顯性模型及AP vs AA 模型較為對(duì)稱，且分布范圍較為狹窄，集中在上部，表明其精度較高，不存在發(fā)表偏倚(見圖2)。

圖2 P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌易感性Meta 分析發(fā)表偏倚風(fēng)險(xiǎn)結(jié)果 A:顯性模型;B:隱性模型;C:PP vs AA 模型;D:AP vs AA 模型Fig 2 Funnel plot for publication bias test between the P53 gene codon 72 polymorphism and colorectal cancer risk A:dominant model;B:recessive model;C:PP vs AA model;D:AP vs AA model

3 討論

P53 是一種重要的腫瘤抑制基因，在過去20 年里，已被廣泛研究，根據(jù)以往國(guó)內(nèi)外報(bào)道，P53 基因突變與肺癌、宮頸癌、乳腺癌及前列腺癌的發(fā)生均有有一定的關(guān)系。自從Olschwang 等［32］在1991 年第一次研究P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系，此后，關(guān)于兩者關(guān)系的文章被相繼報(bào)道，然而結(jié)果卻不盡相同。先前，Wang 及Tang 等［36-37］分別在2010年及2011 年發(fā)表了薈萃分析，研究結(jié)果表明P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌風(fēng)險(xiǎn)無相關(guān)性。然而這兩個(gè)研究均存在一定的局限性，前者沒有剔除不符合HW 遺傳平衡檢驗(yàn)的研究(納入了34、35 兩篇文獻(xiàn))，且前者沒有研究隱性模型，后者的研究雖然避免了前者的缺點(diǎn)，但是樣本含量較少(病例組3 603 個(gè)，對(duì)照組5 524個(gè))。因此，更新的薈萃分析是必要的。

該項(xiàng)薈萃分析樣本含量較之前明顯增加，統(tǒng)計(jì)效能也大大提高。研究結(jié)果表明隱性模型PP vs AP +AA 中P53 基因密碼子與大腸癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)有明顯相關(guān)性，其余模型中均未發(fā)現(xiàn)大腸癌風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。該結(jié)果與前兩次研究［36-37］并不完全一致。分層分析顯示，在亞洲人群中，合并OR 值為1.07(95%CI:0.98 ～1.18)，白種人中，合并OR 值為0.99 (95%CI:0.88 ～1.10)，該結(jié)果表明P53 基因密碼子72 多態(tài)性和大腸癌易感性，與種族無關(guān)。薈萃分析的結(jié)果受對(duì)照組選擇的影響，不同的對(duì)照組來源可能是一個(gè)混雜因素，對(duì)我們的研究結(jié)論會(huì)產(chǎn)生影響［38］。如一些研究中使用健康人群作為對(duì)照組，而其他研究選擇無大腸癌住院患者作為對(duì)照組。為了消除對(duì)照源不同的混雜因素，我們對(duì)對(duì)照源進(jìn)行亞組分析。研究結(jié)果表明，P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌易感性也無顯著相關(guān)性，這證實(shí)了我們整體結(jié)果的可靠性。

本文尚存在以下不足:(1)文獻(xiàn)存在發(fā)表偏倚的可能性;(2)未考慮基因與環(huán)境的相互作用;(3)我們沒有調(diào)整OR 值，可能存在年齡、性別、肥胖、吸煙、飲酒等方面的影響。因此結(jié)論的可靠性需要考究。

總之，這項(xiàng)薈萃分析表明，P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌易感性之間存在相關(guān)性。然而受諸多混雜因素的影響，以上結(jié)論需要大樣本、多中心的病例對(duì)照研究來證實(shí)，此外，期望在未來，基因與環(huán)境的相互作用能得到進(jìn)一步研究，以更全面了解P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。

［1］ Zhao P，Dai M，Chen W，et al. Cancer trends in China［J］. Jpn J Clin Oncol，2010，40(4):281-285.

［2］ Jemal A，Bray F，Center MM，et al. Global cancer statistics［J］. CA Cancer J Clin，2011，61(2):69-90.

［3］ Risch N. The genetic epidemiology of cancer:interpreting family and twin studies and their implications for molecular genetic approaches［J］. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2001，10(7):733-741.

