■熊云霞　馬現(xiàn)永　胡友軍　王　麗　鄭春田

(廣東省農(nóng)業(yè)科學院動物科學研究所農(nóng)業(yè)部華南動物營養(yǎng)與飼料重點實驗室國家畜禽育種重點實驗室廣東省動物育種與營養(yǎng)公共實驗室廣東省畜禽育種與營養(yǎng)研究重點實驗室,廣東廣州510640）

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葡萄糖氧化酶在畜牧業(yè)中的應用及檢測方法研究進展

■熊云霞馬現(xiàn)永胡友軍王麗鄭春田

(廣東省農(nóng)業(yè)科學院動物科學研究所農(nóng)業(yè)部華南動物營養(yǎng)與飼料重點實驗室國家畜禽育種重點實驗室
廣東省動物育種與營養(yǎng)公共實驗室廣東省畜禽育種與營養(yǎng)研究重點實驗室,廣東廣州510640）

摘要：葡萄糖氧化酶（Glucose oxidase, GOD）作為一種綠色環(huán)保飼料添加劑，能改善飼料質(zhì)量、改善動物腸道微生態(tài)平衡、提高飼料利用率、促進動物生長，在飼料中應用可一定程度取代抗生素的使用。文中主要綜述了GOD的理化和酶學特性、GOD的功能及其在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中的應用、酶活檢測方法的原理及應用研究進展，并對各檢測方法的優(yōu)缺點進行了比較。

關(guān)鍵詞：葡萄糖氧化酶；飼料添加劑；酶活檢測方法

近年來，抗菌素類添加劑在畜牧業(yè)中發(fā)揮巨大作用，但是其藥物殘留和耐藥性問題也日益凸顯。葡萄糖氧化酶（Glucose oxidase，GOD）作為一種綠色環(huán)保飼料添加劑，具有無殘留、無污染的特點[1]，可減緩飼料氧化變質(zhì)、改善動物腸道微生態(tài)平衡、提高飼料利用率、促進動物生長、降低中毒反應，預防動物腸道感染、腹瀉，在一定程度上可起到類似于抗生素、酸化劑和益生菌的作用[2-12]。本文主要綜述了GOD的理化和酶學性質(zhì)、GOD在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中的應用及功能、酶活檢測方法的原理及其應用研究進展，并對各檢測方法的優(yōu)缺點進行了比較。

1 GOD的理化及酶學性質(zhì)

GOD是β-D-吡喃型葡萄糖需氧脫氫酶的簡稱，其系統(tǒng)名稱叫β-D-葡萄糖∶氧1-氧化還原酶。GOD酶液為黃色至棕色液體，高純度GOD為淡黃色晶狀粉末。不同來源GOD的分子量介于130~175 kDa之間（多為150 kDa左右），最高可達186 kDa（源自黑曲霉）[13]。GOD易溶于水，不溶于有機溶劑，最大光吸收波長為377 nm和455 nm。在紫外光下無熒光，但在熱、酸或堿處理后具有特殊的綠色。

GOD是由相同糖蛋白經(jīng)二硫鍵共價結(jié)合而成的同型二聚體，每個糖蛋白單體含有2個區(qū)域：其中一個活性區(qū)域以非共價的β-折疊的形式與部分輔基FAD緊密結(jié)合，輔基FAD在該酶促反應過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用；另一個活性區(qū)域以4個α-螺旋支撐1個反向平行的β-折疊形式與底物β-D-葡萄糖結(jié)合。來源于P.amagasakiense的GOD活性位點關(guān)鍵氨基酸殘基有Tyr -73、Phe-418、Trp-430、Arg-516、Asn-518、His-520和His-563[14]，其中Arg-516和Asn-518是GOD和其底物β-D-葡萄糖異性結(jié)合最關(guān)鍵氨基酸，有芳香族殘基的Tyr-73、Phe-418和Typ-430對于催化正確的反應方向及葡萄糖氧化的最大速率非常重要，而His-520和His-563在反應過程中與底物葡萄糖的1-OH形成氫鍵（如圖1）。

圖1 GOD輔基FAD和主要活性位點三維結(jié)構(gòu)[13]

