王進峰 （陜西省銅川市動物疫病預(yù)防控制中心 727000）王春燕 （陜西省銅川市畜牧技術(shù)推廣站）

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奶牛結(jié)核病的診斷與防治要點

王進峰 （陜西省銅川市動物疫病預(yù)防控制中心 727000）
王春燕 （陜西省銅川市畜牧技術(shù)推廣站）

牛結(jié)核病是由牛型結(jié)核分枝桿菌引起的一種人畜共患的慢性傳染病，臨床特征是病程緩慢、咳嗽，漸進性消瘦，體虛乏力等，并在多種器官中形成結(jié)核結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)中心干酪樣壞死或鈣化。不僅影響奶牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，更重要的是由于人畜的交叉感染，使人患上結(jié)核病，直接威脅人類的健康。且本病一旦發(fā)生于畜群，就不易根除，我國將其列為二類動物疫病。因而，要從根本上控制奶牛結(jié)核病的發(fā)生與流行，應(yīng)加強對結(jié)核病的監(jiān)測與凈化，并制定有效的防控措施。

近年來，國家實施的“放心奶”工程，使奶品消費量迅速上升，迎來了奶牛養(yǎng)殖業(yè)的大發(fā)展，隨著奶牛交易量的日益頻繁，奶牛結(jié)核病的發(fā)生呈上升趨勢，點狀疫情時有發(fā)生，散在疫點不斷出現(xiàn)，不但給廣大養(yǎng)殖場(戶)業(yè)造成較大的經(jīng)濟損失，更嚴重的是影響畜牧業(yè)的健康發(fā)展、給人民的身體健康帶來很大的危害，而且還會引起公共衛(wèi)生事件。因此，加強奶牛結(jié)核病的監(jiān)測檢疫工作，防止結(jié)核病的擴散和傳播，對促進奶牛業(yè)的持續(xù)健康穩(wěn)定發(fā)展和確保人民群眾身體健康具有十分重要和深遠的意義，本文就奶牛結(jié)核病的診斷和防治要點進行淺析。

1 病原及流行病學(xué)特點

1.1 病原 結(jié)核病病原菌為結(jié)核分枝桿菌，分為3型，即人型、牛型和禽型。引起牛結(jié)核病的主要病原菌是牛型分支桿菌，牛型分枝桿菌長1～4μm，寬0.3～0.6μm，單個或呈鏈狀排列，為革蘭氏陽性桿菌，具有抗酸染色特征。結(jié)核桿菌不產(chǎn)生芽孢和莢膜，也不能運動，為革蘭氏染色陽性菌，結(jié)核桿菌為嚴格的需氧菌，生長最適宜pH值為5.9～6.9，最適宜溫度為37～38℃，結(jié)核桿菌的菌落、毒力及耐藥性可發(fā)生變異，對外界環(huán)境的抵抗力很強，抗干旱，在干涸的分泌物中可存活6～8個月，冰點下能存活4～5個月，在糞便中可存活數(shù)個月，在污水中也能存活11～15個月，動物尸體內(nèi)的牛分枝桿菌仍有感染性。該菌不耐熱60℃，20～30min即被殺死。10%漂白粉溶液和70%～90%酒精溶液消毒效果較好，本病菌對鏈霉素、異煙肼、氨水楊酸鈉、環(huán)絲氨酸和利福平等藥物具有不同程度的敏感性。對青霉素、磺胺類藥物以及其他廣譜抗生素都不敏感。

