戴金寧，李富金，楊景晁，戰(zhàn)汪濤

（1.山東省畜牧總站，山東 濟南 250022；2.齊魯動物保健品有限公司，山東 濟南 250105）

肉雞專用新流二聯(lián)滅活疫苗的實驗研究及臨床使用效果研究*

戴金寧1，李富金2，楊景晁1，戰(zhàn)汪濤1

（1.山東省畜牧總站，山東 濟南 250022；2.齊魯動物保健品有限公司，山東 濟南 250105）

利用新型101佐劑制備肉雞專用新流二聯(lián)滅活疫苗，與進口白油佐劑新流二聯(lián)滅活疫苗進行SPF雞、AA肉雞免疫比較，結果表明：試驗一，SPF雞10日齡免疫，免疫后7d，肉雞專用新流組H9、ND抗體水平明顯優(yōu)于對照組；試驗二，AA肉雞7日齡免疫，肉雞專用新流組禽流感H9抗體水平明顯優(yōu)于對照組，新城疫抗體對比不明顯；試驗三，AA肉雞不同公司不同免疫日齡（1日齡、7日齡免疫）對比試驗，23、30、37日齡檢測新城疫、禽流感H9抗體，齊魯肉雞專用新流禽組流感H9抗體產(chǎn)生速度比同類產(chǎn)品及空白對照差異顯著，1日齡免疫效果對比更明顯；新城疫抗體對比差異不顯著；試驗四，田間7日齡免疫對比試驗，26日齡抽檢各舍抗體，齊魯肉雞專用新流H9抗體明顯優(yōu)于該公司新流，新城疫對比不明顯。結果表明，齊魯肉雞專用新流二聯(lián)滅活疫苗更適合于商品肉雞免疫，1日齡免疫對比更明顯。

肉雞；新流二聯(lián)；臨床使用；研究

新城疫、低致病性禽流感（H9）都是肉雞常見病毒性傳染病，也是肉雞養(yǎng)殖中危害最嚴重的疫病，藥物治療效果差，疫苗免疫預防發(fā)病是現(xiàn)在使用的有效方案。雞新城疫、禽流感（H9）二聯(lián)滅活疫苗是肉雞常用防控兩種疫病的疫苗，但是，肉雞生長速度快，免疫系統(tǒng)不健全，傳統(tǒng)滅活苗效果在肉雞上應用還有許多提高的方面。滅活疫苗臨床使用效果主要因素包括種毒毒株、佐劑、制苗工藝等。課題組人員優(yōu)選制苗毒株，免疫原性好，對目前國內流行的新城疫、禽流感（H9）疾病有針對性的免疫效果；同時，為進一步提高疫苗的免疫效果，課題組人員歷經(jīng)多年研究，篩選出一個高效佐劑用于商品肉雞專用滅活疫苗生產(chǎn)。經(jīng)大量試驗和臨床使用跟蹤表明：優(yōu)選佐劑能快速激活免疫細胞，顯著提高機體免疫機能，抗體產(chǎn)生快，大幅縮短免疫空白期，更適用于肉雞低日齡免疫。在此基礎上，精確控溫滅活、高倍濃縮、均質乳化等一系列科學的生產(chǎn)工藝以及嚴格的質量控制體系，保證了產(chǎn)品質量的安全、高效。為商品肉雞養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)提供更有保障的高質量的產(chǎn)品。

1 材料與方法

1.1 疫苗與血樣

1.1.1 疫苗 肉雞采用新流二聯(lián) （齊魯動物保健品公司有限公司生產(chǎn)，肉雞佐劑）；齊魯新流二聯(lián)（自制試驗樣，進口白油佐劑）；國產(chǎn)Y公司制品（批號：2014020）；國產(chǎn) D公司制品 （批號：2014013）（同類制品均為山東市場集團專供公司）；田間試驗肉雞專用新流二聯(lián)（批號：150316-1）；某公司新流二聯(lián)（批號：2015023）。

