杜文釗，宋國強(qiáng)，劉海燕，馮淡開，沈志濱

(1.廣東藥學(xué)院 中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006； 2.廣東恒健制藥有限公司，廣東 江門 529040)

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香鱗毛蕨中間苯三酚類化合物的研究

杜文釗1，宋國強(qiáng)1，劉海燕1，馮淡開2，沈志濱1

(1.廣東藥學(xué)院 中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006； 2.廣東恒健制藥有限公司，廣東 江門 529040)

摘要:目的 對香鱗毛蕨中的間苯三酚類成分進(jìn)行研究。方法 采用硅膠、Sephadex LH-20凝膠、半制備液相等色譜手段對香鱗毛蕨的間苯三酚類化合物進(jìn)行純化分離，并根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。結(jié)果 分離得到了6個化合物，分別鑒定為白綿馬素BB(1)、白綿馬素PP(2)、黃綿馬酸AB(3)、Compound V(4)、綿馬素PB(5)、綿馬素BB(6)。結(jié)論 化合物1～4為首次在該植物中分離得到。

關(guān)鍵詞:香鱗毛蕨； 間苯三酚類衍生物； 化學(xué)成分； 結(jié)構(gòu)鑒定

香鱗毛蕨Dryopterisfragrans(L.) Schott是鱗毛蕨科鱗毛蕨屬植物，主要分布在中國東北地區(qū)和北部地區(qū)等地海拔1 km以上的山坡和巖石縫中。根據(jù)民間記載，香鱗毛蕨對皮膚病具有良好的療效。已有不少學(xué)者對其抑菌活性部位以及活性成分進(jìn)行研究，指出香鱗毛蕨主要含有間苯三酚類、黃酮類以及萜類等生物活性物質(zhì)，而其提取物對皮膚癬菌、銀屑病等藥理模型具有顯著作用[1-2]。此外，有報道指出，間苯三酚類衍生物的含量越高，香鱗毛蕨提取物的抑菌活性越好[3-4]。本文對香鱗毛蕨間苯三酚類化合物進(jìn)行分離研究，從中分離并鑒定出6個化合物，分別為白綿馬素BB(1)、白綿馬素PP(2)、黃綿馬酸AB(3)、Compound V(4)、綿馬素PB(5)、綿馬素BB(6)，其中化合物1～4為首次從該植物中分離得到。

1儀器與材料

美國Waters ACQUITY UPLC H-Class 超高效液相色譜儀(含QSM四元溶劑管理器、SM-FTN樣品管理器、PDA二極管陣列檢測器及 Empower 3工作站)； LC-6AD型半制備液相色譜儀(SPD-20A檢測器，日本島津公司)；LCQTM DECA離子阱質(zhì)譜儀(美國Thermo-Finnigan)；Varian UNITY INOVA 500型超導(dǎo)脈沖傅里葉變換核磁共振儀(美國Varian公司)；Zf20D暗箱式紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠)；YOKO-XR顯色加熱器(武漢藥科新技術(shù)開發(fā)公司)；X-5顯微熔點測定儀(鞏義市科瑞儀器有限公司)。

柱層析硅膠(青島海洋化工有限公司)；Sephadex LH-20型凝膠(Pharmacia公司)；羧甲基纖維素鈉(廣東汕頭市西隴化工廠)；固蘭BB鹽(上海化學(xué)試劑廠)；乙醇、正己烷、丙酮、甲酸、乙酸乙酯等均為分析純。

香鱗毛蕨采自黑龍江省五大連池，經(jīng)哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院張德連副教授鑒定為鱗毛蕨屬植物香鱗毛蕨Dryopterisfragrans(L.) Schott.。

