格松

（青海省玉樹(shù)市隆寶鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站青海玉樹(shù)815000）

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羊弓形蟲(chóng)病血清學(xué)調(diào)查及分析

格松

（青海省玉樹(shù)市隆寶鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站青海玉樹(shù)815000）

弓形蟲(chóng)病是由剛地弓形蟲(chóng)引起的呈世界性分布的一種廣泛寄生于人和動(dòng)物有核細(xì)胞中的寄生性原蟲(chóng)?。?］。弓形蟲(chóng)為細(xì)胞內(nèi)原蟲(chóng)，宿主范圍十分廣泛，是一種能感染多種動(dòng)物的重要人畜共患寄生蟲(chóng)病，貓科動(dòng)物為其唯一的終末宿主。感染的貓通過(guò)糞便排出弓形蟲(chóng)卵囊，污染飼料、水源和環(huán)境，被認(rèn)為是弓形蟲(chóng)的重要傳染源。羊的弓形蟲(chóng)病除了造成懷孕母羊流產(chǎn)外，多數(shù)成年羊?yàn)殡[性感染，主要表現(xiàn)為懷孕母羊流產(chǎn)、死胎、先天畸形等，嚴(yán)重的母羊和羔羊都死于呼吸系統(tǒng)和神經(jīng)癥狀的癥狀。對(duì)免疫力低下或缺陷的患者危害更嚴(yán)重，給養(yǎng)羊業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失［2］。而且弓形蟲(chóng)是一種食源性原蟲(chóng)，嚴(yán)重威脅人類(lèi)的健康。

間接血凝技術(shù)（IHA）具有特異性強(qiáng)、敏感性高、價(jià)格低廉、操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，是流行病學(xué)調(diào)查和輔助診斷理想方法，現(xiàn)在國(guó)內(nèi)外已有多種弓形蟲(chóng)免疫診斷試劑盒［3］。為初步掌握青海省玉樹(shù)地區(qū)羊弓形蟲(chóng)病的感染水平和流行規(guī)律，切實(shí)做好該地區(qū)弓形蟲(chóng)病的監(jiān)測(cè)工作，本實(shí)驗(yàn)我們應(yīng)用間接血凝試驗(yàn)（IHA），對(duì)該地區(qū)7個(gè)規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)部分羊只進(jìn)行了血清學(xué)檢測(cè)，以期對(duì)弓形蟲(chóng)病在本地區(qū)的流行情況提供參考，對(duì)畜產(chǎn)品健康發(fā)展和人類(lèi)健康都具有重要意義。

1材料與方法

1.1血清樣品采集與處理

采集青海省玉樹(shù)地區(qū)7個(gè)規(guī)?；B(yǎng)羊場(chǎng)不同品種的羊血清共計(jì)560份，全部采用頸靜脈抽取適量的血液，做好標(biāo)記。將采集的血液擺成斜面，于37℃恒溫培養(yǎng)箱靜置1～2 h，置于4℃冰箱中24 h后分離血清，保存待檢。取待檢血清0.5 mL置于試管中，加入1%正常兔血清1.5 mL，56℃滅活30 min，加入未致敏的綿羊紅細(xì)胞2 mL，4℃過(guò)夜。

1.2主要試劑

弓形蟲(chóng)間接血凝試驗(yàn)診斷液，弓形蟲(chóng)標(biāo)準(zhǔn)陰性和陽(yáng)性對(duì)照血清及稀釋液等均購(gòu)自于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.3間接血凝試驗(yàn)檢測(cè)方法

1）鋪板在96孔V型凝集反應(yīng)板中加入稀釋液，每孔加入50μL。

2）待檢血清倍比稀釋每4孔一組，分別為一份樣品血清做對(duì)倍梯度稀釋?zhuān)旱谝豢准颖粶y(cè)樣品血清50μL，混勻后吸取50μL加入第二孔，混勻后吸取50μL加入第三孔，混勻后吸取50μL加入第四孔，混勻后吸取50μL棄去。另外每塊板凝集反應(yīng)板上設(shè)陰性血清、陽(yáng)性血清、空白稀釋液（不加血清）各一組。

3）加入抗原，每孔加衣原體屬抗原致敏綿羊紅細(xì)胞25μL，將凝集反應(yīng)板放在微量振蕩器振蕩 1 min，檢查各反應(yīng)孔紅細(xì)胞混勻與否，不出現(xiàn)紅細(xì)胞沉淀視為合格。將96孔V型反應(yīng)板放于無(wú)菌濕盒中靜置在37℃恒溫箱2 h后，進(jìn)行結(jié)果判定。

