劉振華 王寧 張帥民 徐賢剛 黎濤 石承先△

(1.貴州省人民醫(yī)院肝膽外科，貴州 貴陽 550002；2.貴州省骨科醫(yī)院，貴州 貴陽 550002)

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膽囊切除術(shù)后兔血清CCK8 的變化及意義

劉振華1王寧2張帥民1徐賢剛1黎濤1石承先1△

(1.貴州省人民醫(yī)院肝膽外科，貴州 貴陽 550002；2.貴州省骨科醫(yī)院，貴州 貴陽 550002)

膽囊切除術(shù)； CCK8； oddi括約??； 兔

Oddi括約肌(SO)生理運(yùn)動在維持正常膽道動力學(xué)中起著重要作用 ,其主要受神經(jīng)、體液因素調(diào)節(jié)。CCK作為胃腸肽類激素之一對SO的調(diào)節(jié)具有重要作用[1]。在CCK家族中，縮膽囊素八肽(CCK8)生理作用最大。CCK可直接作用SO內(nèi)的縮膽囊素A受體(CCKAR)發(fā)揮作用。膽囊切除術(shù)后綜合癥(PCS)概念的提出使得SO的病理生理受到高度重視，部分病因?yàn)镾O功能障礙(SOD)[2]，本實(shí)驗(yàn)通過觀察膽囊切除術(shù)后兔血清CCK8濃度的變化，探討CCK8與SO生理活動的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器 日本大耳白兔20只(購于貴州醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心)，兔CCK-8 ELISA試劑盒(武漢華美生物技術(shù)有限公司)，LGR10-4.2 離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)，PZF-6021型干燥箱(中國上海)，BCD-00A型冰箱(青島海信)，ELx800UV型酶標(biāo)儀(Bio-Tek公司)

1.2 各組動物處理 20只日本大耳白兔，雌雄不限，體質(zhì)量(2.5±0.5) kg,經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分成A、B兩組，每組10只。A組為對照組；B組為膽囊切除組。術(shù)前禁食12 h，禁水4 h，稱重后以25%烏拉坦經(jīng)耳緣靜脈注射麻醉(2.5 mL/kg)。將兔固定于實(shí)驗(yàn)臺上，剪去腹部體毛，常規(guī)消毒術(shù)野、鋪敷。取上腹正中切口5 cm，逐層止血，經(jīng)腹白線進(jìn)入腹腔，甲狀腺拉鉤牽拉腹壁，以生理鹽水紗布推開胃十二指腸，暴露兔肝門部，在右上腹部肝臟中找到膽囊。A組行單純觸摸膽囊后分兩層關(guān)腹；B組，開腹在膽囊三角中分清結(jié)構(gòu)后，膽囊管與膽囊動脈一并結(jié)扎，順逆結(jié)合切除膽囊。術(shù)后飼養(yǎng)1個月，取下腔靜脈血留置標(biāo)本。

1.3 兔縮膽囊素八肽的測定 推開十二指腸，10 mL注射器取下腔靜脈血5 mL，在生化速凝管冷凝約30 min，3 000 r/min離心機(jī)離心5 min，取上層血清2 mL，貯于-80 ℃冰箱保存待測CCK-8濃度。取完標(biāo)本后經(jīng)耳緣靜脈注射40 mL空氣處死兔。嚴(yán)格按照兔CCK-8 Elisa試劑盒說明書操作，用酶標(biāo)儀在 450 nm 波長測量各孔的光密度(OD值)。

2 結(jié) 果

兩組兔血清中CCK8濃度的比較，A組血清CCK-8濃度為(195.69±23.07) pg/mL，B組兔血清CCK8濃度為(117.72±26.55) pg/mL，B組較A組顯著降低(P<0.01)。

3 討 論

膽囊、膽總管和SO三者是統(tǒng)一、協(xié)調(diào)的結(jié)構(gòu)，在消化系統(tǒng)中起著重要作用。膽胰腸結(jié)合部是人體解剖結(jié)構(gòu)和生理調(diào)控最為復(fù)雜的區(qū)域之一，SO是位于膽管、胰管和十二指腸結(jié)合部位的神經(jīng)肌肉復(fù)合體，是膽汁和胰液的最終流出道，膽囊平滑肌的收縮和SO開放是一組協(xié)同的過程, 也是排出膽囊內(nèi)容物以及排空膽囊的生理基礎(chǔ)。這一運(yùn)動除了受豐富的內(nèi)臟運(yùn)動神經(jīng)來支配外，還受膽囊收縮素和促胰液素等體液因素調(diào)節(jié)。

CCK最早由Ivy和 Oldberg 首先在小腸黏膜抽提液中發(fā)現(xiàn),并因其有促進(jìn)膽囊收縮的功能而得名[3]。根據(jù)肽段的長度不同，目前發(fā)現(xiàn)的CCK有CCK83,CCK58,CCK39,CCK22,CCK8,CCK1等[4]，其中CCK8的生理效應(yīng)最大。生理?xiàng)l件下 ,由十二指腸黏膜分泌的CCK使膽囊收縮時(shí)也伴有SO舒張,而膽囊舒張時(shí)則SO呈收縮狀態(tài)。有研究[5]顯示餐后生理劑量CCK通過非腎上腺素能—非膽堿能抑制性神經(jīng)元介導(dǎo)抑制SO的周期性收縮和降低SO基礎(chǔ)壓 ,促使膽囊排空；此外,刺激迷走神經(jīng)使膽囊收縮而SO松弛。相反,切斷迷走神經(jīng)后膽囊擴(kuò)張而SO收縮。這種膽囊與SO活動在功能上的協(xié)調(diào)關(guān)系受神經(jīng)和體液的雙重調(diào)節(jié)。Q.Zheng等[6]對家兔進(jìn)行膽囊空腸吻合后SO緊張性收縮加強(qiáng),而自發(fā)性收縮減弱,其原因?yàn)槭中g(shù)后SO對激素作用的敏感性下降了，提示在SOD的病人行膽囊空腸吻合可能起不了治療作用。但膽囊切除術(shù)后，膽囊與oddi括約肌的這種協(xié)調(diào)關(guān)系是否受影響并不清楚。G.T.Krishnamurthy等[7]研究發(fā)現(xiàn) ,括約肌痙攣病人在使用CCK8后膽囊收縮，膽汁返流入肝內(nèi)外膽管，而停止注射時(shí)膽汁返流人膽囊。然而在臨床上可見到，在膽囊切除術(shù)后，在除外膽管結(jié)石及上腹其他疾病后，仍有近10%的患者發(fā)生類似膽絞痛的癥狀，一般稱為PCS，其原因并不十分清楚。本實(shí)驗(yàn)顯示，膽囊切除術(shù)后CCK8的濃度明顯下降。這種下降是否會使Oddi括約肌緊張度增加，松弛不夠，是否就是膽囊切除術(shù)后暴飲暴食后膽汁排出受限而誘發(fā)膽絞痛的原因，有待進(jìn)一步研究。

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