文│黃德強(qiáng)（重慶市銅梁區(qū)平灘畜牧獸醫(yī)站）

大鼠高脂模型的建立

文│黃德強(qiáng)（重慶市銅梁區(qū)平灘畜牧獸醫(yī)站）

血脂是血液中脂質(zhì)的總稱，包括甘油三酯（TG）、膽固醇（TC）、磷脂、膽固醇酯等。高脂血癥是指血液中膽固醇、甘油三酯、低密脂蛋白（LDL）過高和血清高密脂蛋白（HDL）過低的一種全身脂代謝異常，它是危害人類健康的常見疾病。近年來，隨著人們生活水平的不斷提高，高血脂已成為危害人類身體的一大隱形殺手，因此研究高脂血癥的發(fā)病原因，探討高脂血癥的預(yù)防和治療，尋找高效低毒的降血脂新藥，已成為目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。

應(yīng)用于降血脂和抗動(dòng)脈粥樣硬化研究的動(dòng)物模型主要有鼠類、鳥類、兔、豬以及非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物，其中在降血脂方面尤其以鼠類模型最為常見。SD大鼠具有對(duì)疾病的抵抗力強(qiáng)，尤其對(duì)呼吸道疾病的抵抗力很強(qiáng)，產(chǎn)仔多，生產(chǎn)發(fā)育較快等優(yōu)點(diǎn)。因此，本文選用雄性SD大鼠，通過飼喂一定時(shí)間的高脂飼料以建立高血脂的動(dòng)物模型，通過測(cè)定體重、相關(guān)血液生化指標(biāo)和體脂量及肝臟系數(shù)等判定高脂模型是否成功建立，為下一步降血脂藥物的研究提供高血脂模型及科學(xué)的數(shù)據(jù)指導(dǎo)。

一、材料與方法

1.材料。

（1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。20只雄性健康的SD大鼠，體重200～220克，購于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司長(zhǎng)沙分公司。常規(guī)飼養(yǎng)，自由采食。觀察一周，臨床表現(xiàn)健康。

（2）試劑。總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）檢測(cè)試劑盒，肝酯酶（HL）及脂蛋白脂肪酶（LPL）測(cè)定試劑盒，購于沈陽偉嘉牧業(yè)技術(shù)有限公司。其他試劑均為分析純。

（3）飼料配方?；A(chǔ)日糧：14%蛋白質(zhì)，10%脂肪，碳水化合物76%；高脂飼料：從上海斯萊克公司購買的高脂飼料，其中各組分含量為普通繁殖鼠料70%、豬油14.5%、膽固醇1%、膽鹽0.3%、酪蛋白7.2%、預(yù)混料1.4%、麥芽糊精5.6%。

（4）儀器與設(shè)備。超凈工作臺(tái)（SW-CJ2FD型，蘇州凈化設(shè)備公司），恒溫恒濕培養(yǎng)箱（LRH-250-S，廣東省醫(yī)療器械廠），全自動(dòng)立式電熱壓力蒸汽滅菌器（YXQ-LS-50S Ⅱ，上海博迅公司醫(yī)療設(shè)備廠），Ⅱ型臺(tái)式高速離心機(jī)，全自動(dòng)生化分析儀，移液器，電子天平，培養(yǎng)皿。

2.方法。

（1）分組。20只雄性SD大鼠經(jīng)過適應(yīng)性喂養(yǎng)1周以后，隨機(jī)平均分為2組。

（2）處理。正常對(duì)照組（Basal dietary，BD組）：投喂普通顆粒飼料，自由采食、自由飲水，連續(xù)4周；高脂組（High cholesterol dietary，HCD組）：飼喂高脂飼料，自由采食、自由飲水，連續(xù)4周。

（3）測(cè)定指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)前及實(shí)驗(yàn)期間每天稱重，并測(cè)定每日攝食量。稱重在每天上午喂料前進(jìn)行；采食量根據(jù)每天的喂料量與剩余料量相減而得。

