劉志科,潘耀謙,張秋雨,李瑞珍,陳創(chuàng)夫

（1.石河子大學(xué)動物科技學(xué)院,新疆石河子832003；2.河南科技學(xué)院,河南新鄉(xiāng)453003）

兔肝球蟲病的流行病學(xué)診斷及病理組織學(xué)觀察

劉志科1,潘耀謙2,張秋雨2,李瑞珍2,陳創(chuàng)夫1

（1.石河子大學(xué)動物科技學(xué)院,新疆石河子832003；2.河南科技學(xué)院,河南新鄉(xiāng)453003）

對河南省新鄉(xiāng)市周邊五個縣的家兔屠宰場進行采樣,以了解新鄉(xiāng)市兔肝球蟲病的感染情況及病理變化.結(jié)果表明：通過肉眼觀察和組織病理學(xué)方法,屠宰的3 700只家兔中共檢測到345例患有兔肝球蟲病,感染率為9.3%.眼觀病變?yōu)楦闻K極度膨大,背面有明顯的白色或淺黃色的壞死灶,呈球形,如黃豆大小,病變突出肝的表面；組織病理學(xué)變化為膽囊的絨毛斷裂明顯,大量的球蟲與上皮細(xì)胞一起脫入管腔,膽管的絨毛呈分支狀,病變周圍有大量的嗜中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞,上皮細(xì)胞中有分布不同發(fā)育階段的斯氏艾美耳球蟲.新鄉(xiāng)市周邊地區(qū)兔肝球蟲病的感染率呈上升趨勢,多為隱形感染.肉眼觀察的結(jié)果與組織病理學(xué)的診斷相吻合,通過眼觀病變和組織病理學(xué)來診斷兔肝球蟲病具有一定的意義,并對本病的早期預(yù)防提供理論依據(jù).

兔肝球蟲??；肝臟；肉眼觀察；組織病理學(xué)

兔肝球蟲病是由斯氏艾美耳球蟲寄生于家兔肝臟膽管內(nèi)引起的一種原蟲病.此病對幼兔危害極其嚴(yán)重,是一種常見的體內(nèi)寄生蟲病.各發(fā)育階段的兔均易感染,尤其斷奶至11周齡的幼兔最易感,導(dǎo)致生長兔發(fā)育受阻,死亡率高達(dá)80%[1-2].成年兔對兔肝球蟲病的抵抗力較強,常表現(xiàn)為隱形感染,一般可以耐過,但不能產(chǎn)生免疫力,而成為長期的病原攜帶者和感染來源.該病多流行于溫暖潮濕的多雨季節(jié),但寒冷季節(jié)的發(fā)病率也比較高.兔肝球蟲具有較高的致病率,特別是幼兔極易感染,死亡率高,給養(yǎng)兔業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失[3].目前,兔肝球蟲的研究處于起步階段,且養(yǎng)殖技術(shù)處于探索期,對兔肝球蟲病的研究非常有價值.

當(dāng)前,我國對兔球蟲病的研究加大了投入,尤其是對兔的腸球蟲病進行了大量研究[4-6].近年來,我國許多地方有兔肝球蟲病的發(fā)生[7-11],飼養(yǎng)者往往忽視了兔肝球蟲病的存在,錯過了最佳的治療階段,從而造成了很多不必要的經(jīng)濟損失.針對這種狀況,在家兔屠宰場采集疑似病變的肝臟組織,通過病理學(xué)方法,用大體病變和組織學(xué)方法對肝臟的發(fā)病狀況進行了比較研究,以期為該病的防治和確診提供一定的技術(shù)指導(dǎo).

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 被檢肝臟在新鄉(xiāng)市周圍的家兔大型屠宰場,屠宰3 700只家兔,發(fā)現(xiàn)其中345例為疑似攜帶兔肝球蟲的肝臟,確定為兔肝球蟲病的303例,疑似病例42例.

