劉　婷

作者單位:101200 北京市平谷區(qū)醫(yī)院

SLC1A5在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及與其轉(zhuǎn)移的關(guān)系

劉婷

作者單位:101200 北京市平谷區(qū)醫(yī)院

【摘要】目的分析溶質(zhì)載體家族1成員5(SLC1A5)蛋白在原發(fā)性結(jié)直腸癌組織和癌旁正常黏膜組織中的表達(dá)情況及其與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。方法應(yīng)用組織芯片和免疫組化的方法,檢測80例原發(fā)性結(jié)直腸癌組織和35例癌旁正常組織中SLC1A5的表達(dá)，分析SLC1A5表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。結(jié)果SLC1A5在80例結(jié)直腸癌患者癌組織標(biāo)本中的陽性表達(dá)率(88.75%)高于35例癌旁正常組織中陽性表達(dá)率(42.86%)(P<0.05)。SLC1A5高表達(dá)與結(jié)直腸癌患者是否存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。但癌組織中SLC1A5的表達(dá)水平與患者性別、年齡、T分期、N分期和分化程度無明顯相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論SLC1A5可能是一個促進(jìn)腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的因子。

【關(guān)鍵詞】溶質(zhì)載體家族1成員5；結(jié)直腸腫瘤；腫瘤轉(zhuǎn)移

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:047～049)

結(jié)直腸癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，近年來其發(fā)病率快速增長，嚴(yán)重危害人類及健康。因此，尋找到一種能夠早期診斷遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的標(biāo)記物對轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的綜合治療非常重要的。

溶質(zhì)載體家族1成員5(SLC1A5)，是氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)中重要的成員。多位學(xué)者在研究中發(fā)現(xiàn)SLC1A5在多種腫瘤中呈異常高表達(dá)[1-4]，并通過反義RNA干擾、化學(xué)藥物阻斷等手段取得了可喜的實(shí)驗(yàn)結(jié)果[5]。目前，有關(guān)SLC1A5在結(jié)直腸癌方面的文獻(xiàn)報(bào)道尚少，因此，我們采用免疫組化及組織芯片檢測方法檢測結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)情況，并分析其與結(jié)直腸癌臨床參數(shù)及預(yù)后的相關(guān)性，初步探討其在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的作用。

1材料與方法

1.1　病例資料

隨機(jī)收集北京市平谷區(qū)醫(yī)院2001年-2006年結(jié)直腸癌病例組織石蠟標(biāo)本80例，其中結(jié)直腸癌組織80例，癌旁正常組織35例(距離腫瘤邊緣5cm以上)。所有腫瘤組織標(biāo)本和癌旁正常黏膜組織通過HE染色被證實(shí)。80例腫瘤患者中，男性45例，女性35例；年齡30～70歲，平均年齡60.07歲；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性34例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性46例；無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移65例，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移15例，其中肝轉(zhuǎn)移10例，肺轉(zhuǎn)移2例，骨轉(zhuǎn)移2例，顱骨轉(zhuǎn)移1例。80例結(jié)直腸癌中Ⅰ期23 例，Ⅱ期24 例，Ⅲ期18 例，Ⅳ期15 例(按照2009年國際抗癌聯(lián)盟制定的第7版TNM分期標(biāo)準(zhǔn))。所有患者均未接受過術(shù)前放化療，臨床病理及隨訪資料包括性別、年齡、分化程度、TNM分期[根據(jù)腫瘤(T)、淋巴結(jié)(N)和轉(zhuǎn)移(M)情況的分類法]。

1.2　主要儀器及試劑

ALPHELYS組織芯片制作儀；LeiCaRM2245型切片機(jī)；兔抗人SLC1A5抗體(BIOSS,bs-0473R)；HRP-Peroxide-DAB試劑盒(DACO)。

1.3　方法

1.3.1制作組織芯片首先選擇所需結(jié)直腸癌病理存檔蠟塊，根據(jù)HE切片形態(tài)學(xué)觀察，確定具有代表性的病變部位并標(biāo)記。每個標(biāo)本取2個點(diǎn)，直徑1 mm，按照組織芯片制作儀操作流程，制成組織芯片蠟塊，每個芯片蠟塊含12×8個點(diǎn)。將芯片蠟塊切片，厚度4 μm，裱于載玻片上。