飼喂高脂飼料前一天，SD大鼠尾靜脈采血，經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，分離血清，血樣存于-80℃?zhèn)溆?。而后每?天進(jìn)行一次采血。血樣經(jīng)過處理后，各項(xiàng)指標(biāo)均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，并在全自動(dòng)生化分析儀上測(cè)定TG、TC、HDL、LDL濃度。

實(shí)驗(yàn)結(jié)束前禁食一晚，稱大鼠體重，采血后，以水合氯醛麻醉宰殺，迅速分離肝組織，稱重，計(jì)算肝重系數(shù)，肝重系數(shù)=肝重（g）/體重（g）×100%。剝離附睪、腹膜后和腸系膜沉積脂肪，稱重，測(cè)定內(nèi)臟脂肪量，計(jì)算各部位體脂率，體脂率=肝重（g）/體重（g）×100%。增重率（%）=（終試平均體重-始試平均體重）÷始試平均體重×100%。

二、結(jié)果

1.兩小組體重統(tǒng)計(jì)結(jié)果。從每周統(tǒng)計(jì)的數(shù)據(jù)上分析，第一周開始高脂組體重增長(zhǎng)速度明顯快于普通組，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，高脂組大鼠體重比正常對(duì)照組重約60克，增重率比正常對(duì)照組約高25%。經(jīng)方差分析，高脂組體重增長(zhǎng)值與正常組相比，有顯著性差異（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 大白鼠的體重稱定結(jié)果表

2.采食量統(tǒng)計(jì)結(jié)果。高脂組大鼠采食量逐漸高于正常對(duì)照組，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束前，高脂組采食量比正常對(duì)照組約高18%，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，高脂組大鼠采食量顯著高于正常組（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 大白鼠的采食量

3.肝系數(shù)及各部位脂肪系數(shù)結(jié)果。高脂組大鼠附睪、腸系膜和腹膜后脂肪系數(shù)分別為正常對(duì)照組5.7倍、2.8倍、2.7倍，肝系數(shù)為正常對(duì)照組的1.4倍，差異極顯著（P＜0.01）。眼觀肝臟，可見高脂組肝臟腫大、黃土色，呈明顯的脂肪肝病變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 各部位脂肪系數(shù)和肝系數(shù)結(jié)果

4.血清生化學(xué)檢測(cè)。高脂組血清TC、TG分別是正常組的1.7倍、1.7倍，差異顯著（P＜0.01）。高脂組血清LDL-C是對(duì)照組的1.2倍，但高脂組和正常對(duì)照組HDL-C濃度差異不顯著（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。

表4 大白鼠的血清生化指標(biāo)

三、結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)將20只SD雄性大鼠隨機(jī)分為兩組，正常組采用基礎(chǔ)飼料飼喂，高脂組飼喂高脂飼料，自由采食自由飲水，連續(xù)飼喂4周；每天稱體重，測(cè)定每日采食量，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)及實(shí)驗(yàn)進(jìn)行期間每周一次尾靜脈采血，分離血清，采用試劑盒檢測(cè)血清TC、TG、HDL-C、LDL-C濃度；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)剖殺動(dòng)物，測(cè)腸系膜、附睪、腹膜后脂肪含量，稱肝重，計(jì)算脂肪系數(shù)及肝重系數(shù)。

結(jié)果表明，在實(shí)驗(yàn)過程中高脂組大鼠明顯要比飼喂普通飼料的大鼠增重快，高脂組大鼠血清TG、TC顯著高于正常組（P＜0.01）；高脂組大鼠體重、腸系膜、附睪、腹膜后脂肪系數(shù)及肝重系數(shù)均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），眼觀肝臟呈明顯的脂肪肝病變。綜上所述表明，通過給SD雄性大鼠飼喂4周高脂飼料，已成功建立大鼠飲食性高脂模型，該模型與人類肥胖癥合并高脂血癥脂肪肝極為相似，適用于高脂血癥脂肪肝的臨床藥理研究。