GOD的作用原理是：在有氧環(huán)境下氧化β-D-葡萄糖C-1氧化生成D-葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯，并產(chǎn)生過氧化氫；然后，過氧化氫酶將過氧化氫分解生成水和氧；最后，水與D-葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯結(jié)合產(chǎn)生葡萄糖酸[13]（如圖2）。影響其活性的因素主要有溫度、pH值和供氧量。GOD活性對溫度變化比較敏感，不同來源GOD的最適反應溫度不同，來源于P.funiculosum433 的GOD的最適反應溫度為25~30℃[15]，來源于P.amaga?sakiense ATCC 28686的最適溫度為40~60℃[16-17]。不同來源的GOD的動力學參數(shù)Km、Vmax相差也比較大。pH值在3.5~6.5酶活比較穩(wěn)定，最適pH值為5.0~ 5.6，此范圍內(nèi)酶活基本不變。GOD半衰期在37℃時為30 min左右，固定化后酶活性更高，固定酶制劑在2~8℃條件下可穩(wěn)定保存1年,在-15℃下可穩(wěn)定保存8年。在底物濃度比較低時，酶反應速率隨底物濃度增高而加快；在底物濃度較高時，底物濃度對酶反應的影響不大，葡萄糖濃度在5%~20%，反應速率幾乎不變。Ag+、Hg+、亞硫酸氫鈉對酶有強烈的抑制作用，而Na+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、Mn2+對酶有不同程度的激活作用。

圖2 GOD反應原理[14]

2 GOD的功能及在畜牧業(yè)上應用

GOD廣泛地分布于動物、植物和微生物體內(nèi)，但由于微生物具有來源廣、生長繁殖速度快等特點，故其成為GOD的主要來源，目前主要生產(chǎn)菌株為青霉和黑曲霉[18- 19]。歐盟和美國早已將產(chǎn)自黑曲霉的GOD列入允許動物飼料中使用的酶制劑范圍，1999年我國將產(chǎn)自青霉的GOD規(guī)定為允許使用的飼料級酶制劑之一，2013年我國農(nóng)業(yè)部限定特異青霉和黑曲霉為允許使用的飼料級GOD生產(chǎn)菌株，這大大增加了GOD的來源，為拓寬GOD的應用范圍提供了保障。

2.1 GOD在畜牧業(yè)上的應用

GOD作為一種飼用酶制劑廣泛應用于動物養(yǎng)殖中，目前的研究主要集中于仔豬、肉雞和蛋雞、家兔養(yǎng)殖等,在反芻動物、水產(chǎn)、家蠶養(yǎng)殖上也有一定應用[20]。

2.1.1 GOD在仔豬生產(chǎn)上的應用

大量研究表明，日糧中添加適量GOD可以顯著提高仔豬日糧能量、蛋白質(zhì)、脂肪和纖維消化率，改善斷奶仔豬腸道健康，明顯改善生產(chǎn)性能和健康水平。張宏宇等[21]在評價GOD對斷奶仔豬生長性能的影響時發(fā)現(xiàn)，斷奶仔豬飼糧中添加200 mg/kg的GOD可顯著提高斷奶仔豬的生長性能、降低腹瀉率以及改善養(yǎng)殖經(jīng)濟效益。安文亭等[22]在商品豬（杜×長×大）健康仔豬中添加GOD，可顯著提高仔豬日糧能量、蛋白質(zhì)、脂肪和纖維消化率（P<0.05），生產(chǎn)性能和健康水平，GOD在仔豬日糧中的適宜添加量為30 U/kg。楊久仙等[23-24]的研究進一步發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加0.1%~0.2%的GOD能夠降低斷奶仔豬胃腸道pH值，改善腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，提高營養(yǎng)物質(zhì)消化率和飼料轉(zhuǎn)化效率，提高氮利用效率，促進機體營養(yǎng)物質(zhì)的合成，從而提高斷奶仔豬日增重。湯海鷗等[25-26]研究顯示，仔豬日糧中添加適量GOD可有效提高日增重、采食量，改善料肉比，有效改善仔豬腸道健康，提高血清中相關(guān)激素含量；GOD組仔豬糞便中沙門氏菌數(shù)顯著低于對照組(P<0.05)；GOD組三碘甲狀腺原氨酸、甲狀腺素和生長激素含量顯著高于對照組(P<0.05)。

