王　璇

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穿孔素與顆粒酶B對診斷鼻NK/T細胞淋巴瘤的價值

王璇

【摘要】目的 探討穿孔素與顆粒酶B對診斷鼻NK/T細胞淋巴瘤的價值。方法 收集10例2013年2月～2014年12月我院診斷為鼻NK/T細胞淋巴瘤的患者。選取同期我院診斷為“B細胞淋巴瘤”的10例患者與診斷為“外周T細胞淋巴瘤”的10例患者作為對照。分析（1）鼻NK/T細胞淋巴瘤組織學。（2）鼻NK/T細胞淋巴瘤、B細胞淋巴瘤和外周T細胞淋巴瘤穿孔素和顆粒酶B表達情況。結(jié)果 （1）瘤細胞呈多形性，散布或彌漫性分布，血管呈“袖套樣”改變。（2）鼻NK/T細胞淋巴瘤、B細胞淋巴瘤和外周T細胞淋巴瘤穿孔素和顆粒酶B表達陽性率分別為（80%，70%）、（20%，30%）、（40%，30%），3組結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結(jié)論 本次研究認為鼻NK/T細胞淋巴瘤中穿孔素與顆粒酶B的表達陽性率高于B細胞淋巴瘤和外周T細胞淋巴瘤，可作為診斷標記物。

【關(guān)鍵詞】穿孔素；顆粒酶B；鼻NK/T細胞淋巴瘤

作者單位：450000 鄭州人民醫(yī)院

穿孔素和顆粒酶B主要存在于活化的細胞毒T淋巴細胞和NK細胞中，是活化的細胞毒淋巴細胞和自然殺傷細胞發(fā)揮細胞毒性作用的主要效應分子［1］。穿孔素能在靶細胞膜上形成跨膜通道，引起靶細胞滲透壓改變而導致細胞溶解性死亡。顆粒酶是外源性的絲氨酸蛋白酶，能通過不同途徑激起細胞的死亡［2］。目前有學者［3］發(fā)現(xiàn)穿孔素和顆粒酶B可用于鼻NK/T細胞淋巴瘤診斷中，因此我們擬收集2013年2月～2014年12月我院診斷為鼻NK/T細胞淋巴瘤的患者，使用免疫組化技術(shù)檢測該類患者體內(nèi)穿孔素與顆粒酶B的表達和分布情況。

1　資料與方法

1.1病例選擇

收集10例2013年2月～2014年12月我院診斷為鼻NK/T細胞淋巴瘤的患者。選取同期我院診斷為“B細胞淋巴瘤”的10例患者與診斷為“外周T細胞淋巴瘤”的10例患者作為對照。鼻NK/T細胞淋巴瘤組平均年齡（52.4±12.7）歲，男性5例，女性5例；B細胞淋巴瘤組平均年齡（53.7±11.4）歲，男性4例，女性6例；外周T細胞淋巴瘤組平均年齡（55.8±13.4）歲，男性7例，女性3例；3組人員性別，年齡無差異。

1.2入選標準

（1） 鼻NK/T細胞淋巴瘤診斷標準參考WHO淋巴瘤分類的形態(tài)學及免疫組化標準。（2）年齡＞18周歲。（3）自愿參加試驗。

1.3排除標準

（1）納入研究時腦、肝、腎等重要臟器功能不全者、神經(jīng)肌肉疾病者，軀體疾病不能配合檢查者。（2）語言溝通障礙者。

1.4研究方法

對所有病理標本使用福爾馬林固定，制成“淋巴瘤組織芯片”蠟塊，行HE染色。分析（1）鼻NK/T細胞淋巴瘤組織學。（2）鼻NK/T細胞淋巴瘤、B細胞淋巴瘤和外周T細胞淋巴瘤穿孔素和顆粒酶B表達情況。結(jié)果判斷標準：穿孔素、顆粒酶B細胞質(zhì)呈棕黃色顆粒為陽性。

1.5統(tǒng)計學方法

研究數(shù)據(jù)錄入SPSS 18.0分析系統(tǒng)，計數(shù)資料采用χ2檢驗，當P＜0.05，判斷差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1鼻NK/T細胞淋巴瘤組織學分析

瘤細胞呈多形性，散布或彌漫性分布，血管呈“袖套樣”改變。

2.23組穿孔素和顆粒酶B表達對比

10例鼻NK/T細胞淋巴瘤標本中8例可見大量穿孔素，7例顆粒酶B陽性表達；10例B細胞淋巴瘤中2例表達穿孔素，3例表達顆粒酶B；10例外周T細胞淋巴瘤患者中4例少量表達穿孔素，3例表達顆粒酶B。鼻NK/T細胞淋巴瘤、B細胞淋巴瘤和外周T細胞淋巴瘤穿孔素和顆粒酶B表達陽性率分別為（80%，70%）、（20%，30%）、（40%，30%），3組結(jié)果比較差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

