王 琰

（新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第六師五家渠市畜牧獸醫(yī)工作站，新疆五家渠 831300）

布魯氏菌病抗體檢測技術(shù)研究進(jìn)展

王 琰

（新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第六師五家渠市畜牧獸醫(yī)工作站，新疆五家渠 831300）

隨著醫(yī)療設(shè)備以及醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展和進(jìn)步，布魯氏菌病抗體的研究也有了新的進(jìn)展和方向，通過使用膠體免疫層析技術(shù)，將大腸桿菌進(jìn)行轉(zhuǎn)化和重組，利用其產(chǎn)生的重組蛋白作為檢測布魯氏菌病抗體的原料，本文主要對該種方法進(jìn)行簡單的敘述，希望能夠?qū)Σ剪斒暇】贵w檢測技術(shù)的研究和發(fā)展提供一些文本思考和幫助。

布魯氏菌病抗體；檢測技術(shù)；研究進(jìn)展

在對布魯氏菌病進(jìn)行檢測技術(shù)研究的過程中，主要采用了布病虎紅平板凝集試驗（RBT）、布病試管凝集試驗（SAT）、競爭ELISA試驗（cELISA）技術(shù)，但是對于布魯氏菌病抗體的檢測速度和效果卻沒有達(dá)到理想中的結(jié)果，在此，本文主要針對布魯氏菌病抗體快速檢測新方法-膠體金技術(shù)進(jìn)行簡單的分析和研究，希望能對布魯氏菌病抗體檢測技術(shù)的研究提供一些幫助。

1 傳統(tǒng)布魯氏菌病檢測技術(shù)分析

1.1 虎紅平板凝集試驗

該種試驗方式主要是快速凝集反應(yīng)，主要用于檢測動物是否感染布魯氏菌病。當(dāng)前，在我國國內(nèi)只有中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院流行病學(xué)微生物研究所生產(chǎn)供應(yīng)布魯菌病虎紅平板試驗抗原，材料包括陰性血清、陽性血清以及陰陽同一試管凝集反應(yīng)的陰陽性血清。

被檢測血清和布魯菌病虎紅平板凝集抗原各取0.03ml滴于玻璃板的方格內(nèi)，每份血清都要進(jìn)行攪拌，攪拌過程盡可能手動，攪拌工具可以使用火柴或者牙簽，攪拌完成后，室溫20℃保持4min內(nèi)即可進(jìn)行判定，對該過程中所產(chǎn)生的反應(yīng)進(jìn)行記錄，與此同時和陰性血清以及陽性血清作為對照。

在血清的對照下，被檢測血清出現(xiàn)任何程度的凝集現(xiàn)象都判定其為陽性，不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象即為陰性，沒有癥狀感染。

1.2 試管凝集試驗

布魯氏菌病試管凝集試驗抗原主要表現(xiàn)為乳白色的懸濁液，久置之后會出現(xiàn)沉淀，溶液會變得清亮透明。

在試驗時，抗原要進(jìn)行稀釋，稀釋比例為1：20，被檢測的血清按照1：12.5、1：25、1：50、1：100、1：200來進(jìn)行稀釋，同時還要設(shè)置基礎(chǔ)血清作為對照。將抗原和血清一起加入試管中，加入劑量為0.5ml，在37～40℃環(huán)境下維持24h，觀察其凝集結(jié)果。對結(jié)果進(jìn)行判定，牛、馬、鹿、駱駝血清1：100“++”為陽性，1：50“++”為可疑。豬、羊、犬1：50“++”為陽性，1：25“++”為可疑。試驗結(jié)果表現(xiàn)為可疑的動物，應(yīng)該在21～28d時間后重新進(jìn)行試驗，若其混合血清仍然為可疑，則判定其為陽性。

1.3 cELISA試驗

C-ELISA檢測試劑盒和新型布病C-ELISA抗體檢測試劑盒，用于免疫接種動物和感染動物的鑒別診斷及布魯氏菌病的確診診斷。布魯氏菌病競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測試劑盒是在間接酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測陽性結(jié)果的基礎(chǔ)上，區(qū)別被檢動物是真正患病還是注射疫苗免疫過的動物。此方法敏感性高，特異性強。能夠區(qū)分陽性動物的真假性即免疫與患病動物的區(qū)分。這樣保證了布魯氏菌ELISA試劑盒的特異性與敏感性。

