羅 森，袁崇均，陳 帥，陳 雛，吳 燕，王 笳（四川省中醫(yī)藥科學(xué)院，成都 610041）

川射干葉的化學(xué)成分研究Δ

羅 森＊，袁崇均，陳 帥，陳 雛，吳 燕，王 笳（四川省中醫(yī)藥科學(xué)院，成都 610041）

目的：研究川射干葉的化學(xué)成分。方法：采用70%乙醇提取，硅膠柱層析及Sephadex LH-20色譜、薄層色譜對(duì)川射干葉的化學(xué)成分進(jìn)行分離純化，根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)分析鑒定化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從川射干葉中分離得到12個(gè)化合物，分別為5，7，4′-三羥基-6-甲氧基黃酮（1）、金合歡素-7-O-β-D-葡萄糖苷（2）、5-羥基-4′，7-二甲氧基異黃酮（3）、射干苷（4）、射干苷元（5）、野鳶尾苷（6）、二甲基射干苷元（7）、染料木素（8）、原兒茶酸（9）、異鼠李素-7-O-β-D-葡萄糖苷（10）、胡蘿卜苷（11）、十四酸（12）。結(jié)論：化合物1、2、3均為首次從該屬植物中分離得到，該研究為川射干葉質(zhì)量評(píng)價(jià)奠定了一定基礎(chǔ)。

川射干葉；化學(xué)成分；結(jié)構(gòu)鑒定

川射干為鳶尾科植物鳶尾Iris tectorum Maxim.的干燥根莖，具有清熱解毒、祛痰、利咽的功效，用于熱毒痰火郁結(jié)、咽喉腫痛、痰涎壅盛、咳嗽氣喘［1］，主產(chǎn)于四川、重慶、貴州、云南、廣西等省市，富含總黃酮成分且提取物有很強(qiáng)的藥理作用［2］。我院以川射干研制的五類新藥“川射干黃酮膠囊”已獲新藥證書(shū)（批準(zhǔn)號(hào)：國(guó)藥證字Z20140006），為充分利用川射干這一植物資源，發(fā)現(xiàn)川射干植物新的藥用部位，本課題組對(duì)川射干葉化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，其70%乙醇提取物經(jīng)石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后，乙酸乙酯部分經(jīng)硅膠柱層析、Sephadex LH-20柱等反復(fù)分離純化，得到12個(gè)單體化合物，分別是：5，7，4′-三羥基-6-甲氧基黃酮（5-7-4′-Trihydroxyl-6-methoxy isoflavone，1）、金合歡素-7-O-β-D-葡萄糖苷（Tilianin-7-O-β-D-glucopyranoside，2）、5-羥基-4′，7-二甲氧基異黃酮（5-Hydroxyl-4′，7-dimethoxy-isoflavone，3）、射干苷（Tectoridin，4）、射干苷元（Tectorigenin，5）、野鳶尾苷（Iridin，6）、二甲基射干苷元（Dimethyl tectorigenin，7）、染料木素（Genistein，8）、原兒茶酸（Protocatechuic acid，9）、異鼠李素-7-O-β-D-葡萄糖苷（Isorhamnetin-7-O-β-D-glucoside，10）、胡蘿卜苷（Daucosterol，11）、十四酸（Tetradecanoic acid，12）。

1 材料

1.1 儀器

AVⅡ型400 M核磁共振儀（瑞士Burker公司）；TSQ Quantum Ultra型液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）儀（美國(guó)Thermo Scientific公司）；UV759S型紫外分光光度計(jì)、TG328A型分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；FTIR 8300型紅外檢測(cè)儀（日本Shimadzu公司）；RE-5205、RE-52-99型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮儀器廠）；SHB-ⅢS型循環(huán)真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）。

1.2 試劑

柱色譜硅膠、薄層色譜硅膠H、薄層色譜硅膠GF254（青島海洋化工廠）；Sephadex LH-20柱（美國(guó)Pharmacia公司）；乙醇、乙酸乙酯、石油醚（60～90℃）、正丁醇均為分析純，水為超純水。

1.3 藥材

川射干葉由本院中藥種植與資源所夏燕莉副研究員提供，采自川射干培育基地（四川省成都市雙流縣），經(jīng)鑒定為真品，標(biāo)本存于本院。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取與分離

取干燥的川射干葉10 kg，粉碎成粗粉，用6倍70%乙醇回流提取3次，每次1 h，濾過(guò)，提取液減壓濃縮得浸膏，浸膏依次用石油醚（60～90℃）、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓濃縮得各部位浸膏：石油醚萃取部位（73 g）、乙酸乙酯萃取部位（207 g）、正丁醇萃取部位（92 g）。

