董　梅，張學(xué)梅

(1.河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院手術(shù)室，河北 石家莊 050051；2.河北省石家莊市第一醫(yī)院耳鼻咽喉科，河北 石家莊 050011)

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·論著·

多酶生物膜清洗劑對(duì)耳鼻咽喉手術(shù)器械附著生物膜清除效果分析

董梅1，張學(xué)梅2*

(1.河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院手術(shù)室，河北 石家莊 050051；2.河北省石家莊市第一醫(yī)院耳鼻咽喉科，河北 石家莊 050011)

目的觀察多酶生物膜洗滌劑對(duì)耳鼻咽喉科手術(shù)器械附著生物膜的清洗效果。方法隨機(jī)抽取耳鼻咽喉科術(shù)后手術(shù)器械600件，分為多酶生物膜清洗劑組和普通清洗劑組各300件。目測、顯微鏡和掃描電鏡下觀察污物、雜質(zhì)及生物膜清除效果。結(jié)果目測2組樣品合格率為100.0%顯微鏡下觀察：多酶生物膜清洗劑對(duì)耳鼻咽喉科術(shù)后器械上殘留污物和雜質(zhì)的清除率為95.0%，普通清洗劑為84.0%，多酶生物膜清洗劑去污物作用較普通清洗劑好(P<0.01)；掃描電鏡觀察多酶生物膜清洗劑對(duì)生物膜的清除率為99.0%，普通清洗劑為94.0%，多酶生物膜清洗劑清除生物膜的作用較普通清洗劑好(P<0.01)。結(jié)論使用多酶生物膜清洗劑能有效清除耳鼻咽喉科器械上殘留污物、雜質(zhì)及生物膜。

生物膜；耳鼻喉外科手術(shù)；外科器械

10.3969/j.issn.1007-3205.2016.09.012

細(xì)菌生物膜是由細(xì)菌及其細(xì)菌自身分泌的胞外多聚物基質(zhì)所組成，可逆地附著于非生物或生物的表面，保護(hù)細(xì)菌免于受環(huán)境的影響。生物膜一旦形成將顯著降低消毒劑、抗菌劑的效果。耳鼻咽喉常見疾病如慢性扁桃體炎、腺樣體炎、慢性鼻-鼻竇炎[1-4]、中耳炎、膽脂瘤及耳科植入物感染[5-7]等均與細(xì)菌生物膜密切相關(guān)。耳鼻咽喉手術(shù)術(shù)后器械一般均附著生物膜，如何有效清除術(shù)后器械上附著的生物膜是保證器械有效清潔、消毒的首要問題。多酶生物膜清洗劑是一種含有多種生物蛋白水解酶的清洗劑，能夠快速、有效地分解血液、蛋白質(zhì)、黏多糖、脂肪及糖類，使附著在有機(jī)或無機(jī)物表面的污物分解解散，形成懸浮顆粒，從而易被流動(dòng)水沖洗[8-11]。本研究采用多酶生物膜清洗劑清洗耳鼻咽喉科術(shù)后器械，并與普通清洗劑對(duì)比，發(fā)現(xiàn)多酶生物膜清洗劑能有效清除耳鼻咽喉科手術(shù)器械上殘留污物及生物膜，現(xiàn)報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料隨機(jī)抽取2014年6月—2015年7月河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院耳鼻咽喉科手術(shù)后使用>2 h器械600件，隨機(jī)分為多酶生物膜清洗劑組和普通清洗劑組各300件。