1.4結(jié)果判定

標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清各稀釋度應(yīng)完全凝集，標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、稀釋液空白對(duì)照不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立。實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立的條件下，稀釋度≥1∶64且凝集在（++）及以上的樣品判為陽(yáng)性；稀釋度≤1∶16（++）凝集的樣品判為陰性；介于二者之間判為可疑，可疑的樣品重新檢驗(yàn)，仍然可疑的判為陰性。

紅細(xì)胞全部凝集，在孔形成一層均勻的膜，布滿(mǎn)整個(gè)孔底者為“++++”；紅細(xì)胞多數(shù)凝集，在孔底形成一層薄膜，面積稍小者為“+++”；紅細(xì)胞部分凝集，在孔底形成薄層，邊緣松散或呈鋸齒狀者為“++”；紅細(xì)胞少量凝集，在孔底有小圓點(diǎn)者為“+”；紅細(xì)胞沉于孔底，但周?chē)还饣蛑行挠锌瞻哒邽椤啊馈?；紅細(xì)胞完全沉于孔底，呈光滑的圓點(diǎn)者為“-”?！?+”以上的凝集判為陽(yáng)性凝集。

2結(jié)果與分析

弓形蟲(chóng)間接血凝檢測(cè)顯示：從7個(gè)規(guī)?；驁?chǎng)采集的560份羊血清，陽(yáng)性數(shù)為92份，感染率為16.43%，且7個(gè)規(guī)?；B(yǎng)羊場(chǎng)都有感染，但不同羊場(chǎng)衣原體病感染率有所差異，最高的羊場(chǎng)陽(yáng)性率可達(dá)28.75%，最低的感染率為8.75%，該結(jié)果表明青海省玉樹(shù)地區(qū)羊群中普遍存在弓形蟲(chóng)病。

3討論

弓形蟲(chóng)病是一種重要的人獸共患寄生蟲(chóng)病，世界各地普遍存在，幾乎所有的溫血?jiǎng)游锒寄芨腥荆鳛楣蜗x(chóng)的儲(chǔ)存宿主，以貓的重要性最大。弓形蟲(chóng)是細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲(chóng)，常表現(xiàn)為隱性感染，沒(méi)有明顯的臨床特征，許多養(yǎng)殖單位不夠重視。并且弓形蟲(chóng)作為一種重要的食源性原蟲(chóng)，不僅對(duì)養(yǎng)羊業(yè)造成巨大的的經(jīng)濟(jì)損失，而且對(duì)人的身體健康也存在嚴(yán)重的危害。因此，應(yīng)該高度重視弓形蟲(chóng)病對(duì)養(yǎng)羊業(yè)的嚴(yán)重危害，做好預(yù)防和藥物治療工作，盡可能降低其給食品公共衛(wèi)生安全造成隱患。

我國(guó)羊弓形蟲(chóng)的感染比較嚴(yán)重，據(jù)國(guó)內(nèi)流行病學(xué)調(diào)查報(bào)道多數(shù)高于20%。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)青海省玉樹(shù)地區(qū)560份羊血清進(jìn)行弓形蟲(chóng)血清抗體的檢測(cè)，平均感染率為16.43%，最高陽(yáng)性率可達(dá)28.75%，可見(jiàn)該地區(qū)羊群中普遍存在弓形蟲(chóng)病的感。但由于整個(gè)地區(qū)羊群基數(shù)較大，本試驗(yàn)抽檢樣品數(shù)有限，且多數(shù)屬于規(guī)?；驁?chǎng)，結(jié)果具有一定的局限性，還需要進(jìn)一步進(jìn)行弓形蟲(chóng)病流行病學(xué)調(diào)查。（編輯：趙曉松）

參考文獻(xiàn)：

［1］陸承平.獸醫(yī)微生物學(xué)［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2001.378-382.

［2］李曉卉，陸艷，馬少麗.青海改良種綿羊弓形體病的血清學(xué)調(diào)查［J］.青海畜牧獸醫(yī)雜志，2004，34（1）：22.

［3］羅才慶，袁勻，黃劍梅，等.龍巖市部分地區(qū)牛、羊弓形蟲(chóng)病的血清學(xué)調(diào)查［J］.中國(guó)動(dòng)物保健，2013，15（7）：13-16.

doi：10.3969/j.issn.1008-4754.2016.6.029

作者簡(jiǎn)介：格松（1968-），男，藏族，青海玉樹(shù)人，中專(zhuān)，獸醫(yī)師，研究方向：畜牧獸醫(yī)。