1.1.2 試劑與儀器伊紅,石蠟,二甲苯,樹膠,二甲苯Ⅰ,二甲苯Ⅱ,無水乙醇Ⅰ,無水乙醇Ⅱ,體積分?jǐn)?shù)為90%、80%、70%、60%的乙醇溶液,蘇木精,純化水,醇性伊紅,自來水,二甲苯Ⅰ,二甲苯Ⅱ,體積分?jǐn)?shù)為10%的福爾馬林溶液等.石蠟自動切片機,德國Leica公司；生物組織包埋機,浙江省金華市益迪醫(yī)療設(shè)備廠；恒溫多孔水浴鍋,金壇市杰瑞爾電器有限公司；NIKON研究顯微鏡,購于日本；電熱恒溫培養(yǎng)箱,上海博訊實業(yè)有限公司；智能生物組織烤片機,浙江金華市益迪醫(yī)療設(shè)備廠等.

1.2 試驗方法

1.2.1 肉眼檢查通過對采集來的肝臟,用眼觀的方法來觀察它的大體病變.

1.2.2 病理組織學(xué)檢查對42例兔肝球蟲病疑似病例的肝臟分別用體積分?jǐn)?shù)10%的福爾馬林溶液固定36 h.

（1）將固定的組織做好標(biāo)記,分別用手術(shù)刀取長×寬×高為1 cm×1 cm×0.3 cm的肝臟組織.

（2）將肝臟組織分別放入體積分?jǐn)?shù)為60%、70%、80%、90%、100%的梯度乙醇溶液中進行脫水,每個梯度脫水約3.5 h,然后放到二甲苯溶液中透明.

（3）用多功能生物組織包埋機進行石蠟包埋,將包埋好的組織修成梯形,用木塊固定.（4）固定之后用組織自動切片機切成3 μm厚的切片.

（5）將切好的組織進行展片,用泡過酸的載玻片進行撈片,在顯微鏡下觀察.

（6）最后,用蘇木精和伊紅（H.E.）進行染色[10-11].

H.E.染色方法：二甲苯Ⅰ10 min→二甲苯Ⅱ10 min→無水乙醇Ⅰ2 min→無水乙醇Ⅱ2 min→體積分?jǐn)?shù)90%乙醇溶液2 min→體積分?jǐn)?shù)80%乙醇溶液2 min→體積分?jǐn)?shù)70%乙醇溶液2 min→蘇木精6 min→純化水中浸泡（蘭化）20 min→醇性伊紅30 s→自來水洗2 min→體積分?jǐn)?shù)70%乙醇溶液2 min→體積分?jǐn)?shù)80%乙醇溶液2 min→體積分?jǐn)?shù)90%乙醇溶液2 min→無水乙醇Ⅰ2 min→無水乙醇Ⅱ2 min→二甲苯Ⅰ10 min→二甲苯Ⅱ10 min→中性樹膠封片,最后在光學(xué)顯微鏡下進行組織切片的觀察.

2 結(jié)果與分析

2.1 眼觀病理變化

根據(jù)發(fā)病的時間和嚴(yán)重程度分為肝臟腫大型和肝臟縮小型兩種情況.

2.1.1 肝臟腫大型肝臟腫大,膽管擴張,切面見肝管壁較薄,管腔內(nèi)有大量的內(nèi)含奶油樣黏稠液體的淡墨綠色內(nèi)容物.背面有大量擴張的膽管,沿肝臟被膜呈樹根樣分布,個別明顯隆突于肝臟的表面（見圖1-a）.肝臟表面有栗粒至黃豆大小不等的黃白色或淡黃色結(jié)節(jié),切開時有淡黃色濃稠的液體或堅硬的無機鹽,呈圓形,大如豌豆,有的結(jié)節(jié)相互融合在一起,形成較大結(jié)節(jié),背隆突于肝臟表面（見圖1-b）,可視黏膜輕度黃染.

圖1 肝臟腫大型Fig.1 Hepatomegaly

2.2.2 肝臟縮小型肝臟體積較小,間質(zhì)增寬,肝小葉結(jié)構(gòu)較異常,形成局灶性肝硬變,顏色呈白色；膽管壁較厚,呈黃白色,膽管內(nèi)有少量的淡綠色干酪物（見圖2）.