2.1.2 GOD在家禽生產(chǎn)上的應用

GOD在家禽中的應用主要集中在肉雞和蛋雞，對于其在種雞中的應用也有一定的研究。龐家滿等[27]研究表明，GOD對37~70日齡黃羽肉雞的日增重、料重比和養(yǎng)分代謝率有顯著影響，以添加380 g/t GOD最適宜。貢筱等[28]發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加不同劑量復合酶能提高肉雞生長性能。宋海彬等[29-31]在肉雞日糧中添加GOD，一方面提高肉雞十二指腸和空腸絨毛高度、降低隱窩深度、增加絨毛高度/隱窩深度（V/C），顯著提高肉雞小腸淀粉酶、胰蛋白酶的活性（P<0.05）；另一方面，促進肉雞蛋白質(zhì)的合成代謝、提高免疫機能，GOD提高了肉雞胸腺、脾臟、法氏囊指數(shù)，顯著提高了肉雞血清IgG水平和血清球蛋白水平，不同程度地提高了肉雞血清超氧化物歧化酶水平，降低了血清丙二醛水平，具有一定的抗氧化和抗應激的作用。張曉云[32]和趙國先等[33-36]對蛋雞的研究表明，蛋雞飼糧中添加GOD,加強了蛋雞體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成代謝,提高了蛋雞的產(chǎn)蛋性能，降低了破(軟)蛋率，顯著提高了飼料轉(zhuǎn)化率，提高生產(chǎn)性能和經(jīng)濟效益，且飼糧中添加GOD對改善雞蛋品質(zhì)有一定的作用，添加0.4% GOD能極顯著降低蛋黃中膽固醇含量(P<0.01)。徐海燕[37]發(fā)現(xiàn)，日糧中添加一定量的GOD可以顯著降低種雞的死淘率。GOD還可以與其他添加劑配伍使用。孫春陽等[38]發(fā)現(xiàn)，飼喂添加葡萄糖氧化酶和酵母硒的復合添加劑的白羽肉雞日糧可提高肉雞生長性能、抗氧化性能，改善肉品質(zhì)。

2.1.3 GOD在家兔生產(chǎn)上的應用

吳艷芳等[39]研究表明，GOD對斷奶仔兔的生產(chǎn)性能有一定促進作用，對照組飼喂基礎飼糧，試驗組添加不同劑量的GOD，各組間的采食量均無顯著差異(P>0.05)。GOD添加0.2%、0.3%組的日增重和料肉比與對照組相比差異顯著(P<0.05)。

2.2 GOD的功能

2.2.1改善飼料質(zhì)量，減緩飼料氧化變質(zhì)

GOD和過氧化氫酶構(gòu)建的氧化還原體系在消耗氧氣的同時，生成過氧化氫，使得GOD在飼料中可以用作抗氧化劑和防霉劑。氧氣的消耗抑制了細菌生長，減少了飼料營養(yǎng)的損失；過氧化氫的產(chǎn)生可抑制霉菌，降低霉菌毒素的含量，從而達到改善飼料質(zhì)量、延長飼料保質(zhì)期的效果。

2.2.2消除腸道病原菌生存環(huán)境，保持腸道菌群生態(tài)平衡

GOD催化腸道內(nèi)的葡萄糖產(chǎn)生葡萄糖酸和過氧化氫，此過程消耗腸道內(nèi)的氧氣而形成厭氧環(huán)境，利于厭氧有益菌的增殖生長，形成微生態(tài)競爭優(yōu)勢，從而抑制大腸桿菌、沙門氏菌等有害菌存活；生成的葡萄糖酸可在一定程度上降低腸道內(nèi)的pH值，為乳酸菌的生長創(chuàng)造酸性環(huán)境，使得有益菌大量增殖；反應生成的過氧化氫具有滅菌作用，可直接抑制多種有害菌如大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌、葡萄球菌、弧菌等的生長繁殖，從而降低有害菌的感染。在上述的多重作用下，飼料中添加GOD可增強動物機體免疫力。楊久仙等[24]研究表明，與對照組相比，日糧中添加0.2%和0.3%GOD可以顯著降低仔豬胃和回腸大腸桿菌數(shù)量(P<0.05)，增加仔豬胃和回腸乳酸菌數(shù)量(P<0.05)。趙艷姣等[40]研究發(fā)現(xiàn)，GOD能夠緩解霉變?nèi)占Z對小鼠平均日增重的影響，不同濃度的GOD顯著或極顯著減少了腸道大腸桿菌數(shù)量（P<0.05或P< 0.01），極顯著提高了腸道乳酸桿菌數(shù)量（P<0.01）,而且隨著飼喂時間的延長，效果更好。湯海鷗等[41]采用常規(guī)的牛津杯抑菌試驗方法進行GOD體外抑菌實驗表明，GOD有較明顯的產(chǎn)酸效果和對大腸桿菌和沙門氏菌較好的抑制效果。