布魯氏菌病快速I-ELISA抗體檢測試劑盒技術(shù)指標(biāo)：對感染動物（牛、豬、綿羊、山羊和鹿等等）抗體檢測特異性達(dá)99%，敏感性達(dá)97%，檢測所需時間為15分鐘，眼觀判定結(jié)果。

布魯氏菌病C-ELISA檢測試劑盒技術(shù)指標(biāo)：對感染動物（牛、豬、綿羊、山羊和鹿等等）血清抗體檢測特異性達(dá)98%，敏感性達(dá)97%（感染山羊的檢測敏感性達(dá)84%）。鑒別診斷疫苗免疫動物的血清抗體檢測特異性達(dá)98%，敏感性達(dá)75%。

1.4 三種試驗特點

以上三種試驗在操作過程中，都會存在對試劑的配置和人為操作試劑，以及人為對試劑所表現(xiàn)出來的現(xiàn)象進(jìn)行分析，后續(xù)還要通過計算和觀察的形式來對比例或者數(shù)據(jù)進(jìn)行研究，這很有可能會給試驗帶來很大的誤差。

2 布魯氏菌病抗體快速檢測新方法-膠體金技術(shù)

2.1 測定試劑

（1）測定試劑主要有氯金酸、檸檬酸三鈉、碳酸鉀、金黃色葡萄球菌蛋白A四種，該四種試劑在使用前一定要對其純度進(jìn)行檢測，試劑準(zhǔn)備完成之后，分別支撐布魯氏菌可溶性蛋白多糖復(fù)合物抗原，金黃色葡萄球菌蛋白A膠體金探針，在塑料底板上分別將吸水紙墊、硝酸纖維膜、金標(biāo)墊以及玻璃纖維膜楊平墊組裝在一起。

（2）人體血清，血清要選擇臨床確診為布魯氏菌病患者的血清，以及正常人的血清。

2.2 操作

取代檢驗血清10μ l按照1：400的比例加入生理鹽水400μ l，混合之后作為檢測液備用。

將血清標(biāo)本檢測液滴加3至4滴到布魯氏菌病快速診斷盒中，靜置兩分鐘后即可開始觀察結(jié)果，15min后停止觀察，在診斷窗口對照處出會出現(xiàn)一條紅色沉淀線，出現(xiàn)此現(xiàn)象即可說明檢測結(jié)果為陰性，也就是不存在布魯氏菌病感染，如果診斷窗口對照和檢測處出現(xiàn)了兩條紅色沉淀線，出現(xiàn)此現(xiàn)象即可說明檢測結(jié)果為陽性，存在布魯氏菌病感染，如果診斷窗口對照處沒有出現(xiàn)紅色沉淀線，則說明檢測結(jié)果失效，應(yīng)該重新進(jìn)行試驗檢測。

3 結(jié)論

通過上述分析和說明，在進(jìn)行布魯氏菌病抗體的檢測過程中，當(dāng)前階段采用的方法主要有虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗、cELISA試驗三種，但是其在使用過程中都會存在著或多或少的弊端，而新提出的快速檢測方法=膠體金技術(shù)，在使用期間，盡可能的減少人為參與，避免人為操作過程中出現(xiàn)的失誤，是當(dāng)前布魯氏菌病抗體檢測工作中一項新興的技術(shù)，希望能對今后布病以及布病抗體的檢測工作提供更好的試驗方法和途徑。

[1] 藺國珍.布魯氏菌病LAMP檢測方法的建立及雙基因共表達(dá)分子疫苗研究[D].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2012.

[2] 王芳，馮宇，張閣，等.牛布魯氏菌間接ELISA抗體檢測方法的建立[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，49（9）：1818-1825.

新疆兵團(tuán)第六師五家渠市《2016年度師市科技計劃和重大科技專項計劃》（1623號）

王琰（1987—），女，本科學(xué)歷，助理獸醫(yī)師，現(xiàn)從事動物疫病監(jiān)測工作。