1.2 流行病學(xué) 結(jié)核菌除感染人外，還感染50多種哺乳動物和20多種禽類，本病潛伏期一般為3～6周，長的可達數(shù)月，通常取慢性經(jīng)過，病初癥狀不明顯，飼養(yǎng)管理粗放，營養(yǎng)不良，則癥狀逐漸顯露。奶牛是家畜中最易感的動物，其次是水牛，黃牛，牦牛。結(jié)核病牛和開放性結(jié)核病人是本病的主要傳染源，可由其呼出的氣體、唾液、鼻液、痰液、糞、尿、精液、乳汁和陰道分泌物排菌和污染周圍環(huán)境。該病傳播途徑主要有呼吸道和消化道兩種：前者指病?？人?、打噴嚏時將分泌物散播于空氣中成為飛沫，或病牛排泄物干燥后使病原菌附著于塵埃上，飛揚到空中，造成帶菌塵埃，主要傳播犢牛；后者是指采食被污染的飼草料和飲水等而感染成年牛群。此外，還可通過與病牛接觸或交配，而使生殖器官感染發(fā)病，其中經(jīng)呼吸道傳染的威脅最大。人類多因牛型分枝桿菌或結(jié)核分枝桿菌感染而致病，其感染途徑主要是食入未經(jīng)檢疫的畜產(chǎn)品，尤其是飲用未經(jīng)巴士消毒或煮沸的患有結(jié)核病牛的奶而經(jīng)消化道感染，特別是幼兒感染牛分枝桿菌者最多。另外，經(jīng)常與患結(jié)核病牛接觸的人員(飼養(yǎng)員、獸醫(yī)工作者、擠奶員等)感染的幾率也較大，因此，為防止人的感染，除了對畜產(chǎn)品，尤其是乳品要嚴格遵守衛(wèi)生檢驗制度外，還必須加強檢疫、預(yù)防工作，對該病采取嚴格的控制、撲滅措施，及時發(fā)現(xiàn)和處理疫情，徹底凈化牛群，防止擴散。

2 病理變化和臨床癥狀

2.1 病理變化 剖檢特征是患部形成結(jié)核結(jié)節(jié)，最常見的是肺部及所屬淋巴結(jié)，其次為腸系膜淋巴結(jié)和頭頸部淋巴結(jié)，胸部、乳房、肝和子宮、脾等均可出現(xiàn)。肉眼病變肺臟有很多突起的白色或黃色結(jié)節(jié)，大小不一，呈干酪樣壞死或鈣化。切開時有砂礫感，有的壞死組織溶解和軟化，排出后形成空洞。當肺結(jié)核時，肺上具有多量粟粒大小的微透明的結(jié)節(jié)，增大并由纖維蛋白包圍，呈現(xiàn)粟粒性結(jié)核病病變，胸腔與腹腔漿膜表面出現(xiàn)粟粒至豌豆大小，半透明的灰白色堅硬結(jié)節(jié)，形如珍珠。多數(shù)肺結(jié)核病牛肺與胸膜發(fā)生廣泛而牢固的粘連。腸結(jié)核發(fā)生于小腸或盲腸，于腸粘膜表面形成大小不等的結(jié)節(jié)或潰瘍，潰瘍周圍呈堤狀，底部堅硬并覆有干酪樣物，

2.2 發(fā)病機理 結(jié)核桿菌侵入機體后，易被巨噬細胞吞噬，但在某些情況下不被殺死，而且能在巨噬細胞內(nèi)繁殖并沿淋巴管蔓延。奶牛最易被結(jié)核分枝桿菌侵染，病菌隨鼻液、糞便和乳汁等排出體外，污染飼料、飲水、空氣等周圍環(huán)境，形成潛在傳染源，在特定條件下誘發(fā)感染。成年牛多因與病牛直接接觸、犢牛多因吃了病牛奶而感染。局部病變主要是由該菌的直接作用形成特異性原發(fā)病灶—原發(fā)性結(jié)節(jié)，當機體抵抗力強，則原發(fā)性病灶包囊化，形成瘢痕或鈣化而痊愈；當機體抵抗力弱時，病菌可從淋巴、血液和天然管道3條途徑散布全身，引起其他組織器官的結(jié)核病灶或全身性結(jié)核(又稱粟粒性結(jié)核病)。奶牛飼養(yǎng)管理水平低，通風(fēng)不良，牛群擁擠，飼料污染或環(huán)境衛(wèi)生差等均可誘發(fā)本病。結(jié)核病可分為初次感染和二次感染，二次感染多發(fā)生于成年牛，可能是外源性的(再感染)，也可能是內(nèi)源性的(復(fù)發(fā))，二次感染的特點是病變只局限于某個器官，主要是通過官腔散布的。

