蘇 亮，李 江，歐偉業(yè)（上海海利生物技術(shù)股份有限公司，上海 201403）

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不同免疫程序?qū)ωi瘟免疫效果的影響

蘇 亮，李 江，歐偉業(yè)
（上海海利生物技術(shù)股份有限公司，上海 201403）

摘 要：通過(guò)采用阻斷ELISA抗體檢測(cè)法檢測(cè)了豬瘟母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律并比較了5種豬瘟免疫程序的免疫效果。結(jié)果表明，仔豬體內(nèi)母源抗體水平隨著日齡的增長(zhǎng)不斷下降，21～28日齡下降幅度最大，35日齡時(shí)母源抗體水平低于保護(hù)限值（抗體阻斷率為40%），抗體陽(yáng)性率為44.64%。未進(jìn)行超前免疫組（C組、D組、E組）比較，最佳首免日齡為28日齡；超前免疫組中B組（0、60）免疫效果比A組（0、35、60）免疫效果好；綜合比較確定B免疫程序（0、60）為最佳免疫方案。通過(guò)研究為規(guī)模化豬場(chǎng)制定合理的豬瘟免疫程序提供了較好的參考價(jià)值。

關(guān)鍵詞：豬瘟；母源抗體；首免日齡；免疫程序

豬瘟（CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種豬的高度接觸性傳染病[1]，由于其傳播速度快、病死率高，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，長(zhǎng)期以來(lái)許多國(guó)家將豬瘟列為疫病防治的重點(diǎn)對(duì)象，國(guó)際獸疫局（OIE）更是將其列為必須上報(bào)的傳染病之一[2]。我國(guó)在豬瘟預(yù)防和控制方面主要依靠豬瘟疫苗免疫，其中我國(guó)自主研制的豬瘟兔化弱毒疫苗免疫原性強(qiáng)、性能穩(wěn)定、安全性高，處于世界領(lǐng)先水平，一直以來(lái)在降低豬瘟的感染率和發(fā)病率發(fā)面取得了較為顯著的效果。但在免疫時(shí)受到仔豬體內(nèi)母源抗體的干擾及其他多種因素的影響，生產(chǎn)實(shí)踐中豬瘟仍然頻繁發(fā)生，并出現(xiàn)了多種新的流行特征，多表現(xiàn)為非典型豬瘟、溫和型豬瘟、仔豬先天感染及種豬持續(xù)感染等，利用傳統(tǒng)免疫程序免疫時(shí)，出現(xiàn)免疫失敗的情況也不斷增多[3]。因此，合理制定免疫程序是取得良好免疫效果的關(guān)鍵。本研究以新疆省石河子地區(qū)某規(guī)?；i場(chǎng)為研究對(duì)象，對(duì)母源抗體的消長(zhǎng)進(jìn)行了監(jiān)測(cè)并對(duì)5種免疫程序的免疫效果進(jìn)行了比較，結(jié)合豬瘟抗體檢測(cè)，以期確定一個(gè)對(duì)石河子地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)行之有效的免疫程序。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)用豬來(lái)源于新疆石河子地區(qū)某規(guī)模化豬場(chǎng)，選擇年齡、胎次、飼養(yǎng)狀況、環(huán)境條件相近的種母豬（母豬于配種前3個(gè)星期注射豬瘟活疫苗1頭份），所產(chǎn)仔豬用于免疫程序試驗(yàn)，仔豬21日齡斷奶，在正常條件下飼養(yǎng)管理。

1.1.2 疫苗

豬瘟兔源弱毒凍干苗購(gòu)自上海海利生物技術(shù)股份有限公司。

1.1.3 試劑盒

豬瘟抗體阻斷 ELISA試劑盒（批號(hào)為43200-A651）購(gòu)自北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 仔豬母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律

選取從未免疫豬瘟疫苗的5窩仔豬，每窩定義為一組，共有仔豬56頭（11 頭/第1組，10頭/第2組，12頭/ 第3組，12頭/第4組，11頭/第5組），分別在吃初乳前、7 d、14 d、21 d、28 d和35 d進(jìn)行前腔靜脈采血，分離獲得血清，采用豬瘟抗體阻斷ELISA試劑盒檢測(cè)仔豬在不同日齡時(shí)母源抗體的變化規(guī)律并計(jì)算抗體陽(yáng)性率。

1.2.2 不同免疫程序免疫效果的比較

試驗(yàn)共設(shè)置5個(gè)免疫組，每個(gè)免疫組選取5窩豬。A組（52頭仔豬）：乳前首免1頭份、35日齡二免1頭份和60日齡三免1頭份的豬瘟疫苗；B組（54頭仔豬）：乳前首免1頭份、60日齡二免1頭份豬瘟疫苗；C組（54頭仔豬）： 21日齡首免1頭份、60日齡二免1頭份豬瘟疫苗；D組（53頭）28日齡首免1頭份、60日齡二免1頭份豬瘟疫苗；E組（52頭仔豬）35日齡首免1頭份、60日齡二免1頭份豬瘟疫苗。分別在免疫仔豬的7、14、21、28、35、42、49、56、63、70和140日齡時(shí)進(jìn)行前腔靜脈采血，每組每次隨機(jī)抽檢25頭，分離獲得血清，用豬瘟抗體阻斷ELISA試劑盒檢測(cè)豬瘟抗體水平。

表1　仔豬體內(nèi)母源豬瘟抗體平均阻斷率檢測(cè)結(jié)果

1.2.3 血樣的處理與抗體檢測(cè)

每次采血量為3～5 mL，3 000 r/ min 離心10 min，分離獲得血清， -20 ℃冷凍保存。全程采血結(jié)束后，集中利用豬瘟抗體阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行抗體檢測(cè)。