2提取與分離

將香鱗毛蕨全草干燥粗粉10 kg，用10倍體積分?jǐn)?shù)50%乙醇回流提取3次，時間分別為2、1.5、1.5 h，減壓濃縮至無醇味，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%稀HCl酸沉，離心得浸膏1.2 kg。將樣品以乙酸乙酯/甲醇混合溶劑溶解，用硅膠拌樣，進(jìn)行硅膠色譜柱的初步分離。依次采用不同比例的石油醚-丙酮溶劑洗脫(體積比100∶1→70∶1→50∶1→30∶1→10∶1→1∶1)，并用薄層色譜跟蹤分析，合并相同流分，得A(30 g)、B(320 g)、C(110 g)、D(270 g)、E(160 g)、F(100 g)6個組分。A組分以石油醚-丙酮洗脫(體積比200∶1～50∶1)，合并相同流分，得A1、A2、A3、A44個組分。A1組分靜置后揮走部分溶劑，有沉淀析出，用甲醇清洗沉淀，得淡黃色粉末，以制備液相(體積分?jǐn)?shù)100%甲醇)進(jìn)行分離得到化合物5(80 mg)和化合物6(92 mg)。A3組分先采用凝膠柱色譜進(jìn)行分離，流份用薄層分析后合并。再以制備液相(體積分?jǐn)?shù)95%甲醇)分離，得到化合物1(40 mg)。A4組分反復(fù)硅膠柱層析得到化合物2(60 mg)。D組分以石油醚-丙酮洗脫(體積比60∶1～30∶1)，合并相同流分，得D1、D22個組分。D1組分經(jīng)Sephadex LH-20凝膠分離后，再以制備液相(體積分?jǐn)?shù)90%甲醇)分離，得到化合物3(16 mg)。E組分以石油醚-丙酮(體積比60∶1～10∶1)進(jìn)行硅膠柱層析，合并相同流分后得到E1、E2、E33個組分，E1組分經(jīng)制備色譜分離(體積分?jǐn)?shù)80%甲醇)得到化合物4(46 mg)。

3結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末(丙酮)，mp:134～136 ℃。UVλmax(甲醇):265 nm，硅膠薄層分析(GF254)，噴以質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.3%固藍(lán)BB鹽溶液105 ℃顯色為紅色斑點。LC-HRESI-MS：m/z459.202 6 [M-H]-(理論值：459.204 4)，分子式為C25H32O8。1H-NMR(CCl3D，500 MHz)δ：3.31(2H,s,H-1″)，3.17(2H,t,J=7.5 Hz,H-8)，1.73(2H,m,H-9)，1.01(3H,t,J=7.5 Hz,H-10)，1.47(3H,brs,H-11)，1.54(3H,brs,H-12)，3.17(2H,t,J=7.5 Hz,H-8′)，1.73(2H,m,H-9′)，1.01(3H,t,J=7.5 Hz,H-10′)，1.47(3H,brs,H-11′)，1.54(3H,brs,H-12′)，12.3(1H,s,4-OH)，12.3(1H,s,4-OH′)。13C-NMR (CCl3D，126 MHz)δ： 18.2(C-1″)，110.9(C-1)，187.7(C-2)，108.2(C-3)，199.4(C-4)，44.6(C-5)，173.5(C-6)，206.4(C-7)，43.1(C-8)，18.3(C-9)，14.1(C-10)，24.3(C-11)，25.5(C-12)，110.9(C-1′)，187.7(C-2′)，108.2(C-3′)，199.4(C-4′)，44.6(C-5′)，173.5(C-6′)，206.4(C-7′)，43.1(C-8′)，18.3(C-9′)，14.1(C-10′)，24.3(C-11′)，25.5(C-12′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]基本一致，故鑒定化合物1為白綿馬素BB(Albaspidin BB)。

化合物2：白色粉末(丙酮)，mp:128～130 ℃。UVλmax(甲醇)：262 nm，硅膠薄層分析(GF254)，噴以質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.3%固藍(lán)BB鹽溶液105 ℃顯色為紅色。LC-HRESI-MS：m/z431.170 7[M-H]-(理論值：431.171 3)，分子式為C23H28O8。1H-NMR(CCl3D，500 MHz)δ：3.31(2H,s,H-1″)，3.22(2H,t，J=7.5 Hz,H-8)，1.73(2H,J=7.5 Hz,H-9)，1.47(3H,brs,H-10)，1.54(3H,brs,H-11)，3.22(2H,t,J=7.5 Hz,H-8′)，1.73(2H,t,J=7.5 Hz,H-9′)，1.47(3H,brs,H-10′)，1.54(3H,s,J=7.5 Hz,H-11′)，12.3(1H,s,4-OH)，12.3(1H,s,4-OH′)。13C-NMR(CCl3D，126 MHz)δ：17.9(C-1″)，110.7(C-1)，198.6(C-2)，107.9(C-3)，187.7(C-4)，44.2(C-5)，173.2(C-6)，207.1(C-7)，34.7(C-8，8.4(C-9)，24.1(C-10)，25.3(C-11)，111.1(C-1′)，187.7(C-2′)，107.9(C-3′)，198.6(C-4′)，44.2(C-5′)，173.2(C-6′)，207.1(C-7′)，34.7(C-8′)，8.4(C-9′)，24.1(C-10′)，25.3(C-11′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]基本一致，故鑒定化合物2為白綿馬素PP(Albaspidin PP)。

