姬艷麗 姚余有 趙國琴 吳慶四 陳可洋 徐德祥

摘要：本綜合性實驗結(jié)合理論課“肝膽疾病的生物化學(xué)診斷”章節(jié)內(nèi)容，由學(xué)生查閱文獻(xiàn)，選擇一種急性肝損傷實驗?zāi)Ｐ徒⒎椒ǎM(jìn)行實驗設(shè)計，選擇檢測指標(biāo)，確定實驗方法，進(jìn)行課題實施、質(zhì)量控制、實驗數(shù)據(jù)匯總、撰寫論文。本綜合性實驗的開設(shè)和實施既能激發(fā)學(xué)生對疾病的思考，更好地理解肝膽功能異常和代謝紊亂所致疾病的發(fā)病機(jī)制，又有助于提高大學(xué)生的實驗操作技能、創(chuàng)新能力和基本的科研素質(zhì)，為以后的臨床和科研實踐打下基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：臨床生物化學(xué)與檢驗；肝功能；綜合性實驗；急性肝損傷

中圖分類號：G642.0；R2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1674-9324（2016）09-0240-02

臨床生物化學(xué)與檢驗（clinical biochemistry and biochemical test）是用化學(xué)和生物化學(xué)技術(shù)檢測人體標(biāo)本，了解人體生理、病理狀態(tài)下物質(zhì)組成和代謝，為臨床疾病的預(yù)防、診斷、治療和預(yù)后提供依據(jù)的學(xué)科，其核心是向臨床提供準(zhǔn)確、有效、及時的檢驗報告[1]。它是生物化學(xué)的重要組成部分，是醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)的主干專業(yè)課程，同時也是臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)生《實驗診斷學(xué)》課程的重要內(nèi)容。

肝膽疾病的生物化學(xué)診斷是醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)《臨床生物化學(xué)與檢驗》的主要內(nèi)容。肝臟是人體內(nèi)最大的、功能最多的實質(zhì)性腺體器官，被喻為人體最大的化工廠。它參與體內(nèi)消化、代謝、排泄、解毒和免疫等過程，是具有重要而復(fù)雜代謝功能的器官。為檢查肝臟功能完整性、有無疾病和損傷，從不同角度設(shè)計了許多檢查肝臟的實驗項目，臨床上常將肝臟實驗室檢查統(tǒng)稱為肝功能檢查。肝功能實驗檢查的目的是通過某些生物化學(xué)指標(biāo)檢測，間接評估肝臟功能，為臨床醫(yī)生正確地做出肝膽疾病診斷、病程檢測及療效觀察等提供重要參考信息，可選擇的肝功能指標(biāo)很多，了解每項檢查的臨床價值，對評價肝臟功能非常重要。

急性肝損傷（acute liver injury）一般由短期接觸較大劑量肝毒物或肝臟功能不全時接觸某種肝毒物引起，病理改變常見于肝細(xì)胞壞死、脂肪變性、膽汁淤積等。多種因素如化學(xué)性肝毒物、病毒感染、免疫性因素、乙醇等均可引起急性肝損傷，甚至肝功能衰竭，其防治研究一直是熱門課題[2-5]。本次綜合性實驗主要在醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)本科學(xué)生中開設(shè)，其主要內(nèi)容通過建立急性肝損傷模型，選擇2～3個反映肝細(xì)胞損傷狀況的指標(biāo)進(jìn)行檢測。

一、實驗?zāi)康?/p>

主要包括熟悉文獻(xiàn)查閱方法、實驗設(shè)計和綜合報告的撰寫格式；熟悉生物材料樣品采集和取樣原則及一般要求；掌握肝功能檢驗項目的選擇原則、肝膽疾病的臨床酶學(xué)分類、轉(zhuǎn)氨酶分類及其檢測意義；掌握ALT、AST主要測定方法原理、操作步驟、注意事項；初步掌握檢測數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析方法。