1.1.2 血樣 山東濰坊某養(yǎng)殖集團對比試驗各個雞舍26日齡肉雞血樣。

1.2 抗原 ND和AI-H9血凝抑制抗原均由山東某大型養(yǎng)殖公司提供（哈獸研生產(chǎn)）。

1.3 試驗雞

1.3.1 10日齡SPF雞40只，購自濟南斯帕法斯家禽有限公司。

1.3.2 1日齡AA肉雞270只，購自山東和康源集團。

1.4 1%雞紅細胞懸液制備 采集2～3只健康非免疫SPF公雞的血液，與等體積的阿氏液混合,用 pH7.2、0.01mol/L PBS液洗滌 3次，然后用pH7.2、0.01mol/LPBS配成 1%的紅細胞懸液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 試驗分組與免疫方法

1.5.1 試驗一 10日齡SPF雞40只，隨機分成2組，每組20只。10日齡頸部皮下分別免疫，齊魯肉雞專用新流二聯(lián)（自制試驗樣，新型101佐劑）；齊魯新流二聯(lián)（自制試驗樣，進口白油佐劑），免疫劑量均為0.2ml/羽。免疫后7、14、21d分別采血，分離血清，用血凝抑制（HI）試驗方法測定ND和H9的HI抗體效價，比較佐劑活性差異。

1.5.2 試驗二 AA肉雞，從雞群中挑選精神狀態(tài)良好、體況相近試驗雞90只，隨機分成3組，每組30只。免疫程序：1日齡申貝點眼滴鼻，7日齡實驗組免疫齊魯肉雞專用新流二聯(lián)（自制試驗樣，新型101佐劑）；對照組免疫齊魯新流二聯(lián)（自制試驗樣，進口白油佐劑），空白組不免疫，同時新支120點眼滴鼻。免疫后7、14、21d分別采血，分離血清，用血凝抑制（HI）試驗方法測定ND和H9的HI抗體效價，比較佐劑活性差異。

1.5.3 試驗三 AA肉雞，從雞群中挑選精神狀態(tài)良好、體況相近試驗雞180只，隨機分成6組，每組30只。免疫程序：1～3組，1日齡申貝點眼滴鼻，同時分別頸部皮下注射三個廠家新流二聯(lián)，0.15ml/只、7日齡新支120點眼滴鼻；4～6組，1日齡申貝點眼滴鼻，7日齡分別頸部皮下注射三個廠家新流二聯(lián)、新支120點眼滴鼻。免疫后23、30、37d分別采血，分離血清，用血凝抑制（HI）試驗方法測定ND和H9的HI抗體效價，對比不同疫苗產(chǎn)品的免疫效果。

1.5.4 試驗四 山東濰坊某集團公司田間免疫對比試驗，共10棟雞舍，兩個公司新流二聯(lián)各免疫5棟，免疫程序為：1日齡威立克1倍量，傳支1倍量，7日齡某公司新流二聯(lián)0.35ml/只或齊魯肉雞專用新流二聯(lián)0.3ml/只；新支二聯(lián)1.2倍點眼滴鼻，21日齡1、3、4、5舍新城疫2倍量。免疫后26d采血，分離血清，用血凝抑制（HI）試驗方法測定ND和H9的HI抗體效價，檢查不同公司疫苗產(chǎn)品的免疫效果。

2 試驗結果

2.1 試驗一 結果見表1。

表1 SPF雞免疫試驗組（肉雞專用新流）與對照組（精品新流）免疫對比結果

結果顯示：疫苗中禽流感H9、新城疫效價相同，采用新型佐劑的肉雞專用新流比進口白油佐劑的精品新流抗體產(chǎn)生快，免疫后7d，試驗組禽流感HI抗體值達3.4，新城疫抗體達1.2，而對照組抗體滴度均小于1；免疫后14d，試驗組H9-HI及ND-HI抗體比對照組高1個滴度；免疫后21d，兩組抗體水平差異不顯著，通過比較可以看出，試驗組抗體產(chǎn)生速度明顯優(yōu)于對照組。

2.2 試驗二 結果見表2。

表2 AA肉雞免疫試驗組（肉雞專用新流）與對照組（精品新流）免疫對比結果

結果顯示：免疫后14d，空白對照組雞禽流感H9母源抗體均值下降為2.3log2，試驗組禽流感H9抗體均值為 3.8log2，對照組為 3.0log2；免疫后21d，母源抗體均值下降為2.0log2；對照組為2.6 log2，試驗組則高達4.6log2，免疫后28d，母源抗體持續(xù)下降到1.1log2，試驗組均值比對照組高2個滴度，達5.1log2；免疫后14d、21d及28d，ND抗體母源抗體均值從1.4log2下降到0.8log2，免疫疫苗組抗體持續(xù)升高，但試驗組比對照組差異不明顯，僅高0.5個滴度左右。通過比較可以看出，采用新型佐劑的肉雞專用新流的試驗組比使用進口白油佐劑的精品新流的對照組禽流感H9抗體產(chǎn)生快，抗體水平差異顯著；而新城疫抗體產(chǎn)生速度各日齡段對比不明顯。