化合物3：淡黃色粉末(丙酮)，mp:187～188 ℃。UVλmax(甲醇)：292 nm，硅膠薄層分析(GF254)，噴以質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.3%固藍(lán)BB鹽溶液105 ℃顯色為紅色。LC-HRESI-MS：m/z417.153 7[M-H]-(理論值：417.153 9)，分子式為C22H26O8。1H-NMR(CCl3D，500 MHz)δ：2.09(3H,s,H-11)，3.07(2H,t,J=7.5 Hz,H-8)，1.71(2H,m,H-9)，0.98(3H,t,J=7.5 Hz,H-10)，3.52(2H,brs,H-1″)，2.72(3H,s,H-8′)，1.46(3H,brs,H-9′)，1.50(3H,brs,H-10′)，16.1(1H,s,4-OH)，10.1(1H,s,6-OH)，11.5(1H,s,4-OH′)。13C-NMR(CCl3D，126 MHz)δ：17.3(C-1″)，112.2(C-1)， 160.4(C-2)，106.0(C-3)，161.5(C-4)，102.2(C-5)，155.6(C-6)，207.0(C-7)，45.9(C-8)，18.4(C-9)，14.2(C-10)，106.5(C-1′)，l87.5(C-2′)，108.0(C-3′)，198.1(C-4′)，44.4(C-5′)，171.8(C-6′)，203.7(C-7′)，29.5(C-8′)，24.4(C-9′)，24.9(C-10′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]基本一致，故鑒定化合物3為黃綿馬酸AB(Flavaspidic acid AB)。

化合物4：白色粉末(丙酮)，mp:134～136 ℃。UVλmax(甲醇)：333 nm，硅膠薄層分析(GF254)，噴以質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.3%固藍(lán)BB鹽溶液105 ℃顯色為黃色。LC-HRESI-MS：m/z237.110 0 [M+H]+(理論值237.110 7)，分子式為C13H16O4。1H-NMR(CCl3D，500 MHz)δ：1.75(3H,s,H-7)，2.84(2H,t,H-9)，1.55(2H,m,H-10)，0.89(3H,t,J=7.5 Hz,H-11)，1.26(3H,brs,H-12)，1.26(3H,brs,H-13)。13C-NMR(CCl3D，126 MHz)δ：106.4(C-1)，190.0(C-2)，49.7(C-3)，176.8(C-4)，103.7(C-5)，199.0(C-6)，7.3(C-7)，205.1(C-8)，42.4(C-9)，19.8(C-10)，14.5(C-11)，24.1(C-12)，25.1(C-13)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]基本一致，故鑒定化合物4為Compound V。

化合物5：淡黃色粉末(石油醚),mp:134～136 ℃ (甲醇)。FAB-MS：m/z447 [M+H]+，分子式為C24H30O8。1H-NMR(CCl3D，500 MHz)δ：3.73(3H，s，H-7)，3.08(2H，t，J=7 Hz，H-9)，1.72(2H，J=7 Hz，H-10)，0.99(3H，t，J=7 Hz，H-11)，1.53(3H，brs，H-12)3.57(2H，H-7′)，3.2(2H,q,J=7 Hz，H-9′)，1.17(3H，t，J=7 Hz，H-10′)，1.45(3H，brs，H-11′)，2.14(3H，s，H-12′)，15.6(1H，s，2-OH)，10.0(1H，s，6-OH)，18.5(1H，s，4-OH′)，10.7(1H，s，6-OH′)。13C-NMR(CCl3D，126 MHz)δ：112.4(C-1)，162.8(C-2)，107.5(C-3)，159.6(C-4)，109.1(C-5)，160.2(C-6)，61.5(C-7)，207.4(C-8)，42.9(C-9)，18.2(C-10)，13.9(C-11)，9.2(C-12)，110.9(C-1′)，198.6(C-2′)，108.0(C-3′)，187.4(C-4′)，44.2(C-5′)，171.7(C-6′)，17.1(C-7′)，206.8(C-8′)，42.8(C-9′)，18.4(C-10′)，13.3(C-11′)，24.3(C-12′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]基本一致，故鑒定化合物5為綿馬素PB(Aspidin PB)。

