曾 莉

（四川省樂(lè)山市長(zhǎng)征藥業(yè)股份有限公司，四川樂(lè)山 614006）

旋光法用于硫酸慶大霉素化學(xué)濃度檢測(cè)的方法學(xué)驗(yàn)證

曾 莉

（四川省樂(lè)山市長(zhǎng)征藥業(yè)股份有限公司，四川樂(lè)山 614006）

由于旋光法測(cè)定濃度快速且準(zhǔn)確的特性，因此在藥品生產(chǎn)質(zhì)量檢驗(yàn)中的應(yīng)用日益廣泛。在硫酸慶大霉素提煉工序成品液的質(zhì)量控制中，如何確保旋光法應(yīng)用的切實(shí)可行，就需要從線性、重現(xiàn)性、回收率、溫度、專屬性五個(gè)方面對(duì)該方法進(jìn)行驗(yàn)證。

旋光法；線性；重現(xiàn)性；回收率

旋光法是一種很早就出現(xiàn)并應(yīng)用廣泛地研究分子非對(duì)稱性結(jié)構(gòu)的光學(xué)方法。由于旋光法所用的儀器簡(jiǎn)單，操作方便快速，普遍適用于制藥廠或醫(yī)院藥房對(duì)中間體的質(zhì)量控制與快速分析。根據(jù)硫酸慶大霉素有旋光性的特點(diǎn)，在該藥品提煉工序成品液的質(zhì)量控制中，本文將從線性、重現(xiàn)性、回收率、溫度、專屬性五個(gè)方面對(duì)該方法進(jìn)行驗(yàn)證，得出旋光法適用于硫酸慶大霉素提煉工序成品液化學(xué)濃度檢測(cè)的結(jié)論。

1 旋光法的基本原理

1.1 旋光

普通光波是一種在各個(gè)方向上振動(dòng)的射線，它們與光的傳播方向垂直。如果令其通過(guò)一個(gè)尼科爾（Nicol）棱鏡（平面偏振片），則只有那些振動(dòng)方向和棱鏡晶軸平行的射線才能通過(guò)。這種只在一特定面上振動(dòng)的光叫做平面偏振光。一束平面偏振光可以看成是由兩個(gè)振幅和速度相同而螺旋前進(jìn)方向恰好相反的圓偏振成分疊加而成。一般規(guī)定，若螺旋前進(jìn)方向是順時(shí)針時(shí)，稱為右旋偏振光；反之，若螺旋前進(jìn)方向是逆時(shí)針時(shí)，稱為左旋偏振光。由于硫酸慶大霉素結(jié)構(gòu)中含有不對(duì)稱的碳原子，具有左旋性質(zhì)，故可以用旋光儀測(cè)定其濃度。

1.2 旋光度

將一束平面偏振光通過(guò)介質(zhì)，若左右旋偏振光在某種介質(zhì)中的折射率不同，則它們通過(guò)介質(zhì)的速度將不相同，因而由疊加產(chǎn)生的平面偏振光的振動(dòng)方向也會(huì)改變。平面偏振光振動(dòng)方向的改變相當(dāng)于原有的振動(dòng)平面在通過(guò)介質(zhì)后轉(zhuǎn)了一個(gè)角度α，稱為旋光度。在一定的波長(zhǎng)和溫度條件下，硫酸慶大霉素溶液濃度的高低與旋光度的大小成正比。

2 旋光法測(cè)定儀器、器具和藥品

2.1 儀器

WZZ-2S數(shù)字式自動(dòng)旋光儀（光源為GP20Na-1型鈉光燈），編號(hào)L500275，上海精密科學(xué)儀器有限公司；PL203型電子分析天平（感量為0.1mg），編號(hào)1229050162，梅特勒—托利多儀器（上海）有限公司。

2.2 器具

100mL容量瓶；50mL容量瓶；燒杯。

2.3 硫酸雙氫鏈霉素原粉藥品

四川長(zhǎng)征藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)SC－GM-20161001，生物效價(jià)610u/mg（濕品）。

3 旋光法試驗(yàn)操作及分析

3.1 旋光法測(cè)定操作步驟

將樣品放至室溫。打開(kāi)WZZ-2S數(shù)字式自動(dòng)旋光儀的電源開(kāi)關(guān)，預(yù)熱20min，再打開(kāi)測(cè)量開(kāi)關(guān)。將新鮮蒸餾水緩緩注入長(zhǎng)1dm的旋光管，使無(wú)氣泡存在，蓋上擦干的玻璃片，旋上金屬帽，用紗布擦干外部，放入樣品槽中，蓋上箱蓋，校正零點(diǎn)，復(fù)測(cè)3次。打開(kāi)箱蓋，取出空白旋光管，將樣品緩緩注入旋光管中，同上操作，測(cè)定樣品旋光度，復(fù)測(cè)3次，用測(cè)得的旋光度查回歸曲線表，即得硫酸慶大霉素的化學(xué)濃度。

3.2 線性范圍試驗(yàn)

3.2.1 認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)

相關(guān)系數(shù)R≥0.999 9。

3.2.2 試驗(yàn)步驟與結(jié)果

用硫酸慶大霉素原粉作為標(biāo)準(zhǔn)品，批號(hào)SC-GM-20161001，濕品效價(jià)610u/mg，精密稱取適量置50mL容量瓶中，加純化水溶解并稀釋至刻度，搖勻。配成1萬(wàn)u/mL、4萬(wàn)u/mL、7萬(wàn)u/mL、10萬(wàn)u/mL、13萬(wàn)u/mL、16萬(wàn)u/mL、19萬(wàn)u/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別在旋光儀上測(cè)定旋光值，根據(jù)旋光值，作線性回歸方程并計(jì)算相關(guān)系數(shù)。