2.2.3保護腸道上皮細胞完整，抵御病原體感染

GOD具有良好的抗氧化作用，在動物體內(nèi)可以有效清除自由基，保護腸道上皮細胞完整，阻擋大量病原體的侵入，添加GOD保護腸道上皮細胞完整,使球蟲侵入腸道上皮寄生部位的機會大大降低。宋海彬等[30]研究了GOD對肉雞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，結(jié)果表明，日糧中添加GOD可提高肉雞十二指腸和空腸絨毛高度、增加絨毛高度/隱窩深度（V/C）。

2.2.4改善腸道酸性消化環(huán)境，促進動物生長

如上所述，GOD可顯著改善動物腸道的微生態(tài)環(huán)境和保持腸道完整性，提高機體免疫力；同時，生成的葡萄糖酸可降低胃腸道pH值，促進腸胃蠕動，有利于保持各種消化酶活性，有助于提高飼料消化率，因而促生長作用明顯。宋海彬等[30]研究表明，GOD顯著提高肉雞小腸淀粉酶、胰蛋白酶的活性（P<0.05）。GOD可改善飼料的適口性,添加GOD可以使拒食、厭食、消化不良、腹瀉的動物迅速恢復正常采食。

2.2.5降低中毒反應

GOD一方面可直接抑制黃曲霉、黑根霉、青霉等多種霉菌,另一方面通過消化道進入解毒器官肝臟，一定程度上加速毒性成分的代謝，降低動物霉菌毒素中毒和藥物中毒反應。崔亞利等[42]研究霉變飼糧中添加GOD對小鼠血清指標和肝臟結(jié)構(gòu)與功能的影響發(fā)現(xiàn)，含有30%霉變玉米面的飼料中添加0.3%~0.5% 的GOD可以改善霉變飼料對肝臟造成的病理損傷，增強肝臟的抗氧化能力和蛋白質(zhì)代謝功能。霉變飼料中添加GOD可以緩解對動物肝臟造成的慢性毒性作用。

3 GOD的檢測方法研究進展

隨著GOD在畜牧業(yè)應用的日益增多，如何評價及準確測定酶活成為GOD研究的一個熱點。目前，基于不同的酶活定義而建立的檢測方法有很多，主要傳統(tǒng)方法有如電化學法、測壓法、凝膠電泳法、滴定法[43]、分光光度法等，比較新型的方法有傅里葉變換紅外光譜法[44]、生物傳感器法[45]等。各種檢測方法及其優(yōu)缺點比較如下。

3.1電化學法

電化學法是根據(jù)酶促反應中電壓或電流的變化來測量GOD活性。在研究GOD活性初期建立的，基于電化學法原理的氧電極法、簡易電化學法和自動電化學法，具有較好的靈敏度和重復性，但對操作人員和儀器的要求均很高，隨著研究深入和檢測技術(shù)的發(fā)展，滴定法和分光光度法等操作更為簡便的方法建立后，該類方法已很少使用。

3.2測壓法

測壓法是通過使用瓦勃氏儀測定GOD的酶促反應中所消耗的氧量來確定GOD的活性。該方法的操作復雜，要求嚴格，對儀器依賴很強，在應用中存在一定難度，因此未能被推廣使用。