2.3 臨床癥狀 潛伏期一般為3～6周，有的可長達數(shù)月或數(shù)年。臨床通常呈慢性經(jīng)過，以肺結(jié)核、腸結(jié)核、乳房結(jié)核等最為常見。此外，還有睪丸結(jié)核、漿膜結(jié)核和腦結(jié)核。（1）肺結(jié)核：表現(xiàn)為日漸消瘦，精神不振，并出現(xiàn)長期頑固性干咳，以長期頑固性干咳為主要癥狀，病初食欲、反芻無明顯變化，偶爾有短促干咳，隨著病情的發(fā)展咳嗽逐漸加重、頻繁，尤其是在早晨、運動及飲水后癥狀會更加明顯。有時從口腔或鼻孔中流出淡黃色黏膿鼻涕，食欲減退、被毛粗亂無光，病畜逐漸消瘦、貧血、精神不振，食欲不良，肩前、股前、腹股溝、頜下淋巴結(jié)腫大；聽診肺區(qū)有啰音，在肺臟或其他組織器官中有很多隆起的白色或黃色結(jié)節(jié)；切開后可見干酪樣壞死物，有的壞死組織溶解和軟化，排除后形成空洞，在胸腔和腹腔可發(fā)生密繁的灰白色堅硬結(jié)節(jié)，即所謂“珍珠病”。病情惡化時可見病牛體溫升高(達40℃以上)，顯弛張熱或稽留熱，呼吸困難，最后可因心力衰竭而死亡。（2）腸結(jié)核：病牛常表現(xiàn)腹痛、消瘦，初期交替出現(xiàn)腹瀉和便秘，后期拉痢疾，多見于犢牛，呈現(xiàn)前胃弛緩癥狀，迅速消瘦，頑固性腹瀉，糞便呈稀粥樣，混有粘液或膿性分泌物，有時帶血，味腥臭，全身乏力，肋骨顯露，直腸檢查，腹膜粗糙不光滑，腸系膜淋巴結(jié)腫大，在胃腸道黏膜可見大小不等的結(jié)核結(jié)節(jié)或潰瘍。（3）乳房結(jié)核：乳房淋巴結(jié)腫大，繼而后方乳腺區(qū)發(fā)生局限性或彌漫性硬結(jié)，硬結(jié)無熱無痛，乳房表面凹凸不平，泌乳量下降，乳汁稀薄如水樣，嚴重時乳腺萎縮，泌乳停止。（4）淋巴結(jié)結(jié)核：以其部位不同而癥狀各異。咽后淋巴結(jié)腫大時，壓迫咽喉，呼吸音多粗厲，響亮；縱膈淋巴結(jié)腫大時，可產(chǎn)生瘤胃鼓氣癥狀；肩前和股后淋巴結(jié)腫大時，可引發(fā)前后肢跛行。（5）腦及腦膜結(jié)核：病牛多呈現(xiàn)神經(jīng)癥狀，如驚恐不安，肌肉震顫，站立不穩(wěn)，步態(tài)蹣跚，頭頸僵硬，眼肌麻痹，后期限于昏迷狀態(tài)，呼吸和心率失常。

3 傳染因素

（1）奶牛結(jié)核病防治主要依靠檢疫和對檢疫出的陽性牛及時淘汰處理，由于養(yǎng)殖戶對奶牛結(jié)核病的危害認識不足，進行胚胎移植和凍精配種把關(guān)不嚴，使用了帶菌物品，還有到區(qū)域外引進奶牛檢疫、隔離制度實施不嚴格，致使帶菌牛引入飼養(yǎng)而引起傳染。（2）由于檢疫出來的陽性牛沒有及時進行撲殺和無害化處理，僅靠養(yǎng)殖場(戶)自行淘汰，對污染過的環(huán)境消毒不徹底，導(dǎo)致疫源沒有被消滅，引起結(jié)核病的發(fā)生和流行。