二、實驗課程基本流程

（一）實驗設(shè)計

本階段主要充分利用網(wǎng)絡(luò)資源，使學(xué)生熟悉文獻(xiàn)查閱方法。通過查閱文獻(xiàn)資料，首先了解目前國內(nèi)外研究中常用的急性肝損傷模型，選擇一種化學(xué)物質(zhì)建立急性肝損傷模型，確定染毒劑量、方式、生物標(biāo)本的采集時間；確定實驗動物、性別、年齡及組別；列出所需試劑與器材清單；樣品預(yù)處理方法；檢測指標(biāo)、檢測方法的選擇；實驗結(jié)果的統(tǒng)計與處理以及論文撰寫。最終以論文開題的形式在班級展示，并由專業(yè)課老師給予點評和指導(dǎo)，提交一份開題報告。

（二）課題實施

此部分為本次綜合性實驗的主體部分，包括動物的選擇、染毒、生物樣品的采集、預(yù)處理、分析檢測、數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析、論文撰寫等。在這個階段，要求學(xué)生需要熟悉或掌握的知識點較多。比如：理論部分要求掌握：（1）肝功能檢驗項目的選擇原則；（2）肝膽疾病的臨床酶學(xué)分類；（3）轉(zhuǎn)氨酶分類及其檢測意義；（4）ALT、AST主要測定方法；（5）連續(xù)監(jiān)測法及賴氏法測定ALT、AST的原理、注意事項。操作部分：（1）試劑的稱量與配制；（2）實驗動物的抓取方法、編號標(biāo)記、分組原則；（3）實驗動物的染毒技術(shù)、生物樣品的采集、預(yù)處理；（4）賴氏法測定ALT、AST的操作步驟；（5）數(shù)據(jù)的處理、統(tǒng)計分析以及論文撰寫等。

（三）數(shù)據(jù)分析和撰寫報告

一個完整的臨床生物化學(xué)檢驗過程，包括樣品采集、樣品預(yù)處理、分析測定、數(shù)據(jù)處理和撰寫報告五個步驟。在此過程中，每個步驟均可能產(chǎn)生實驗誤差，如所選取的樣品是否具有代表性、樣品預(yù)處理方法選擇是否合適、分析方法及儀器和器皿、化學(xué)試劑和實驗用水等，還包括檢驗人員的技術(shù)水平和實驗環(huán)境。為了保證實驗室提供的分析數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，首先必須對上述各方面實施嚴(yán)格的質(zhì)量管理措施，盡量減小和避免實驗誤差；其次要求同學(xué)們掌握生化檢測數(shù)據(jù)（特別是組間數(shù)據(jù)）的表示方式；在統(tǒng)計分析時，要求掌握兩組或多組間數(shù)據(jù)的比較方法，正確應(yīng)用三線表；最后，熟悉科研論文的書寫格式，以小論文的形式把此次綜合性實驗的結(jié)果展示出來。

三、考核方式

本實驗采取分組教學(xué)，為最大限度調(diào)動同學(xué)們的積極性及團(tuán)隊協(xié)作精神，保證每一位同學(xué)都能動手操作，安排2～3人一個小組，各組可選擇不同的急性肝損傷模型。

（一）考核方式及要求

1.開題報告?？梢园ㄒ韵聝?nèi)容：

（1）背景：急性肝損傷簡介，常見的引起肝損傷的化學(xué)物質(zhì)，目前急性肝損傷常用的動物模型有哪些？可以采用哪些指標(biāo)來評價急性肝損傷？

（2）實驗設(shè)計：根據(jù)文獻(xiàn)，選擇一種化學(xué)物質(zhì)建立肝損傷模型，并對相應(yīng)的檢測指標(biāo)進(jìn)行檢測；介紹所選擇的檢測指標(biāo)、檢驗意義、檢測原理、操作步驟及注意事項。

（3）實驗過程中的質(zhì)量控制、實驗結(jié)果的統(tǒng)計與分析、經(jīng)費(fèi)預(yù)算等。

2.以實驗小組為單位進(jìn)行綜合技能考核。要求標(biāo)準(zhǔn)曲線線性符合要求，成功建立急性肝損傷模型。

3.每組以小論文的形式提交一份實驗報告。報告的基本內(nèi)容包括：研究現(xiàn)狀及意義、實驗動物選擇、材料與方法、結(jié)果分析、討論、參考文獻(xiàn)等。論文撰寫要求格式準(zhǔn)確、條理清晰、內(nèi)容真實。