3.3凝膠電泳法

凝膠電泳法是通過顯示電泳分離后特定的酶分子所處的凝膠區(qū)域完成酶的檢測。GOD反應的初級產(chǎn)物——過氧化氫不易檢測，故在反應混合物中可補充過氧化氫酶作為輔助酶完成酶偶聯(lián)反應。根據(jù)反應原理和檢測對象不同，凝膠電泳法可分為顯色法（以D-葡萄糖酸為檢測物）和熒光法（以過氧化氫為檢測物）。熒光法可以檢測含量低于10- 3U/ml的 GOD，靈敏度高。但是該方法操作復雜，結(jié)果易受到其他物質(zhì)的干擾，且反應的試劑不易獲得。

3.4滴定法

滴定法基本原理是以過量的NaOH溶液終止GOD酶促反應并中和生成葡萄糖酸，再以標準鹽酸溶液反滴,計算得到生成的葡萄糖酸的量，進而推算出GOD的活性。滴定法GOD的酶活定義為：在pH值5.6，溫度為30℃的條件下，每分鐘催化1 μmol葡萄糖轉(zhuǎn)化為葡萄糖酸和過氧化氫所需的酶量。滴定法測定GOD酶活，酶活力在1.125~5.321 U/ml時線性關(guān)系較好。滴定法具有簡便易行、試劑要求低和成本低的優(yōu)勢，非常適用于一般生產(chǎn)和研究，但同時也存在著工作量大、樣品需要量大尤其是人工讀數(shù)導致的誤差大、測量靈敏度低的缺點，不便于檢測方法的標準化開發(fā)。

3.5分光光度法

由于方便易操作，分光光度法是目前使用較為廣泛的酶活測定方法。分光光度法測定GOD的原理是，GOD在有氧條件下將葡萄糖氧化為δ-葡萄糖基-內(nèi)酯和過氧化氫，生成的過氧化氫在有過氧化酶存在的條件下氧化供體，再根據(jù)形成的氧化性供體特性，通過分光光度計在不同波長處進行檢測。根據(jù)實際應用，分光光度法又分為連續(xù)分光光度法和普通分光光度法。

3.5.1連續(xù)分光光度法

目前，關(guān)于GOD活性檢測的分光光度法的研究報導多使用連續(xù)分光光度法。該法的酶活定義為：在pH值7.0，溫度為25℃（或37℃）的條件下，每分鐘催化葡萄糖氧化，轉(zhuǎn)化產(chǎn)生1 μmol葡萄糖酸和過氧化氫所需的葡萄糖氧化酶的量。常見的供體有4-氨基安替比林+苯酚和鄰-聯(lián)二茴香胺，其中以4-氨基安替比林和苯酚為供體測定時，反應溫度為37℃，測量波長為500 nm；以鄰-聯(lián)二茴香胺為供體測定時，反應溫度為25℃，測量波長為436 nm。連續(xù)分光光度法需要連續(xù)測定相同間隔（30 s或1 min）的吸光度，再用線性回歸計算，過程較為復雜，對操作人員的技能有較高要求，在一定程度上會降低實用性。李丕武等[46]對分光光度法進行改進，在0.044~0.351 U/ml范圍內(nèi)，用兩點法代替標準方法進行測定。

3.5.2普通分光光度法

普通分光光度法原理與連續(xù)法類似，該方法GOD酶活定義為：在pH值5.6，溫度為30℃的條件下，每分鐘催化葡萄糖氧化，轉(zhuǎn)化產(chǎn)生1 μmol葡萄糖酸和過氧化氫所需的葡萄糖氧化酶的量即為一個GOD酶活性單位（U）。供體采用2，2-連氮基-雙-（乙基苯基噻唑啉）-6-磺酸鹽（ABTS-R），ABTS氧化生成藍綠色產(chǎn)物在420 nm處有特異吸收峰。類似此法的靛藍胭脂紅褪色分光光度法[47]，在測定GOD活性時需要繪制GOD標準曲線，且測定過程中樣品需要定容，相對于連續(xù)法中直接向比色皿中加樣增加了操作步驟，但避免連續(xù)法的繁瑣的稀釋操作，且對于反應時間準確性的要求不高。

連續(xù)分光光度法比較于普通分光光度法精密度更高，避免因為測定時間的不同造成的結(jié)果誤差。且該方法操作簡單，可以作為進一步進行檢測方法標準化的主要選擇對象，可實現(xiàn)微孔快速高通量自動化檢測。