對(duì)石油醚萃取部位進(jìn)行系統(tǒng)分離，經(jīng)硅膠柱，以石油醚-乙酸乙酯（50∶1→10∶1）梯度洗脫，得流分適量，流分經(jīng)薄層色譜鑒別富集濃縮，再經(jīng)反復(fù)硅膠洗脫、分離純化，得到化合物9（24 mg）、12（36 mg）。對(duì)乙酸乙酯萃取部位系統(tǒng)分離，經(jīng)硅膠柱，以石油醚-乙酸乙酯（5∶1→0∶1）梯度洗脫，得流分適量，流分經(jīng)薄層色譜鑒別富集濃縮，再經(jīng)反復(fù)硅膠洗脫、Sephadex LH-20柱分離純化，得到化合物1（19 mg）、3（23 mg）、5（2.7 g）、7（38 mg）、8（47 mg）。對(duì)正丁醇萃取部位進(jìn)行系統(tǒng)分離，經(jīng)硅膠柱，以石油醚-乙酸乙酯（50∶1→10∶1）梯度洗脫得流分適量，流分經(jīng)薄層色譜鑒別富集濃縮，再經(jīng)反復(fù)硅膠洗脫、Sephadex LH-20柱分離純化，得到化合物2（13 mg）、4（0.8 g）、6（33 mg）、10（23 mg）、11（30 mg）。

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色針晶，C16H12O6，mp：290～292℃。ESI-MS m/z 301［M+H］+；1H-NMR（DMSO，400 MHz）δ：13.05（1H，s，5-OH），10.68（1H，brs，7-OH），10.33（1H，brs，4′-OH），7.93（2H，d，J=7.0 Hz，H-2′，6′），6.94（2H，d，J=7.0 Hz，H-3′，5′），6.75（1H，s，H-2），6.60（1H，s，H-8），3.73（3H，s，6-OCH3）。13C-NMR（400 MHz，DMSO）δ：163.6（C-2），102.5（C-3），182.1（C-4），152.6（C-5），131.5（C-6），157.2（C-7），94.3（C-8），152.4（C-9），104.4（C-10），121.1（C-1′），128.4（C-2′，6′），116.1（C-3′，5′），161.3（C-4′）。與文獻(xiàn)［3］對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為5，7，4′-三羥基-6-甲氧基黃酮（5-7-4′-Trihydroxyl-6-methoxy isoflavone）。

化合物2：淡黃色粉末，C22H22O10，mp：262～264℃。ESI-MS m/z 445［M-H］-，283［M-Glu］-；1H-NMR（DMSO，400 MHz）δ：12.92（1H，s，5-OH），6.72（1H，s，H-3），8.10（2H，d，J= 8.9 Hz，H-3′，5′），7.16（2H，dd，J=8.9 Hz，H-2′，6′），6.82（1H，d，J=2.1 Hz，H-8），6.49（1H，d，J=2.1 Hz，H-6），3.90（3H，s，4′-OCH3），5.05（1H，d，J=7.4 Hz，H-1″）。13C-NMR（400 MHz，DMSO）δ：163.5（C-2），103.9（C-3），182.0（C-4），162.1（C-5），99.6（C-6），163.1（C-7），94.7（C-8），156.6（C-9），105.4（C-10），122.5（C-1′），128.3（C-2′，6′），114.7（C-3′，5′），161.3（C-4′），55.4（4′-OCH3），99.7（Glu-1），73.2（Glu-2），77.4（Glu-3），69.6（Glu-4），76.4（Glu-5），60.7（Glu-6）。與文獻(xiàn)［4］對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為金合歡素-7-O-β-D-葡萄糖苷（Tilianin-7-O-β-D-glucopyranoside）。

化合物3：無(wú)色針狀結(jié)晶，C17H14O5，mp：268～270℃。ESI-MS m/z 297［M-H］-；1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：12.87（1H，s，5-OH），7.88（1H，s，H-2），6.38（1H，d，J=2.2 Hz，H-6），6.46（1H，d，J=2.2 Hz，H-8），7.45（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′），6.98（2H，d，J=8.7 Hz，H-3′，5′），3.87（3H，s，7-OCH3），3.84（3H，s，4′-OCH3）。13C-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：151.5（C-2），123.2（C-3），180.1（C-4），162.2（C-5），93.5（C-6），164.6（C-7），94.3（C-8），158.8（C-9），107.6（C-10），124.7（C-1′），130.2（C-2′，6′），114.8（C-3′，5′），158.9（C-4′），56.2（7-OCH3），55.9（4′-OCH3）。與文獻(xiàn)［5］對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為5-羥基-4′，7-二甲氧基異黃酮（5-Hydroxyl-4′，7-dimethoxy-isoflavone）。