表2　不同免疫組仔豬豬瘟抗體平均阻斷率檢測(cè)結(jié)果

2 結(jié)果

2.1 仔豬母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律

由表1可知，新生仔豬在吃乳前，母源豬瘟抗體平均阻斷率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于保護(hù)限值（阻斷率為40%），抗體陽(yáng)性率為0；仔豬在7日齡時(shí)，豬瘟抗體水平達(dá)到最高，抗體阻斷率范圍在68%～74%之間，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于保護(hù)限值，抗體陽(yáng)性率為100%；隨著仔豬日齡的增長(zhǎng)抗體水平逐漸下降，至35日齡時(shí)，其中有4組仔豬的豬瘟抗體平均阻斷率下降至40%以下，抗體陽(yáng)性率只有44.64%；另外，我們發(fā)現(xiàn)仔豬在21～28日齡時(shí)，抗體下降幅度最大。

2.2 不同程序免疫仔豬豬瘟免疫抗體水平差異

由表2可知，A組(超免，35日齡，60日齡）、B組（超免，60日齡）和D組（35日齡，60日齡）在抗體監(jiān)測(cè)的全程阻斷率均高于保護(hù)界限；而C組（21日齡，60日齡）在仔豬42日齡、70日齡和140日齡時(shí)抗體阻斷率均低于保護(hù)限值；E組（35日齡，60日齡）在仔豬35日齡和42日齡時(shí)抗體阻斷率低于保護(hù)限值。

3 分析和討論

大量臨床試驗(yàn)表明，豬瘟疫苗首免時(shí)間的確定與仔豬體內(nèi)豬瘟母源抗體水平的高低有著直接的關(guān)系。因此，本研究對(duì)某規(guī)模化豬場(chǎng)的5窩仔豬母源抗體消長(zhǎng)過(guò)程進(jìn)行了跟蹤監(jiān)測(cè)，結(jié)果表明：吃乳前，仔豬體內(nèi)基本無(wú)母源抗體存在，7日齡時(shí)豬瘟母源抗體水平最高，隨著仔豬日齡的增長(zhǎng)豬瘟母源抗體呈逐漸下降趨勢(shì)，其中21日齡至28日齡母源抗體下降幅度最大，至35日齡時(shí)55.36%的仔豬已經(jīng)低于保護(hù)界限。

根據(jù)仔豬母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律，設(shè)置5個(gè)免疫組，分別為A組（超免，35日齡，60日齡）、B組（超免，60日齡）、C組（21日齡，60日齡）、D組（28日齡，60日齡）和E組（35日齡，60日齡）。結(jié)合檢測(cè)結(jié)果對(duì)未超免組進(jìn)行分析，當(dāng)仔豬21日齡時(shí)，各組仔豬母源抗體阻斷率仍高于保護(hù)界限，抗體陽(yáng)性率超過(guò)80%，如在該階段進(jìn)行豬瘟首免，可能高水平的豬瘟母源抗體會(huì)中和部分疫苗毒，使疫苗達(dá)不到抗原刺激的閾值，從而導(dǎo)致免疫失敗。在21日齡首免后1周，豬瘟抗體阻斷率出現(xiàn)了大幅度下降，可能就是由于母源抗體的干擾所致。許多延用傳統(tǒng)免疫程序[4]（20～23日齡首免、60～65日齡二免）的豬場(chǎng)出現(xiàn)免疫失敗的案例有力地證實(shí)了這一推斷是正確的。在E免疫組中，仔豬35日齡時(shí)，母源抗體阻斷率已低于保護(hù)限值，在35日齡首免后的1周，抗體水平才緩慢上升，但仍未達(dá)到保護(hù)限值，致使出現(xiàn)了一段免疫空白期，在此階段極易導(dǎo)致野毒感染[5]。而28日齡首免后，抗體阻斷值一直高于保護(hù)限值，至140日齡時(shí)，抗體阻斷值達(dá)到53%。因此可以認(rèn)為28日齡為未超免組中最佳的首免日齡。

采用超前免疫的目的是為了克服母源抗體的干擾，同時(shí)又能預(yù)防豬瘟病毒對(duì)仔豬的感染。試驗(yàn)中超前免疫的A組和B組均在免疫后1周獲得最高的抗體保護(hù)率，高達(dá)74%，隨后抗體阻斷率呈現(xiàn)緩慢下降趨勢(shì)。A組于35日齡進(jìn)行了二免，二免1周后，抗體阻斷率不升反降，2周后抗體水平略有回升，在60日齡進(jìn)行三免后，抗體水平基本無(wú)變化，至140日齡時(shí)，抗體阻斷率升為54%。而B(niǎo)組推遲二免至60日齡，免疫后10 d左右抗體水平快速上升，至140日齡時(shí)，抗體阻斷率升為62%。這與羅勇[6]，林毅[7]的研究結(jié)果相符合，超前免疫既可以避免母源抗體的干擾，又能長(zhǎng)時(shí)間保持仔豬體內(nèi)抗體水平，可保證絕大多數(shù)豬在出欄時(shí)仍能抵抗豬瘟病毒的感染。同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)A組進(jìn)行了3次免疫，B組只進(jìn)行了2次免疫，但至140日齡時(shí)，A組的抗體阻斷率卻低于B組，這也證明免疫效果與免疫次數(shù)無(wú)關(guān)。

綜合比較5個(gè)免疫組的豬瘟抗體水平，A組、B組和D組從仔豬出生至140日齡抗體阻斷值均高于保護(hù)限值，但A組和D組抗體阻斷值的離散度較大，而B(niǎo)組抗體水平高，免疫次數(shù)少，免疫效果最好，因此認(rèn)為B免疫程序?yàn)樽罴衙庖叱绦颉?/p>

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收稿日期：（2015-10-21）