1.2方法將手術(shù)器械拆分為最小零件，放置在清洗筐中，按醫(yī)療器械清洗程序在流水中徹底沖洗干凈，目測樣品表面無明顯污物，將樣品分別放入多酶生物膜清洗劑及普通清洗劑配制浸泡液浸泡10 min，再取出物品用流動(dòng)水沖洗干凈，高壓水槍沖洗帶有管腔的器械，晾干。再將樣品分別放入超聲清洗機(jī)內(nèi)，多酶生物膜清洗劑組：按洗滌說明書放入1∶270多酶生物膜清洗劑入超聲機(jī)內(nèi)，水溫45 ℃，超聲機(jī)超洗5 min，按標(biāo)準(zhǔn)流程清洗。普通清洗劑組：按說明書放入1∶300普通清洗劑入超聲機(jī)內(nèi)，同樣流程方法清洗。然后用流動(dòng)水沖洗干凈，擦干器械表面，管腔用高壓氣槍吹干。清洗步驟結(jié)束，比較清洗效果。為避免操作過程人為因素差異性，所有操作人員均經(jīng)培訓(xùn)合格，按統(tǒng)一操作流程進(jìn)行。

1.3觀察指標(biāo)①目測檢查：將清洗后的器械按要求進(jìn)行目測，觀察表面沒有可見殘留物；管腔、關(guān)節(jié)、齒槽處用棉簽擦拭，目測棉簽是否有污染、雜質(zhì)等，無污物和雜質(zhì)為達(dá)到潔凈合格，有污跡、雜質(zhì)等為不合格。②顯微鏡下觀察：在10倍放大條件下觀察器械表面有無附著可去掉的污物，管腔、關(guān)節(jié)、齒槽部位棉簽擦拭后，顯微鏡下觀察棉簽上是否有污物、雜質(zhì)；無污物、雜質(zhì)為合格，否則為不合格。③掃描電鏡觀察：顯微鏡下，用無菌不銹鋼鏟無菌操作下取得器械表面的污物、雜質(zhì)；管腔、關(guān)節(jié)及凹槽的污物、雜質(zhì)用棉簽反復(fù)擦拭取得。立即置于2.5%戊二醛固定，再用50%、70%、80%、90%、100%乙醇依次梯度脫水，每次5 min，脫水后依次放入30%、50%、70%的醋酸異戊酯液中浸泡各10 min，再用100%醋酸異戊酯置換10 min，臨界干燥，表面噴金固定鍍膜，最后進(jìn)行掃描電鏡觀察。掃描電鏡觀察到細(xì)菌及細(xì)菌之間有多糖組織為含有生物膜的不合格樣品，否則為無生物膜的合格樣品。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 1 3.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

2.1目測結(jié)果2組樣品經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)操作過程清洗后，所有器械表面無明顯污物及雜質(zhì)；管腔、關(guān)節(jié)、齒槽處用反復(fù)棉簽擦拭，目測棉簽表面干凈、清潔，未發(fā)現(xiàn)明顯污物及雜質(zhì)。

2.2顯微鏡檢測結(jié)果多酶生物膜清洗劑組300件樣品，285件顯微鏡下未發(fā)現(xiàn)污物，15件有污物，合格率為95.0%；普通清洗劑組300件樣品，252件顯微鏡下未發(fā)現(xiàn)污物，48件有污物，合格率為84.0%。多酶生物膜清洗劑去污效率較普通清洗劑高(χ2=19.314，P<0.01)。

2.3掃描電鏡檢測結(jié)果多酶生物膜清洗劑組15件殘留污物樣品，其中3件為生物膜陽性，12件為一般雜質(zhì)，生物膜殘留比率為20.0%；普通清洗劑組48件殘留污物樣品，18件為生物膜陽性，30件為一般性雜質(zhì)，生物膜殘留比率37.5%。2組生物膜殘留比率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.575，P>0.05)。

2.42組清洗劑對(duì)生物膜清除率多酶生物膜清洗劑組300件樣品，297件為合格樣品，有3件有生物膜殘留，對(duì)生物膜最終的清除率為99.0%；普通清洗劑組合格樣品282件，18件有生物膜殘留，對(duì)生物膜的清除率為94.0%。多酶生物膜清洗劑對(duì)生物膜的清除作用比普通清洗劑好(χ2=11.520,P<0.01)。