化合物4：白色結(jié)晶，C22H22O11，mp：252～254℃，HCl-Mg反應(yīng)呈玫瑰紅色，AlCl3反應(yīng)呈鮮黃色。ESI-MS m/z 461［M-H］-；1H-NMR（DMSO，400 MHz）δ：12.92（1H，s，5-OH），9.58（1H，s，4′-OH），8.44（1H，s，H-2），7.39（2H，d，J=8.5 Hz，，H-2′，6′），6.82（2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′），6.85（1H，s，H-8），5.07（1H，d，J=8.0 Hz，H-1″），3.80（3H，s，6-OCH3）。與文獻(xiàn)［6］對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為射干苷（Tectoridin）。

化合物5：淺黃色針晶，C16H12O6，mp：214～216℃。HCl-Mg反應(yīng)顯櫻紅色。ESI-MS m/z 299［M-H］-；1H-NMR（DMSO，400 MHz）δ：13.09（1H，s，5-OH），10.77（1H，s，7-OH），9.58（1H，s，4′-OH），8.34（1H，s，H-2），7.37（2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′），6.82（2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′），6.50（1H，s，H-8），3.74（3H，s，6-OCH3）。與文獻(xiàn)［6］對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為射干苷元（Tectorigenin）。

化合物6：白色粉末，C24H26O13，mp：211～213℃。FeCl3和Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性。ESI-MS m/z 521［M-H］-；1H-NMR（DMSO，400 MHz）δ：12.91（1H，s，5-OH），9.27（1H，s，3′-OH），8.49（1H，s，H-2），6.90（1H，s，H-8），6.73（1H，d，J= 2.0 Hz，H-2′），6.68（1H，d，J=2.0 Hz，H-6′），5.09（1H，d，J=7.0 Hz，H-1″），3.79（3H，s，5′-OCH3），3.77（3H，s，4′-OCH3），3.70（3H，s，6-OCH3）。與文獻(xiàn)［6］對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為野鳶尾苷（Iridin）。

化合物7：白色針晶，C18H16O6，mp：189～191℃；ESI-MS m/z 521［M-H］-；1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：12.81（1H，s，5-OH），7.89（1H，s，H-2），7.45（2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′），6.98（2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′），6.46（1H，s，H-8），3.95（3H，s，6-OCH3），3.92（3H，s，7-OCH3），3.84（3H，s，4′-OCH3）。與文獻(xiàn)［7］對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為5-羥基-6，7，4′-三甲氧基異黃酮（5-Hydroxy-6，7，4′-trimethoxyisoflavone），即二甲基射干苷元（Dimethy tectorigenin）。

化合物8：淡黃色針晶，C15H10O5，mp：265～267℃；ESI-MS m/z 269［M-H］-；1H-NMR（DMSO，400 MHz）δ：12.92（1H，s，5-OH），10.94（1H，s，7-OH），9.60（1H，s，4′-OH），8.30（1H，s，H-2），7.35（2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′），6.85（2H，d，J= 8.5 Hz，H-3′，5′），6.36（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.23（1H，d，J= 2.0 Hz，H-6）。與文獻(xiàn)［7］對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為5，7，4′-三羥基異黃酮（5，7，4′-Trihydroxyisoflavone），即染料木素（Geristein）。

化合物9：淡黃色粉末，C7H6O4，mp：199～200℃。ESI-MS m/z 153［M-H］-；1H-NMR（CD3COCD3，400 MHz）δ：12.29（1H，s，1-COOH），9.65（1H，s，3-OH），9.26（1H，s，4-OH），7.32（1H，d，J=2.0 Hz，H-2），7.28（1H，dd，J=8.5，2.0 Hz，H-6），6.78（1H，d，J=8.5 Hz，H-5）。與文獻(xiàn)［8］對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為原兒茶酸（Protocatechuic acid）。

化合物10：黃色顆粒狀結(jié)晶，C22H22O12，mp：251～253℃，ESI-MS m/z 521［M-H］-；1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：7.75（1H，d，J=2.4 Hz，H-6′），7.69（1H，d，H-2′），6.92（1H，d，J= 8.2 Hz，H-5′），6.88（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.47（1H，d，J=2.4 Hz，H-6），5.03（1H，d，J=7.3 Hz，H-1″），3.84（3H，s，3′-OCH3）。與文獻(xiàn)［9］對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為異鼠李素-7-O-β-D-葡萄糖苷（Isorhamnetin-7-O-β-D-glucoside）。

化合物11：白色粉末，C35H60O6，mp：288～290℃。Liebermann-Burchard和Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性。ESI-MS m/z 575［M-H］-；1H-NMR（DMSO，400 MHz）δ：5.32（1H，H-6），4.25（1H，d，J=7.7 Hz，H-1′），3.40（1H，m，H-3），0.95（3H，s，H-19），0.72～0.93（12H，m，H-21，26，27，29），0.68（3H，s，H-18）。與文獻(xiàn)［10］對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，薄層色譜與胡蘿卜苷對(duì)照品比移值及顏色一致，與胡蘿卜苷對(duì)照品混合熔點(diǎn)不下降，可確定該化合物為胡蘿卜苷（Daucosterol）。