圖2 肝臟縮小型Fig.2 Liver volume smaller

2.2 組織病理學(xué)變化

對42例疑似兔肝球蟲病的肝臟經(jīng)固定、脫水、透明、包埋、切片、展片等,最后進行H.E.染色.結(jié)果見膽管上皮細(xì)胞內(nèi)有大量的不同發(fā)育時期的球蟲（見圖3-a）,其黏膜有明顯的增生.糖原溶解,肝細(xì)胞的形狀呈細(xì)網(wǎng)狀,周圍有大量的炎性細(xì)胞浸潤（見圖3-b）,并有大量的纖維結(jié)締組織形成,有的伸向肝小葉的周圍組織；滋養(yǎng)體、裂殖體、配子體和新形成的合子非常容易辨別管腔內(nèi)有大量脫落的上皮細(xì)胞[12-15].

臟的膽管上皮組織細(xì)胞內(nèi)則有許多不同發(fā)育年齡階段的球蟲,膽管增生,肝臟體積變小,細(xì)胞萎縮進而嚴(yán)重變形,管腔內(nèi)有大量的脫落和壞死的上皮和卵囊.膽囊的絨毛顯著斷裂（見圖3-c）,而膽管黏膜結(jié)構(gòu)正常.中央靜脈向外擴張、瘀血,管腔內(nèi)有濃黑色的膽汁及大塊的壞死蛆織碎屑充斥,其內(nèi)含有不同大小的卵囊（見圖3-d）.膽管的絨毛脫落、壞死,膽管的結(jié)締組織增生,卵囊呈橢圓形（見圖3-e）,前窄后較寬,壁特別厚,呈皺嬙狀,較為完整的卵囊還能見到其內(nèi)有孢子卵囊及大量的卵囊殘體等結(jié)構(gòu)分布（見圖3-f）.

圖3 組織病理學(xué)變化Fig.3 Histopathological changes

3 結(jié)論與討論

本研究涉及新鄉(xiāng)市周圍的五個縣市的家兔集中屠宰場,病例收集基本覆蓋了新鄉(xiāng)整個地區(qū)的70%左右,樣品覆蓋養(yǎng)兔區(qū)域的80%以上.對屠宰的3 700只家兔中,最終確認(rèn)兔肝球蟲病為345例,感染率為9.3%.新鄉(xiāng)市大部分縣市已經(jīng)成為兔肝球蟲的隱形感染地區(qū),其中衛(wèi)輝市較為嚴(yán)重,且疫情的感染率呈明顯的上升傾向.與劉春[16]、惠禹等[17]分別對四川和張家川縣各個地區(qū)的兔的肝球蟲感染情況的調(diào)查結(jié)果相比,本次研究中新鄉(xiāng)市兔肝球蟲病的發(fā)病率明顯高于全國其它地區(qū),原因可能與新鄉(xiāng)市傳統(tǒng)的飼養(yǎng)模式有關(guān).近年習(xí)慣把兔球蟲病歸結(jié)為腸球蟲,從而忽略了兔肝球蟲病的防治.兔肝球蟲病引起兔死亡所造成的經(jīng)濟損失不可忽視,應(yīng)引起廣大養(yǎng)殖戶和研究人員高度重視.

[1]秦祥,潘玲,周杰.兔肝球蟲的診治及病理組織學(xué)觀察[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2016（2）：76-77.

[2]高俊峰,王卓林,侯美如,等.單味中藥對兔球蟲卵囊孢子化抑制效果的研究[J].黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報,2014,26（1）：36-39.

[3]宋春青,宋麗媛,霍自田,等.人工感染兔肝球病急性癥狀及病理學(xué)變化[J].畜牧獸醫(yī)科技信息,2006（3）：82-83.

[4]許青榮,周祖濤,胡新春.幼兔肝型球蟲病的診斷和防治[J].湖北畜牧獸醫(yī),2005（6）：44.