3.6傅里葉變換紅外光譜法

傅里葉變換紅外光譜法是后來開發(fā)的一種檢測GOD酶活的方法，該方法的原理是：D-葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯由于C=O伸縮振動在最大帶1 212 cm-1處的振幅強度可以作為一個時間函數(shù)來研究葡萄糖氧化動力學過程，葡萄糖酸-δ-內(nèi)酯的消光系數(shù)為1.28 mM-1cm-1，反應的初始速度和酶濃度是呈比例的，且通過雙倒數(shù)作圖法得到的動力學常數(shù)和基于水相中辣根過氧化物酶偶聯(lián)的分光光度法所得到的動力學常數(shù)一致，證明該方法的可靠性。傅里葉變換紅外光譜法測定GOD活力，優(yōu)勢是檢測速度快、底物用量少，對酶質(zhì)量要求不高，可以測定來自青霉和黑曲霉發(fā)酵的去菌體酶提取液或純化的酶制劑，并且可以對酶活進行在線實時檢測，但該法對儀器要求高，且模型建立所需要的前期投入太大，因此大大限制了它的使用。

3.7生物傳感器法

任婷月等[45]采用SBA-40C型生物傳感分析儀，利用生物傳感分析儀檢測葡萄糖質(zhì)量濃度的工作原理，GOD專一性地與β-D-葡萄糖反應，產(chǎn)生的過氧化氫在過氧化氫電極表面上發(fā)生電子轉(zhuǎn)移，內(nèi)置電子元件將電信號轉(zhuǎn)變?yōu)閿?shù)字信號，用已知活性單位的GOD作為測定標準定標后，即可在儀器上直接測出待測樣品的GOD活性單位。利用生物傳感分析儀測定GOD活力時，緩沖液最佳pH值為6.5，測定時間20 s，操作周期小于60 s，連續(xù)10次測定RSD值為0.63%，0~ 100 U/ml的范圍內(nèi)線性良好，r=0.999 1。且該方法與滴定法測定結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)，兩方法結(jié)果相差不大。該方法專一性高、簡便、快速、準確、重復性好，適用于樣品數(shù)目較多的GOD活力的快速測定，但對儀器依賴性強。

4討論與結(jié)語

如上所述，GOD在畜禽生產(chǎn)中的應用已有較多報道，GOD能夠顯著改善飼料質(zhì)量、改善動物腸道微生態(tài)平衡、提高飼料利用率、促進動物生長、提高蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)，但是對于其作用機理的研究相對缺乏，在動物體內(nèi)的作用方式、作用條件、代謝過程有待進一步明確。不同生理階段動物實際生產(chǎn)中的適宜添加量還有待進一步研究。GOD已有的活性測定方法較多，但是GOD產(chǎn)品標準和GOD活性的測定方法標準的缺乏限制了其在飼料工業(yè)中的應用。測定GOD的各種方法中，分光光度法因其操作簡單方便，對儀器要求不高，可以作為進一步進行檢測方法標準化的主要選擇對象。隨著GOD發(fā)酵工藝、制備提純工藝不斷發(fā)展完善，生產(chǎn)技術(shù)日趨成熟，綠色養(yǎng)殖概念的逐漸深入，GOD將在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中發(fā)揮越來越重要的作用。

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（編輯：劉占，laramie_liu@139.com）

Application progress of glucose oxidase in stock breeding industry and research of the enzyme activity assay method

Xiong Yunxia, Ma Xianyong, Hu Youjun, Wang Li, Zheng Chuntian

Abstract：Glucose oxidase is a kind of green feed additive, which can improve the feed quality, keep balance of animal intestinal micro ecology, improve the efficiency of feed utilization, promote the growth of animals, and it can be used to replace antibiotics in feed. This article mainly summarized the physical and chemical properties of GOD, the function of GOD and its application in animal breed?ing, the principle and assays of the enzyme activity detection, and it compared the advantages and dis?advantages of each method.

Key words：glucose oxidase；feed additive；enzyme activity assay method

收稿日期：2015-12-21

通訊作者：馬現(xiàn)永，研究員。

作者簡介：熊云霞，碩士，研究方向為家禽營養(yǎng)與飼料。

中圖分類號：Q55

文獻標識碼：A

文章編號：1001-991X（2016）04-0015-06

doi:10.13302/j.cnki.fi.2016.04.004