3　討　　論

早在1936年就發(fā)現(xiàn)部分細(xì)菌附著在生物與非生物的表面，包裹自身在細(xì)胞分泌的胞外多糖多聚物所組成的基質(zhì)中，這種多聚物使得細(xì)菌容易在物體表面附著，細(xì)菌之間相互附著形成膜性物稱為細(xì)菌生物膜。細(xì)菌生物膜是單一或多種細(xì)菌為適應(yīng)環(huán)境而形成的微菌落聚集物，細(xì)菌周圍的附著物一般為糖蛋白復(fù)合物，可以產(chǎn)生特定結(jié)構(gòu)，與細(xì)菌構(gòu)成特定的細(xì)菌復(fù)合體，形如膜狀并不可逆地附著于病灶的表面，細(xì)菌生物膜是細(xì)菌為適應(yīng)環(huán)境，維持自身生命所發(fā)生的形態(tài)學(xué)的改變，與游走態(tài)細(xì)胞相比，細(xì)菌生物膜大大增加細(xì)菌的抵抗力[12-16]。

近年來研究發(fā)現(xiàn)留置靜脈導(dǎo)管、透析技術(shù)、介入、多種插管、人工瓣膜、人工關(guān)節(jié)等感染與生物膜存在有密切的相關(guān)性。相對(duì)于浮游形式的細(xì)菌來講，細(xì)菌生物膜具有更強(qiáng)的耐藥性。使得抗生素、消毒劑不能徹底殺滅這些細(xì)菌，一旦停藥，存活下來的細(xì)菌則可繼續(xù)迅速繁殖，使細(xì)菌生物膜迅速恢復(fù)到原來狀態(tài)。目前的研究也已經(jīng)證實(shí)生物膜不能徹底消滅、清除，是導(dǎo)致交叉感染的重要原因之一。

近年來，細(xì)菌生物膜在耳鼻咽喉科的存在已經(jīng)引起耳鼻咽喉科學(xué)者的重視。大量的研究證實(shí)了細(xì)菌生物膜在慢性鼻竇炎黏膜及病變中的存在。慢性扁桃體炎及腺樣體組織中發(fā)現(xiàn)，扁桃體、腺樣體有細(xì)菌生物膜形成，這是小兒慢性扁桃體炎、慢性鼻竇炎反復(fù)發(fā)作的重要原因。慢性中耳炎反復(fù)中耳溢液的原因與生物膜的存在密切相關(guān)。研究還發(fā)現(xiàn)人工耳蝸植入后感染，部分患者植入體中均發(fā)現(xiàn)了細(xì)菌生物膜的存在，是感染發(fā)生的病因。目前有關(guān)細(xì)菌生物膜在耳鼻咽喉科手術(shù)機(jī)械上附著、清洗、清除及消毒的研究甚少，值得研究者深入探討[17-20]。