[5]王小波,許金俊,李亮亭,等.兔斯氏艾美耳球蟲病的病理學(xué)診斷[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40（33）：16167-16168.

[6]楊玉榮,李艷玲,陳二平.兔幼兔常見消化系統(tǒng)病的診斷與防治措施[J].中國養(yǎng)兔,2015（5）：39-40.

[7]李文超,顧有方,陳會良,等.斯氏艾美耳球蟲感染對兔肝臟和血清抗氧化功能的影響[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報,2010（12）：945-947.

[8]吳潤,韋田,王勇,等.兔感染肝球蟲后肝臟的病理學(xué)試驗報告[J].四川畜牧獸醫(yī),2005（9）：17-20.

[9]ERJEFALT J S,GREIFF L,ANDERSSON M,et al.Degranulation patterns of eosinophil granulocytes as determinants of eosinophil driven disease[J].T.horox,2001,56：3341-3441.

[10]孟慶玲,才學(xué)鵬,田廣孚,等.斯氏艾美耳球蟲的致病性及病理學(xué)研究[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報,2007,29（10）：788-790.

[11]李瑞珍,劉志科,李會珍,等.用特殊染色對兔肝球蟲的不同形態(tài)及肝臟病變的觀察[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2014（1）：105-107.

[12]陳士恩,馬永華,賈萬忠,等.兔斯氏艾美耳球蟲毒性研究[J].畜牧與獸醫(yī),2010（11）：80-83.

[13]陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社,2006：415-419.

[14]JOHANSSON B,MALM J,PERSSON T,et al.Alpha-1-antitrypsin is present in the specific granules of human eosinophilic granulocytes[J].Clin.Exp.Allergy,2001,31：379-386.

[15]劉潔,崔澤實,裴著果.家兔實驗性心肌缺血的定量酶組織化學(xué)研究[J].中國組織化學(xué)與胞化學(xué)雜志,2005,14（1）：101-106

[16]劉春.南通地區(qū)家兔球蟲病流行病學(xué)調(diào)查、防治研究[D].揚州：揚州大學(xué),2014.

[17]惠禹.張家川縣家兔寄生蟲調(diào)查[J].中國獸醫(yī)寄生蟲病,2000,8（2）：30-34.

（責(zé)任編輯：盧奇）

Rabbit liver coccidiosis epidemiological diagnosis and pathologic histology observation

LIU Zhike1,PAN Yaoqian2,ZHANG Qiuyu2,LI Ruizhen2,CHEN Chuangfu1
（1.College of Animal Science and Technology,Shihezi University,Shihezi,Xinjiang 832003,China；
2.Henan Institute of Science and Technology,Xinxiang 453003,China）

To understand rabbit liver coccidiosis infection and pathological changes in Henan Province,Xinxiang City,five farmers of rabbit slaughterhouse around Xinxiang for sampling,through to the slaughter of 3 700,only the rabbit with the naked eye observation and histopathological method were detected in 345 cases with rabbit liver coccidiosis,the infection rate was 9.3%.Eye view the pathological changes of liver bilges extremely expands,its back had obvious necrosis foci of white or light yellow,spherical,like soybean volume,prominent lesions and the surface of the liver；The nap of the histopathological changes of the gallbladder rupture,a lot of ball into the lumen with epithelial cells and bile duct of villi were branching,lesions surrounded by a large number of neutrophils and lymphocytes,epithelial cells had distribution in different development stage of the Eimeria stiedai.

rabbit liver coccidiosis；liver；macroscopic observation；histopathology

S852.3

A

1008-7516（2016）06-0042-04

10.3969/j.issn.1008-7516.2016.06.011

2016-10-08

劉志科（1989―）,男,河南新鄉(xiāng)人,碩士生.主要從事基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)研究.

陳創(chuàng)夫（1962―）,男,廣東揭西人,博士,教授,博士生導(dǎo)師.主要從事分子病理學(xué)研究.