1.3.2免疫組化染色應(yīng)用SABC免疫組織化學(xué)法染色，組織切片經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，3%H2O2中消除內(nèi)源性過氧化酶活性，pH 6.0的檸檬酸鈉溶液中微波抗原修復(fù)。滴加適量SLC1A5抗體(濃度1∶200)4 ℃過夜，按DACO試劑盒說明進(jìn)行染色，DAB顯色和蘇木精復(fù)染，用已知陽性片做陽性對照，以PBS代替一抗做陰性對照。

1.3.3結(jié)果判讀SLC1A5染色的評分由2個獨(dú)立和有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)生判讀。陽性表達(dá)為細(xì)胞質(zhì)膜染色，主要表現(xiàn)為胞質(zhì)及胞膜內(nèi)非均勻棕黃色顆粒。0分為不著色或弱著色，陽性比率為<10%；1分為弱著色，陽性比率為10%～40%；2分為中等著色，陽性比率為40%～70%；3分為強(qiáng)著色，陽性比率>70%。

1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 16.0軟件進(jìn)行分析。采用χ2檢驗(yàn)分析SLC1A5在正常黏膜組織和癌組織中的表達(dá)差異以及SLC1A5表達(dá)水平和各項(xiàng)臨床參數(shù)的相關(guān)性。

2結(jié)果

2.1　SLC1A5在正常黏膜和結(jié)直腸腺癌中的表達(dá)

SLC1A5在正常黏膜和癌組織中表達(dá)均位于胞質(zhì)膜，未見明顯胞核著色。大部分癌組織顯示SLC1A5強(qiáng)表達(dá)，為2~3分，而大部分正常黏膜顯示弱表達(dá)，為0~2分。>0分為陽性表達(dá)。80例結(jié)直腸癌組織中，71例陽性表達(dá)；35例癌旁正常黏膜組織中，25例陽性表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，2組SLC1A5蛋白表達(dá)水平有明顯差異，SLC1A5在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)率(88.8%)明顯高于癌旁正常黏膜組織(71.4%)，見表1。

2.2　SLC1A5表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析

SLC1A5表達(dá)與結(jié)直腸癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(P<0.05)呈正相關(guān)。然而，腫瘤組織中SLC1A5表達(dá)量與患者性別、年齡、T分期、N分期和分化程度無明顯相關(guān)性(P>0.05)，見表1。

表1　SLC1A5蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系/例

15例發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌標(biāo)本中，SLC1A5均為陽性表達(dá)；在65例未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌標(biāo)本中， 55例SLC1A5陽性表達(dá)，發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者其陽性表達(dá)率比未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者升高，這表明與未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者相比，發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的癌組織中SLC1A5蛋白表達(dá)水平更高。

3　討論

近些年，氨基酸在腫瘤中的作用逐漸成為熱點(diǎn)。谷氨酸胺是人體內(nèi)含量最豐富的游離氨基酸和重要的代謝前體，在核苷酸、蛋白以及谷胱甘肽合成中發(fā)揮重要作用。最新的研究發(fā)現(xiàn)谷氨酰胺具有促進(jìn)腫瘤增殖[6]、侵襲[7-8]，刺激腫瘤組織新血管形成[9]等作用。而作為谷氨酰胺的最主要轉(zhuǎn)運(yùn)載體，SLC1A5在腫瘤中的作用自然也備受關(guān)注。Yuneva等[10]研究發(fā)現(xiàn)，通過阻斷SLC1A5限制谷氨酰胺攝入可引起依賴MYC的細(xì)胞凋亡。Fuchs等[1]研究發(fā)現(xiàn)，在正常肝組織谷氨酰胺的主要載體是系統(tǒng)N；然而在肝癌組織中，谷氨酰胺主要轉(zhuǎn)運(yùn)載體卻轉(zhuǎn)變成SLC1A5，而且轉(zhuǎn)運(yùn)效率是系統(tǒng)N在正常組織的3倍。Kim等[2]通過對702例乳腺癌標(biāo)本進(jìn)行組織芯片和免疫組化對比分析，發(fā)現(xiàn)SLC1A5在乳腺癌中呈異常高表達(dá)。Wasa等[3]在神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞株的研究也發(fā)現(xiàn)SLC1A5呈高表達(dá)，并證實(shí)Na+依賴型谷氨酰胺攝入占該系細(xì)胞總谷氨酰胺攝入量的95%以上。另外，近些年發(fā)現(xiàn)SLC1A5高表達(dá)的腫瘤還有前列腺癌、肺癌等。Fuchs等[4]利用給予EST信息的數(shù)據(jù)庫對腫瘤差異表達(dá)基因進(jìn)行了篩選，共選取了15種常見組織類型的腫瘤組織及其對應(yīng)的正常組織的EST文庫，通過軟件對比，發(fā)現(xiàn)SLC1A5在很多常見腫瘤表達(dá)中都有明顯上調(diào)。