［4］ Levine AJ. p53，the cellular gatekeeper for growth and division［J］.Cell，1997，88(3):323-331.

［5］ Hollstein M，Sidransky D，Vogelstein B，et al. p53 mutations in human cancers［J］. Science，1991，253(5015):49-53.

［6］ Sreeja L，Syamala V，Raveendran PB，et al. p53 Arg72Propolymorphism predicts survival outcome in lung cancerpatients in Indian population［J］.Cancer Invest，2008，26(1):41-46.

［7］ Li Y，Prives C. Are interactions with p63 and p73 involved in mutant p53 gain of oncogenic function?［J］. Oncogene，2007，26(15):2220-2225.

［8］ Katkoori VR，Jia X，Shanmugam C，et al. Prognostic significance of p53 codon 72 polymorphismdiffers with race in colorectal adenocarcinoma［J］. Clin Cancer Res，2009，15(7):2406-2416.

［9］ Dastjerdi MN. TP53 codon 72 polymorphism and P53 protein expression in colorectal cancer specimens in Isfahan［J］. Acta Med Iran，2011，49(2):71-77.

［10］ Song HR，Kweon SS，Kim HN，et al. p53 codon 72 polymorphism in patients with gastric and colorectal cancer in a Korean population［J］. Gastric Cancer，2011，14(3):242-248.

［11］ Aizat AA，Shahpudin SN，Mustapha MA，et al. Association of Arg72Pro of P53 polymorphism with colorectal cancer susceptibility risk in Malaysian population［J］. Asian Pac J Cancer Prev，2011，12(11):2909-2913.

［12］ Joshi AM，Budhathoki S，Ohnaka K，et al. TP53 R72P and MDM2 SNP309 polymorphisms and colorectal cancer risk:the Fukuoka Colorectal Cancer Study［J］. Jpn J Clin Oncol，2011，41(2):232-238.

［13］ Mojtahedi Z，Haghshenas MR，Hosseini SV，et al. p53 codon 72 polymorphism in stomach and colorectal adenocarcinomasin Iranian patients［J］. Indian J Cancer，2010，47(1):31-34.

［14］ Mammano E，Belluco C，Bonafé M，et al. Association of p53 polymorphisms and colorectal cancer:modulation of risk and progression［J］.Eur J Surg Oncol，2009，35(4):415-419.

［15］ Cao Z，Song JH，Park YK，et al. The p53 codon 72 polymorphism and susceptibility to colorectal cancer in Korean Patients［J］. Neoplasma，2009，56(2):114-118.

［16］ Csejtei A，Tibold A，Varga Z，et al. GSTM，GSTT and p53 polymorphisms as modifiers of clinical outcome in colorectal cancer［J］. Anticancer Res，2008，28(3B):1917-1922.

［17］ Krüger S，Engel C，Bier A，et al. The additive effect of p53 Arg72Pro and RNASEL Arg462Gln genotypes on age of disease onset in Lynch syndrome patients with pathogenic germline mutations in MSH2 or MLH1［J］. Cancer Lett，2007，252(1):55-64.

［18］ Tan XL，Nieters A，Hoffmeister M，et al. Genetic polymorphisms in TP53，nonsteroidal antiinflammatorydrugs and the risk of colorectal cancer:evidence for gene-environment interaction?［J］. Pharmacogenet Genomics，2007，17(8):639-645.

［19］ Zhu ZZ，Wang AZ，Jia HR，et al. Association of the TP53 codon 72 polymorphism with colorectal cancer in a Chinese population［J］. Jpn J Clin Oncol，2007，37(5):385-390.

［20］ Koushik A，Tranah GJ，Ma J，et al. p53 Arg72Pro polymorphism and risk of colorectal adenoma and cancer［J］. Int J Cancer，2006，119(8):1863-1868.

［21］ Lima JM，Serafim PV，Silva ID，et al. Role of the genetic polymorphism of p53 (codon 72)gene in colorectal cancer［J］. Arq Gastroenterol，2006，43(1):8-13.