化合物12：白色粉末，C14H28O2，mp：54～55℃。ESI-MS m/z 227［M-H］-；1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：0.88（3H，t，J= 7.0 Hz，14-CH3），1.63（2H，m，β-CH2），2.34（2H，t，J=7.5 Hz，α-CH2）。與文獻(xiàn)［10］對(duì)照，其波譜數(shù)據(jù)基本一致，可確定該化合物為十四酸（Tetradecanoic acid）。

3 討論

2015年版《中國(guó)藥典》（一部）上規(guī)定川射干全年均可采挖，而實(shí)際上藥農(nóng)一般均在9～11月份采挖，取其根莖，保留側(cè)芽以留作種苗。此時(shí)的川射干葉還未倒苗枯萎，采摘葉也不會(huì)影響根莖的生長(zhǎng)，這就為綜合利用川射干這一藥材資源提供了便利。

本研究從川射干葉中分離得到12個(gè)化合物，其中化合物1、2、3均為首次從該屬植物中分離得到。筆者所在課題組對(duì)川射干進(jìn)行了近20年的研究，有大量的研究基礎(chǔ)，在化合物4～12的結(jié)構(gòu)鑒定時(shí)，根據(jù)以前的波譜研究結(jié)果，只對(duì)1H譜進(jìn)行了印證，省略了13C譜。以上的研究工作為川射干葉質(zhì)量評(píng)價(jià)奠定了一定基礎(chǔ)。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部［S］.2015年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：41-42.

［2］王笳，袁崇均，游宇光.HPLC法測(cè)定川射干中鳶尾黃酮苷的含量［J］.中國(guó)藥房，2008，19（6）：440.

［3］Liu YL，Mabry TJ.Flavonoids from Artemisia frigida［J］. Phytochemistry，1981，20（6）：1 389.

［4］劉金旗，沈其權(quán)，劉勁松.貢菊化學(xué)成分的研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2001，26（8）：547.

［5］ Talukdar AC，Jain N，Krishnamurty HG，et al.Anisoflavone from Myristica malabarica［J］.Phytochemistry，2000，53（1）：155.

［6］袁崇均，王笳，陳帥.川射干化學(xué)成分研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2008，20（3）：444.

［7］吉文亮，秦民堅(jiān)，王崢濤.射干的化學(xué)成分研究（Ⅰ）［J］.中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，32（3）：197.

［8］馬雨涵，林彬彬，劉慧.鳶尾葉的化學(xué)成分［J］.植物資源與環(huán)境學(xué)報(bào)，2011，20（4）：88.

［9］賈忠建，朱廣軍，王繼和.唐古特白刺黃酮類化合物的研究［J］.植物學(xué)報(bào)，1989，31（3）：241.

［10］張正付，邊寶林，楊健.茉莉根化學(xué)成分的研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2004，29（3）：237.

Study on the Chemical Compositions of the Leaves of Iris tectorum

LUO Sen，YUAN Congjun，CHEN Shuai，CHEN Chu，WU Yan，WANG Jia（Sichuan Academy of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 610041，China）

OBJECTIVE：To study the chemical compositions of the leaves of Iris tectorum.METHODS：Using 70%ethanol for extracting，silica gel column chromatography，Sephadex LH-20 chromatography and thin-layer chromatography were used to isolate and purify the chemical compositions of the leaves of I.tectorum，the compound structures were analyzed and identified according to the physicochemical properties and spectral data.RESULTS：12 compounds were isolated from the leaves of I.tectorum，namely 5，7，4′-trihydroxy-6-methoxy isoflavone（1），tiliamin-7-O-β-D-glucopyranoside（2），5-hydroxy-4′，7-dimethoxy-isoflavone（3），tectoridin（4），tectorigenin（5），iridin（6），dimethyl tectorigenin（7），genistein（8），protocatechuic acid（9），isorhamnetin-7-O-β-D-glucoside（10），daucosterol（11），tetradecanoic acid（12）.CONCLUSIONS：Compounds 1，2，3 are isolated from the plants of the genus for the first time，and the study has laid the foundation for the quality evaluation of I.tectorum.

Leaves of Iris tectorum；Chemical composition；Structure identification

R917

A

1001-0408（2016）30-4267-03

2016-01-18

2016-03-08）

（編輯：張 靜）

四川省公益性科研院所基本科研項(xiàng)目（No.A-2014N-3）

＊助理研究員。研究方向：中藥學(xué)。電話：028-85237395。E-mall：mnmls@163.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.30.29