（二）成績評定

實驗設(shè)計書寫占總成績的20%，實驗操作與技能考核占50%，科研論文占30%。

四、討論

目前醫(yī)學(xué)院校本科生開設(shè)的實驗教學(xué)多為驗證性實驗，學(xué)生只參與完成整個實驗的一小部分，缺乏自主設(shè)計的綜合性實驗，不能體現(xiàn)創(chuàng)新性[6]。因而，開設(shè)“設(shè)計性綜合實驗”不僅可以強(qiáng)化學(xué)生對多種實驗技能的掌握，還能夠調(diào)動學(xué)生的組織協(xié)作能力、求知欲和探索精神。

臨床生物化學(xué)檢驗是一個連續(xù)的過程，包括標(biāo)本的采集、運(yùn)送、確認(rèn)、處理、分析檢測、數(shù)據(jù)的處理、檢驗結(jié)果的審核、檢驗結(jié)果報告及結(jié)果解釋等[7]。為使學(xué)生更好地理解理論知識并聯(lián)系臨床應(yīng)用，同時提高學(xué)生學(xué)習(xí)的興趣，將臨床生化檢測實驗設(shè)計成相對連續(xù)完整的從肝損傷模型建立到生化指標(biāo)檢測的綜合設(shè)計性實驗，使學(xué)生能夠觀察疾病的發(fā)生發(fā)展，在實踐中激發(fā)對疾病發(fā)病機(jī)制的思考。

建立疾病動物模型是研究疾病發(fā)生發(fā)展規(guī)律及開展防治研究的常用方法。相對肥胖大鼠血糖血脂的檢測綜合性實驗而言，建立急性肝損傷模型的技術(shù)比較成熟、實驗周期短、易操作，并且重復(fù)性也較好。本實驗課程從查閱文獻(xiàn)、課題設(shè)計、模型建立、取材及檢測再到數(shù)據(jù)分析及論文撰寫，通過整個流程即強(qiáng)化了學(xué)生對臨床生化多種實驗技能的掌握，又培養(yǎng)了學(xué)生獨立動手能力、善于發(fā)現(xiàn)問題的能力及處理實驗數(shù)據(jù)、分析實驗結(jié)果的能力。我系自在檢驗醫(yī)學(xué)系本課學(xué)生開展急性肝損傷綜合性實驗以來，帶領(lǐng)學(xué)生對各種經(jīng)典的肝損傷模型（比如四氯化碳、對乙酰氨基酚、異煙肼等）進(jìn)行了驗證，此外，積極開展重金屬導(dǎo)致的急性肝損傷模型研究，并鼓勵其總結(jié)部分研究結(jié)果寫成科研論文發(fā)表，極大地調(diào)動了學(xué)生的積極性，對開展科學(xué)研究的思路也有了一個基本的認(rèn)識，為以后的臨床和科研實踐打下基礎(chǔ)。

如前所述，臨床生物化學(xué)和生物化學(xué)檢驗是一門高度綜合性的應(yīng)用科學(xué)，課程涉及多學(xué)科理論，課程的實踐性、應(yīng)用性強(qiáng)，對學(xué)生的實踐性和操作性要求強(qiáng)。因此，在開展實驗過程中也遇到一些問題：比如，在開始綜合性實驗之前，要求學(xué)生需要有一定的基礎(chǔ)知識和數(shù)據(jù)分析能力。而學(xué)生的知識儲備、實驗基礎(chǔ)技能均比較薄弱，在文獻(xiàn)查找、閱讀、實驗設(shè)計、實驗操作及數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計上均存在很多不足，因此實驗不能太復(fù)雜，此外要合理安排綜合性實驗教學(xué)時間（靈活、機(jī)動，不能與考試時間相沖突），確保實驗順利進(jìn)行。

參考文獻(xiàn)：

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[7]張捷，楊碩.臨床生物化學(xué)檢驗的回顧與展望，中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志[J].2013，36（1）：22-24.