生物膜清洗劑里面含有蛋白水解酶，能有效地分解人體的各種分泌物如蛋白質(zhì)黏多糖、脂肪及碳水化合物。它能接觸到器械的每個(gè)表面，對(duì)復(fù)雜管道的清洗快速徹底，能夠有效分解生物膜，從而提高生物膜的清除率。耳鼻咽喉科感染性疾病常有生物膜的存在，手術(shù)后器械上會(huì)有生物膜殘留，清洗不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致消毒失敗、生物膜擴(kuò)散會(huì)引起大面積院內(nèi)交叉感染。筆者設(shè)想多酶生物膜清洗劑對(duì)耳鼻咽喉術(shù)后器械上附著的生物膜應(yīng)具有很好的清除作用。本研究結(jié)果顯示，多酶生物膜清洗劑和普通清洗劑對(duì)耳鼻咽喉科術(shù)后器械上殘留的污物及生物膜均具有一定清除作用，多酶生物膜清洗劑對(duì)器械的清洗更加徹底。顯微鏡下觀察，多酶生物膜清洗對(duì)耳鼻咽喉科術(shù)后器械污物的清除率為95.0%，普通清洗劑為84.0%，提示普通清洗劑并不能十分有效地清除附著在器械上的術(shù)后污物，盡管經(jīng)普通清洗劑和多酶生物膜清洗劑清洗后的2組樣品目測均為合格樣品，但靠單純目測檢驗(yàn)術(shù)后器械是否清洗合格是不可靠的，應(yīng)該采用更為嚴(yán)格的檢測方法檢測清洗效果。電鏡下觀察，經(jīng)生物膜清洗劑清洗后，15件不合格樣品中有3件含有生物膜，12件為一般性雜質(zhì)，生物膜占有比例為20.0%，經(jīng)普通清洗劑清洗后留污物中含生物膜的比例為37.5%，二者殘留污物生物膜所占比例差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分析主要原因可能是經(jīng)顯微鏡篩查后的樣品太少，所以差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但最終生物膜清除率分析結(jié)果顯示，多酶生物膜清洗劑對(duì)生物膜的清除率為99.0%，普通清洗劑為94.0%，統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果顯示多酶生物膜清洗劑清除生物膜的效能較普通清洗劑好。提示對(duì)于耳鼻咽喉科術(shù)后器械，應(yīng)盡可能選擇對(duì)生物膜具有清除作用的富含生物蛋白酶的清洗劑。盡管多酶生物膜清洗劑能夠提高生物膜的清除率，但還是有1.0%的樣品上有生物膜殘留，可能與生物膜種類、變異等有關(guān)，筆者下一步將進(jìn)一步分析研究找出每種細(xì)菌生物所對(duì)應(yīng)的特異清洗劑，做到個(gè)體化、標(biāo)準(zhǔn)化，達(dá)到徹底清除生物膜目的。筆者還準(zhǔn)備增加使用其他類型的洗滌劑，如堿性清洗劑、其他多酶生物清洗劑，同時(shí)對(duì)清洗時(shí)間、濃度等進(jìn)行研究，一方面防止統(tǒng)計(jì)結(jié)果產(chǎn)生偏差，另一方面可以使得研究更加全面、徹底。掃描電鏡檢驗(yàn)生物膜結(jié)果雖然可靠，但是耗時(shí)、耗力、費(fèi)用高，下一步筆者將探索更加快捷、經(jīng)濟(jì)的檢查方法，如PCR、基因測序等。

總之，多酶生物膜清洗劑能有效清除耳鼻咽喉科器械上殘留的污物和雜質(zhì)，具有很好的清除生物膜的功效。

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(本文編輯：劉斯靜)

Effect of multienzyme biofilm detergent on the removal efficiency of the biofilm in the otolaryngology surgery instruments

Dong Mei1, Zhang Xue-mei2*

(1.Department of Operating Room, the Third Hospital of Hebei Midical University, Shijiazhuang 05005, China; 2.Department of Otolaryngology Head and Neck Surgery, the First Hospital of Shijiazhuang City, Shijiazhuang 050011, China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the cleaning effect of multienzyme biofilm detergent for biofilm on the otolaryngology surgical instruments. MethodsSelected 600 otolaryngology surgical instruments were randomly divided into group A(multienzyme biofilm detergent group) and group B(conventional detergent), each goup has 300 otdaryngdogy surgical instruments through visual inspection, microscope, and scanning electron microscope, to observe pollutants and biofilms cleaning rate. ResultsAll instruments were qualified throuhg visual inspection after rinse by these two detergents respectively. 95.0% of instruments in group A were qualified by microscope detection, 84.0% in group B, and biofilm detergent had better cleaning effect than conventional detergent(P<0.01). Biofilm detergent remove biofilm rate was 99.0%, conventional detergent was 94.0%, and biofilm detergent had a better removal effect on biofilm than conventional detergent through scanning electron microscope investigation(P<0.01). ConclusionMultienzyme biofilm detergent can clean pollutants and biofilms on the otolaryngology surgical instruments effectively.

biofilms; otorhinolaryngologic surgical procedures； surgical instruments

2016-03-23；

2016-07-22

河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題(2012114)

董梅(1973-)，女，河北石家莊人，河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院主管護(hù)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事臨床護(hù)理學(xué)研究。

。E-mail：xuemeizhang78@163.com

R349.9

A

1007-3205(2016)09-1038-04