4 診斷要點

4.1 診斷方法 奶牛結(jié)核病可根據(jù)牛群的具體情況采用不同的方法進行診斷，病牛以臨床和實驗室診斷為主，可疑牛群和健康牛群以結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)實驗為主，配合實驗室診斷。目前，國內(nèi)外用于診斷牛結(jié)核的檢驗方法大體分為3類：（1）是細菌學(xué)檢驗方法，但由于結(jié)核菌培養(yǎng)一般需要3～8個星期，且細菌培養(yǎng)檢出率低，敏感性差，已經(jīng)不能滿足臨床診斷的需要。（2）是分子生物學(xué)檢驗方法，如核酸探針、PCR和DNA圖譜法等分子生物學(xué)方法。這些方法目前僅適用于實驗室研究，不能推廣使用。（3）是免疫學(xué)方法檢測結(jié)核菌的特異性抗體，如皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)，ELISA等，這些方法已廣泛運用于臨床診斷中。奶牛結(jié)核病檢測主要采取皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)法、點眼法和皮下發(fā)，臨床上常用的檢測方法是皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)法，皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)法對奶牛結(jié)核病的檢出率一般在95%～98%。當病牛發(fā)生不明原因的間進行消瘦、咳嗽、肺部異樣、病理剖檢，可作出初步診斷，確診必須用結(jié)核菌素作變態(tài)反應(yīng)實驗。

4.2 皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng) 牛型提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)實驗是目前奶牛采用的主要診斷方法，對出生20日齡以上的奶牛均可應(yīng)用。成年牛在左側(cè)頸中部上1/3處、3月齡以內(nèi)的犢牛在肩胛前部剪毛，面積約5cmx5cm，在剪毛部中央以拇指和食指輕輕捏起皮膚，用卡尺測量皮膚皺褶厚度記錄下來，然后將提純結(jié)核菌素用注射用水稀釋成每毫升2萬IU，按規(guī)定劑量進行皮內(nèi)注射(3月齡以內(nèi)的犢牛0.1ml、3～12月齡犢牛0.15ml、1年以上的牛0.2ml)。觀察反應(yīng)：于注射后72h及120h2次觀察反應(yīng)，檢查注射局部溫度，疼痛反應(yīng)及腫脹性質(zhì)；用卡尺測量注射部皮膚厚度及腫脹面積，并做好記錄；在72h觀察的同時，需在第1次注射的同一部位，以同樣的劑量進行第二次注射，第2次注射后48h(即第一次注射后120h)在觀察一次，并測量其皮厚。判定：陰性反應(yīng)“-”：注射局部無炎性水腫，皮厚差在2mm以下，或有堅實、冷硬、界面明顯的硬結(jié)者；疑似反應(yīng)“”：局部出現(xiàn)炎性水腫，但不明顯，其皮厚差在2.1～3.9mm間，腫脹面積在(35x45)mm2以下；陽性反應(yīng)“＋”：局部有熱、腫、痛變化，炎性水腫呈彌漫性，其界限不明顯，腫脹面積在(35x45)mm2以上，或雖反應(yīng)輕微，皮厚差在4mm以上。凡判定為疑似反應(yīng)的牛只，于第1次試驗30d后進行復(fù)檢，其結(jié)果仍為疑似反應(yīng)時，經(jīng)30～45d后再復(fù)檢，如仍為疑似反應(yīng)，應(yīng)判為陽性。