3　討論

穿孔素是人體內(nèi)一類由PRF1基因編碼的蛋白質(zhì)，分子量為67 kD，存在于細胞毒性T淋巴細胞和NK細胞胞質(zhì)的細胞毒顆粒中。顆粒酶B屬于絲氨酸蛋白酶家族成員，兩者協(xié)同發(fā)揮殺傷靶細胞的細胞毒性作用。

3.1穿孔素的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)

其結(jié)構(gòu)和功能類似補體C3，內(nèi)部由多個二硫鍵連接，由534個氨基酸組成，表達和分泌穿孔素的細胞僅限于細胞毒性淋巴細胞，NK細胞接觸靶細胞5min后，穿孔素mRNA消失，1 h后又重新出現(xiàn)［4］。

3.2顆粒酶B的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)

顆粒酶是一組絲氨酸蛋白酶，通過胞吐作用釋放人靶細胞致靶細胞損傷。目前在活化的細胞毒T淋巴細胞中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)11種顆粒酶［5］。

3.3穿孔素和顆粒酶B的作用機制

穿孔素和顆粒酶B介導的細胞毒途徑是機體抗腫瘤的主要方式之一。穿孔素在靶細胞膜上聚合形成活性孔道，在Ca2+作用下形成滲透壓反差，導致靶細胞脹裂壞死。顆粒酶B受靶細胞抗原刺激后，嵌入細胞膜的雙層磷脂中，激活自溶性內(nèi)切酶，使DNA斷裂降解［6］。

3.4穿孔素和顆粒酶B的臨床價值

穿孔素和顆粒酶在臨床主要是發(fā)揮免疫監(jiān)視功能，抵御內(nèi)外環(huán)境中的致病物質(zhì)的危害。有學者［7］提出觀察穿孔素和顆粒酶B在腫瘤細胞上的分布，可以判斷機體中抗腫瘤的情況。同樣本次研究中我們發(fā)現(xiàn)鼻NK/T細胞淋巴瘤、B細胞淋巴瘤和外周T細胞淋巴瘤穿孔素和顆粒酶B表達陽性率分別為（80%，70%）、（20%，30%）、（40%，30%），3組結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。此外本次研究中得出非NK/T細胞淋巴瘤中穿孔素和顆粒酶B存在陽性表達，大多陽性細胞呈散在分布，可能與機體抗腫瘤免疫情況有關(guān)，但還有待于大樣本進一步研究闡明。還有學者在再生障礙性貧血中穿孔素和顆粒酶的大量分泌可以導致骨髓造血細胞凋亡和程序性死亡，導致紅細胞和血紅蛋白減少。有學者指出非霍奇金B(yǎng)細胞淋巴瘤存在大量活化T細胞亞群時，患者預后不良。此外急性排斥的移植物中有學者發(fā)現(xiàn)有大量的單核細胞浸潤，可能與排斥反應有關(guān)。有學者進一步對移植大鼠的心、腎等移植器官進行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)穿孔素和顆粒酶B基因的表達水平顯著高于同基因移植者。還有學者發(fā)現(xiàn)在類風濕性關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)滑液中表達顆粒酶A和穿孔素，可能與淋巴細胞介導的細胞毒作用相關(guān)［8］。

因此，本次研究認為鼻NK/T細胞淋巴瘤中穿孔素與顆粒酶B的表達陽性率高于B細胞淋巴瘤和外周T細胞淋巴瘤，可作為診斷標記物。

參考文獻

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The Diagnostic Value of Perforin and Granzyme B in Nasal NK/ T Cell Lymphoma

WANG Xuan People s Hospital of Zhengzhou City，Zhengzhou 450000，China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the value nasal NK/T cell lymphoma with the Perforin and granzyme B.Methods 10 cases of nasal NK/T cell lymphoma diagnosed in our hospital from February 2013 to December 2014 were collected.In the same period，10 patients diagnosed with B cell lymphoma and 10 patients diagnosed as peripheral T cell lymphoma were selected as control group.Analysis of（1）nasal NK/T cell lymphoma histology.（2）the expression of B in nasal NK/T cell lymphoma， B cell lymphoma and peripheral T cell lymphoma.Results （1） the tumor cells were pleomorphic，scattered or diffuse distribution of blood vessels .（2） nasal NK / T cell lymphoma， B-cell lymphoma and peripheral T cell lymphoma of Perforin and granzyme B expression positive rate （80%，70%），（20%，30%），（40%，30%），respectively.Among the 3 groups，the difference was statistically significant（P＜0.05）.Conclusion The positive rate of Perforin and granzyme B expression in nasal NK/T cell lymphoma was higher than that in B cell lymphoma and peripheral T cell lymphoma，which can be used as diagnostic marker.

【Key words】Perforin，Granzyme B，Nasal NK/T cell lymphoma

doi：10.3969/j.issn.1674-9316.2016.04.121

【中圖分類號】R739.6

【文獻標識碼】A

【文章編號】1674-9316（2016）04-0169-02