［22］ Perez LO，Abba MC，Dulout FN，et al. Evaluation of p53 codon72 polymorphism in adenocarcinomas of the colon and rectum in La Plata，Argentina ［J］. World J Gastroenterol，2006，12 (9):1426-1429.

［23］ Perfumo C，Bonelli L，Menichini P，et al. Increased risk of colorectal adenomas in Italian subjects carrying the p53 PIN3 A2-Pro72 haplotype［J］. Digestion，2006，74(3-4):228-235.

［24］ Sotamaa K，Liyanarachchi S，Mecklin JP，et al. p53 codon 72 and MDM2 SNP309 polymorphisms and age of colorectal cancer onset in Lynch syndrome ［J］. Clin Cancer Res，2005，11 (19 Pt 1):6840-6844.

［25］ Krüger S，Bier A，Engel C，et al. The p53 codon 72 variation is associated with the age of onset of hereditary non-polyposis colorectal cancer (HNPCC)［J］. J Med Genet，2005，42(10):769-773.

［26］ Gemignani F，Moreno V，Landi S，et al. A TP53 polymorphism is associated with increased risk of colorectal cancer and with reduced levels of TP53 mRNA［J］. Oncogene，2004，23(10):1954-1956.

［27］ Schneider-Stock R，Boltze C，Peters B，et al. Selective loss of codon 72 proline p53 and frequent mutational inactivation of the retained arginine allele in colorectal cancer［J］. Neoplasia，2004，6(5):529-535.

［28］ Hamajima N，Matsuo K，Suzuki T，et al. No associations of p73 G4C14-to-A4T14 at exon 2 and p53 Arg72Pro polymorphisms with the risk of digestive tract cancers in Japanese ［J］. Cancer Lett，2002，181(1):81-85.

［29］ Sayhan N，Yazici H，Budak M，et al. P53 codon 72 genotypes in colon cancer. Association with human papillomavirus infection［J］. Res Commun Mol Pathol Pharmacol，2001，109(1-2):25-34.

［30］ Murata M，Tagawa M，Kimura M，et al. Analysis of a germ line polymorphism of the p53 gene in lung cancer patients;discrete results with smoking history［J］. Carcinogenesis，1996，17(2):261-264.

［31］ Kawajiri K，Nakachi K，Imai K，et al. Germ line polymorphisms of p53 and CYP1A1 genes involved in human lung cancer［J］. Carcinogenesis，1993，14(6):1085-1089.

［32］ Olschwang S，Laurent-Puig P，Vassal A，et al. Characterization of a frequent polymorphism in the coding sequence of the Tp53 gene in colonic cancer patients and a control population ［J］. Hum Genet，1991，86(4):369-370.

［33］ Sameer AS，Shah ZA，Syeed N，et al. TP53 Pro47Ser and Arg72Pro polymorphisms and colorectal cancer predisposition in an ethnic Kashmiri population［J］. Genet Mol Res，2010，9(2):651-660.

［34］ Sjalander A，Birgander R，Athlin L，et al. P53germ line haplotypes associated with increased risk for colorectal cancer［J］. Carcinogenesis，1995，16(7):1461-1464.

［35］ Dakouras A，Nikiteas N，Papadakis E，et al. P53Arg72 homozygosity and its increased incidence in left-sided sporadic colorectal adenocarcinomas，in a Greek-Caucasian population ［J］. Anticancer Res，2008，28(2A):1039-1043.

［36］ Wang JJ，Zheng Y，Sun L，et al. TP53 codon 72 polymorphism and colorectal cancer susceptibility:a Meta-analysis［J］. Mol Biol Rep，2011，38(8):4847-4853.

［37］ Tang NP，Wu YM，Wang B，et al. Systematic review and meta-analysis of the association between P53 codon 72 polymorphism and colorectal cancer［J］. Eur J Surg Oncol，2010，36(5):431-438.

［38］ Benhamou S，Lee WJ，Alexandrie AK，et al. Meta-and pooled analysis of the effects of glutathione Stransferase M1 polymorphisms and smoking on lung cancer risk ［J］. Carcinogenesis，2002，23(8):1343-1350.