4.3 點眼檢查 以結(jié)核菌素在相隔2～7d時間內(nèi)先后在同一左眼進行兩次點眼，如左眼疾病時，可點右眼。點眼劑量為0.2～0.3ml(3～5滴)，點眼后分別于3、6、9及24h各觀察一次。判定：陰性反應(yīng)“-”：眼睛無反應(yīng)或僅結(jié)膜輕微反應(yīng)，流出少量透明漿液性分泌物；疑似反應(yīng)“”：眼結(jié)膜無明顯水腫或充血，僅有少量灰白色、半透明的黏液性分泌物積聚在結(jié)膜囊內(nèi)，或呈粗狀掛在眼角外；陽性反應(yīng)“＋”：結(jié)膜明顯水腫、充血、流淚羞明，有紐帶狀黏液或膿性分泌物自眼角流出，或以粒狀或線狀存在于結(jié)膜囊或眼角內(nèi)。上述2種方法檢疫后，任何一種方法判為陽性即為陽性，2種方法均判為疑似，或1種疑似、1種陰性的，則判為疑似；2種方法均判為陰性的，則判為陰性。判定為陽性的牛應(yīng)立即進行隔離，按程序進行淘汰撲殺并做無害化處理。

5 防治措施

5.1 強化監(jiān)測，搞好奶牛登記管理 牛結(jié)核病是我國法定的檢疫對象，按《牛結(jié)核病防治技術(shù)規(guī)范》規(guī)定，我國對牛結(jié)核病的監(jiān)測比例為：種牛、奶牛100%監(jiān)測，規(guī)模場肉牛按10%監(jiān)測，其他牛按5%監(jiān)測，疑似病牛要100%監(jiān)測，并及時撲殺結(jié)核病陽性牛。并要隨時掌握轄區(qū)內(nèi)奶牛的飼養(yǎng)范圍及流動情況，對奶牛進行戶口登記，實行統(tǒng)一耳標佩戴制度，督導(dǎo)規(guī)模養(yǎng)殖場和無結(jié)核病健康牛群每年春秋各進行一次變態(tài)反應(yīng)檢驗或點眼檢查。

5.2 嚴格檢疫，防止疫病傳播 （1）強化調(diào)運檢疫：實施嚴格的奶牛調(diào)運檢疫和隔離制度，省內(nèi)調(diào)運奶牛，一律憑調(diào)出地動物防疫監(jiān)督機構(gòu)出具的結(jié)核病合格證、車輛消毒證明調(diào)運；跨省調(diào)運奶牛的，須經(jīng)過調(diào)入地動物防疫監(jiān)督機構(gòu)安全風(fēng)險評估調(diào)出地為非疫區(qū)和跨省調(diào)運奶牛檢疫審批，奶牛在調(diào)運前30d內(nèi)經(jīng)調(diào)出地動物防疫監(jiān)督機構(gòu)奶牛結(jié)核病檢測合格并出具檢疫合格證明方可調(diào)運，調(diào)入的奶牛，必須隔離45d以上，且經(jīng)奶牛結(jié)核病檢測陰性，方可混群飼養(yǎng)。（2）隔離：牛群發(fā)現(xiàn)有漸進性消瘦、頑固性咳嗽等疑似結(jié)核病癥狀時，要及時隔離、消毒，并盡快報告動物衛(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)，以便快速做出診斷，采取相應(yīng)防控措施，控制傳染源，防止疫病擴散。凡檢出的結(jié)核陽性反應(yīng)牛要立即調(diào)離牛群進行隔離，檢出的陽性疑似反應(yīng)牛應(yīng)隔離復(fù)檢，根據(jù)檢疫的結(jié)果，將牛群分為健康牛群、假定健康牛群及陽性隔離牛群。假定健康牛群執(zhí)行防疫制度，每年進行4次檢疫，直到無1頭陽性牛出現(xiàn)為止；陽性隔離牛群應(yīng)按規(guī)定撲殺、淘汰并做無害化處理。（3）實行奶牛結(jié)核病檢測合格證制度：對檢測為健康的牛群(場)，由動物防疫監(jiān)督機構(gòu)統(tǒng)一核發(fā)“奶牛結(jié)核病檢測合格證明”，只有具有合格證明的凈化牛群(場)方可出售生產(chǎn)的牛奶。