我們通過免疫組化的方法檢測80例癌組織和35例癌旁正常的黏膜組織中SLC1A5的表達(dá)，其陽性率為分別為88.75%及42.86%，結(jié)果表明SLC1A5在結(jié)直腸癌患者的癌組織中表達(dá)較癌旁正常組織中升高。進(jìn)一步分析SLC1A5的表達(dá)情況和各個臨床參數(shù)的關(guān)系顯示：在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中，檢測到SLC1A5高表達(dá)的頻率較沒有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者的腫瘤組織標(biāo)本中表達(dá)量高(P<0.05)。這表明SLC1A5可能在腫瘤的轉(zhuǎn)移過程中扮演了非常重要的角色，這一現(xiàn)象和之前報(bào)道的在前列腺癌、乳腺癌中的研究一致。通過檢測術(shù)后結(jié)直腸癌組織中SLC1A5的表達(dá)情況，可能對腫瘤的惡性程度做出判斷和預(yù)測。

目前結(jié)直腸癌診療面臨的最大的挑戰(zhàn)之一是早期診斷結(jié)直腸癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及在此基礎(chǔ)上進(jìn)行的是否需行輔助治療的判斷[11]。對于早期的結(jié)直腸癌患者，僅僅需要外科手術(shù)治療[12]；而對于進(jìn)展期的患者，除了手術(shù)治療外還需要化療或者放療等輔助性治療提高患者生存期[13]。我們的研究發(fā)現(xiàn)SLC1A5在轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌中表達(dá)是明顯升高，這一現(xiàn)象預(yù)示SLC1A5的表達(dá)升高和結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。對于臨床未發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，而腫瘤組織中SLC1A5高表達(dá)的結(jié)直腸癌患者我們需要更為密切的關(guān)注以及更多的輔助檢查是否存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

綜上所述，高表達(dá)的SLC1A5和結(jié)直腸癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)，腫瘤組織中高表達(dá)SLC1A5的結(jié)直腸癌患者可能需要更多的輔助性治療和更為密切的隨訪。但是，本研究中發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移標(biāo)本例數(shù)偏少，可能會帶來統(tǒng)計(jì)學(xué)上的誤差，SLC1A5能否作為臨床上治療選擇標(biāo)記為及其促進(jìn)結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制仍需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)。

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Expression of SLC1A5 in Colorectal Cancer Tissues and its Correlation with Distant

Metastasis in Colorectal Cancer Patients

LIUTing.BeijingPingguHospital,Beijing,101200

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression of SLC1A5 in primary colorectal cancer and adjacent normal mucosa,and to analyze the relationship between SLC1A5 expression and clinicopathological parameters.MethodsThe expression of SLC1A5 in carcinoma tissues and normal mucosa was examined by a set of tissue microarrays and the method of immunohistochemistry.The potential relationship between SLC1A5 expression and clinicopathological features was also analyzed.ResultsThe positive expression rate of SLC1A5 in colorectal cancer tissues was 88.75%,which was significantly higher than in normal tissue(P<0.05).The expression rate in the patients with metastasis was also significantly higher than that in those with locally advanced disease(P<0.05).However,no correlation between SLC1A5 expression and age at surgery,sex,the depth of invision,lymph node metastasis,or differentiation grade was found(P>0.05).ConclusionSLC1A5 maybe a promotive factor in the process of distant metastasis.

【Key words】SLC1A5;Colorectal neoplasms;Neoplasm metastasis

中圖分類號：R73-36

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1001-5930(2016)01-0047-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.01.014