2.3 試驗三 結果見表3。

表3 齊魯肉雞專用新流與其它公司新流疫苗免疫AA肉雞的對比結果

結果顯示：隨著日齡增長，空白對照組雞禽流感H9、新城疫母源抗體持續(xù)下降，30日齡左右降到1.0log2左右。不同公司新流二聯(lián)免疫AA肉雞后新城疫、禽流感H9的HI抗體比空白對照都有顯著提高，齊魯肉雞專用新流禽流感H9-HI抗體產(chǎn)生速度比同類產(chǎn)品及空白對照高1～3個滴度，差異顯著，1日齡免疫比7日齡免疫效果對比更明顯；其中1日齡免疫，23日齡、30日齡、37日齡分別檢測抗體，Y公司、D公司疫苗抗體上升趨勢不明顯，而齊魯肉雞專用新流可以明顯檢測到抗體上升，37日齡齊魯肉雞專用新流抗體達4.2log2，比對Y、D公司高3個多滴度，差異顯著；7日齡免疫效果對比雖然沒有1日齡免疫對比這么顯著，37日齡，也有2個多滴度差異。新城疫HI抗體三個公司，7日齡免疫抗體走勢相同，對比差異不顯著 （新城疫有活疫苗免疫因素存在），1日齡免疫，齊魯肉雞專用新流抗體逐日上升趨勢明顯，其他2個公司抗體走勢與空白對照趨同。

2.4 試驗四 結果見表4。

表4 山東濰坊某集團公司田間免疫對比試驗結果

結果顯示：7日齡免疫新流，26日齡抽檢各舍抗體，5個雞舍齊魯新流H9抗體平均值為 5.0 log2，5個雞舍某公司新流 H9抗體平均值為 3.8 log2，齊魯肉雞新流H9抗體明顯優(yōu)于該公司新流；5個雞舍齊魯新流ND抗體平均值為5.5log2，5個雞舍某公司新流ND抗體平均值為5.8log2，無明顯差異。

3 小結與討論

3.1 新型佐劑新流二聯(lián)在SPF雞、商品AA肉雞上免疫，免疫效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)進口白油佐劑疫苗。

3.2 齊魯肉雞專用新流二聯(lián)（新型佐劑苗）抗體產(chǎn)生快，日齡越小，對比結果越明顯。

3.3 田間試驗對比結果顯示，齊魯肉雞專用新流二聯(lián)禽流感免疫效果優(yōu)于Y公司及D公司，新城疫防疫效果差異不大。

3.4 肉雞生長快，免疫系統(tǒng)不健全，傳統(tǒng)滅活疫苗抗體產(chǎn)生慢，一般免疫后21～28d才能出現(xiàn)高峰，肉雞發(fā)病早，疫苗抗體產(chǎn)生不足，不能完全滿足客戶疫病防控需求，齊魯肉雞專用新流二聯(lián)篩選的佐劑能快速激活免疫細胞，顯著提高機體免疫機能，抗體產(chǎn)生快，大幅縮短免疫空白期，更適用于肉雞低日齡免疫。

3.5 為了提高養(yǎng)殖效率，很多地方更換為籠養(yǎng)肉雞，養(yǎng)殖場希望雛雞上籠前就完成新流二聯(lián)免疫，傳統(tǒng)進口白油佐劑7日齡免疫尚可，1日齡免疫檢測不到疫苗效果，不適用于1日齡商品肉雞。

S858.312.5

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1673-1085（2016）09-0010-04

2016-08-20

山東省財政支持農(nóng)業(yè)技術推廣項目“肉雞標準化健康養(yǎng)殖技術推廣”；山東省農(nóng)業(yè)重大應用技術創(chuàng)新項目“山東省肉雞業(yè)公共衛(wèi)生模式建立與示范”。

戴金寧（1969-），男，助理畜牧師，大專，主要從事畜牧科技推廣工作，154741270@qq.com。