5.3 做好消毒工作 （1）定期消毒：每年春秋2次進行定期消毒，畜舍、飼槽、用具、牛欄、牛床、天棚、舍內(nèi)地面、糞尿溝及墻壁等用5%來蘇兒或3%苛性鈉液消毒，在消毒后2～6h用清水沖洗后再使用；運動場清掃后用20%石灰乳或2%的苛性鈉液消毒，亦可以采用更換表土(30cm)的方法。（2）開展環(huán)境消毒：奶牛養(yǎng)殖場生產(chǎn)區(qū)與生活區(qū)要隔離，場內(nèi)不得飼養(yǎng)貓、狗豬、雞鴨等動物，并禁止其他動物出入，努力消滅鼠、蠅等傳播媒介，奶牛場及牛舍出入口處，應(yīng)設(shè)置消毒池，內(nèi)置5%來蘇兒或3%苛性鈉液(每周更換1次)，進行出入消毒；牛舍內(nèi)一切用具沒半月消毒1次，分娩室在臨產(chǎn)牛生產(chǎn)前及分娩后各進行1次大消毒；牛場每年進行2～4次大消毒。檢出陽性牛后，對病牛、可疑牛的牛床及其石槽等進行1次/d消毒，飼養(yǎng)工具使用后及時消毒，糞便等排泄物應(yīng)單獨收集進行無害化處理，對其整個牛舍、飼養(yǎng)工具進行1次/d消毒，直至病牛、可疑牛無害化處理完畢；對運動場地要徹底清污并連續(xù)消毒3～5d，徹底消毒1次/d。對牛場金屬用具采用火焰噴射消毒。糞便采取堆積發(fā)酵處理。

4.4 檢測凈化牛群 應(yīng)用牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)實驗對牛群進行反復(fù)檢測，被確診為結(jié)核病病?；驒z出結(jié)核病陽性的牛群，為結(jié)核病污染群，要全面實施結(jié)核病檢疫凈化工作，發(fā)現(xiàn)陽性牛及時淘汰撲殺并作無害化處理。對多次檢疫不斷出現(xiàn)陽性的牛群，每年要進行4次以上的檢疫，檢出的陽性牛立即分群隔離，隔離牛舍應(yīng)處于居住區(qū)和飼養(yǎng)區(qū)下風(fēng)口，并與健康牛舍相隔50m以上。連續(xù)3次檢測均為陰性者，可放入假定健康群。疑似陽性牛應(yīng)定期進行臨診檢查，發(fā)現(xiàn)開放性結(jié)核病牛應(yīng)立即撲殺淘汰。有價值的患?？捎面溍顾?、異煙肼、鹽酸黃連素等進行治療。假定健康群當無陽性出現(xiàn)時在1～1.5年時間內(nèi)經(jīng)3次檢疫全是陰性者，即可改稱健康群。

5.5 培育健康犢牛群 設(shè)立犢牛獨立飼養(yǎng)區(qū)，應(yīng)遠離陽性隔離牛群1km以外，分娩前消毒母牛乳房及后驅(qū)，產(chǎn)犢后立即與母牛分開，并用2%～5%來蘇兒溶液消毒犢牛全身，擦干后送隔離室由專人飼養(yǎng)管理，每頭犢牛應(yīng)設(shè)置專用的喂奶器，并經(jīng)常消毒，保持清潔衛(wèi)生。犢牛出生后應(yīng)喂健康母牛的初乳，5～7d后喂健康牛常乳或消毒乳。犢牛應(yīng)在6個月的隔離飼養(yǎng)中檢疫3次，第一次于出生后20～30d，第二次于出生后90～120d，第三次于出生后160～180d。連續(xù)檢測呈陰性的犢牛且無任何可疑臨床癥狀，經(jīng)消毒處理后方可轉(zhuǎn)入健康群；堅決淘汰陽性牛犢，保持畜群的整體健康。

收稿日期：（2015–12–14）

中圖分類號：S858.23

文獻標識碼：B

文章編號：1007-1733(2016)03-0015-03