化合物6：黃白色粉末(石油醚)，mp:124～125 ℃(甲醇)。FAB-MS：m/z461[M+H]+，分子式為C25H32O8。1H-NMR(CCl3D，500 MHz)δ：3.73(3H，s，H-7)，3.73(3H，s，H-9)，1.71(2H，m，H-10)，0.99(3H，t，J=7 Hz，H-11)，1.44(3H，s，H-12)，3.57(2H，s，H-7′)，3.08(2H，m，H-9′)，1.71(2H，m，H-10′ )，1.01(3H，t，J=17 Hz，H-11′)，2.14(3H，s，H-12′)，1.53(3H，s，H-13′)，15.6(1H，s，2-OH)，10.0(1H，s，6-OH)，10.7(1H，s，4′-OH)，l8.6(1H，s，6′-OH)。13C-NMR(CCl3D，126 MHz)δ：112.4(C-1)，162.8(C-2)，107.4(C-3)，159.5(C-4)，109.4(C-5)，160.2(C-6)，61.5(C-7)，206.8(C-8)，44.2(C-9)，18.0(C-10)，13.9(C-11)，9.2(C-12)，110.9(C-1′)，198.0(C-2′)，108.2(C-3′)，187.5(C-4′)，44.2(C-5′)，171.8(C-6′)，17.1(C-7′)，206.5(C-8′)，42.9(C-9′)，18.1(C-10′)，13.9(C-11′)，24.2(C-12′)，25.2(C-13′)。通過UPLC檢測，該化合物與實驗室之前已確證的綿馬素BB出峰時間一致。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]基本一致，故鑒定化合物6為綿馬素BB(Aspidin BB)。

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(責(zé)任編輯：陳翔)

Study on phloroglucinol derivatives ofDryopterisfragrans(L.) Schott

DU Wenzhao1,SONG Guoqiang1,LIU Haiyan1,FENG Dankai2,SHEN Zhibin1

(1.SchoolofTraditionalChineseMedicine,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China; 2.GuangdongHengjianPharmaceuticalLimitedCompany,Jiangmen529040,China)

Abstract:Objective To study on phloroglucinol derivatives of Dryopteris fragrans (L.) Schott. Methods The phloroglucinol derivatives of Dryopteris fragrans (L.) Schott were isolated and purified by silica gel column chromatography,Sephadex LH-20 column chromatography and semi-preparative chromatography. All the compounds were identified by physiochemical properties and spectral data. Results 6 compounds were isolated and identified as Albaspidin BB(1)、Albaspidin PP(2)、Flavaspidic acid AB(3)、Compound V(4)、Aspidin PB(5)、Aspidin BB(6). Conclusion Compounds 1-4 were isolated from Dryopteris fragrans (L.) Schott for the first time.

Key words:Dryopteris fragrans (L.) Schott; phloroglucinol derivatives; chemical; structural identification

DOI:10.16809/j.cnki.1006-8783.2015102802

中圖分類號：R284.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號:1006-8783(2016)01-0022-03

作者簡介：杜文釗(1990—)，男，2013級碩士研究生，Email:747931467@qq.com； 通信作者：沈志濱(1964—)，女，博士，教授，從事中藥及復(fù)方化學(xué)成分研究，Email:szb8113@126.com。

基金項目：廣東省應(yīng)用型科技研發(fā)專項(2015B020234009)

收稿日期：2015-10-28

網(wǎng)絡(luò)出版時間：2016-01-15 16:53網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160115.1653.005.html