3.2.2.1 稱量

表1 試樣稱量 g

3.2.2.2 硫酸慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液理論濃度的計(jì)算

表2 硫酸慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液理論濃度

3.2.2.3 硫酸慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液旋光值的測(cè)定

表3 硫酸慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液旋光值

3.2.3 相關(guān)性

計(jì)算線性回歸方程為Y=5 599.129 1X-60.641 7；相關(guān)系數(shù)R=0.999 996 11。

3.2.4 試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明硫酸慶大霉素在1萬(wàn)u/mL～19萬(wàn)u/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.3 重現(xiàn)性試驗(yàn)

3.3.1 認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)

相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD≤1.0%

3.3.2 試驗(yàn)步驟與結(jié)果

取上述10萬(wàn)u/mL的硫酸慶大霉素溶液，在旋光儀上連續(xù)測(cè)5次，記錄下5次所測(cè)的旋光值，帶入3.2.3的線性回歸方程計(jì)算出實(shí)測(cè)濃度。

表4 硫酸慶大霉素溶液實(shí)測(cè)濃度

3.3.3 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

計(jì)算5次平均濃度為100 881u/mL，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.05%。

3.3.4 重現(xiàn)性結(jié)果

符合重現(xiàn)性試驗(yàn)要求。

3.4 回收率試驗(yàn)

3.4.1 認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)

回收率≥99.0%。

3.4.2 試驗(yàn)步驟與標(biāo)準(zhǔn)

將3.2.2.3所測(cè)得的旋光值帶入回歸方程進(jìn)行計(jì)算，得實(shí)測(cè)硫酸慶大霉素溶液濃度，與標(biāo)準(zhǔn)濃度相比計(jì)算回收率。

表5 硫酸慶大霉素溶液回收率

3.4.3 試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明回收率平均值為100.15%；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.51%。試驗(yàn)結(jié)果符合要求。

3.5 溫度對(duì)溶液旋光度的影響

3.5.1 認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)

相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤1.0%

3.5.2 試驗(yàn)步驟與結(jié)果

取3.2.2中的10萬(wàn)u/mL的硫酸慶大霉素溶液分別在15℃、20℃、25℃、30℃下測(cè)定旋光值并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差：

表6

3.5.3 平均濃度

10萬(wàn)u/ml的硫酸慶大霉素溶液分別在15℃、20℃、25℃、30℃下測(cè)定旋光值經(jīng)計(jì)算平均濃度100 864u/mL，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差0.03%。

3.5.4 試驗(yàn)結(jié)論

試驗(yàn)證明用旋光法測(cè)定硫酸慶大霉素，溫度在10～30℃內(nèi)對(duì)測(cè)定結(jié)果基本無(wú)影響。

3.6 專屬性試驗(yàn)

3.6.1 認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)

相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤1.0%

3.6.2 試驗(yàn)步驟與結(jié)果

在硫酸慶大霉素提煉工序中，需要加入解吸氨解吸飽和樹(shù)脂，并用稀硫酸調(diào)pH，因此在本試驗(yàn)中輔料以解吸氨和稀硫酸作為考察對(duì)象。取3.2.2中的10萬(wàn)u/mL的溶液20mL測(cè)定旋光值（樣一），再加入1mL4.5%解吸氨溶液，并用6.0mol/L的硫酸溶液調(diào)節(jié)pH至4.8～5.5（樣二），測(cè)定旋光值并計(jì)算濃度進(jìn)行比較。

表7 試樣旋光值及濃度對(duì)比

3.6.3

10萬(wàn)u/mL未加輔料的硫酸慶大霉素溶液濃度為100 892u/ mL；10萬(wàn)u/mL加了輔料并用6.0mol/L的硫酸溶液調(diào)節(jié)pH至5.4后的硫酸慶大霉素溶液濃度為100 892u/mL。兩種溶液的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0。

4 旋光法試驗(yàn)結(jié)論及評(píng)價(jià)

試驗(yàn)結(jié)果表明，用旋光法測(cè)定硫酸慶大霉素提煉工序成品液化學(xué)濃度時(shí)，在線性、重現(xiàn)性、回收率、溫度、專屬性各方面都符合要求，由此認(rèn)為旋光法測(cè)定硫酸慶大霉素提煉工序成品液化學(xué)濃度切實(shí)可行。

[1] 藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2003.

Validation of Method for Determination of Chemical Concentration of Gentamicin Sulfate by Polarimetry

Zeng Li

Due to the rapid and accurate determination of concentration by optical method，it is widely used in pharmaceutical production quality inspection.It is necessary to verify the method in terms of linearity，reproducibility，recovery rate，temperature and specif city in the quality control of the f nished product liquid in the process of gentamicin sulfate extraction and how to ensure the practicability of the application of polarimetry.

polarimetry；linearity；reproducibility；recovery rate

R927

A

1003-6490（2016）11-0088-02

2016-10-10

曾莉（1981—），女，四川樂(lè)山人，工程師，主要研究方向?yàn)樗幤窓z驗(yàn)、制藥工藝。