李發(fā)虎

（內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，內(nèi)蒙古包頭 014109）

蝴蝶蘭是蘭科蝴蝶蘭屬熱帶氣生蘭，其花形似蝴蝶、形狀奇異清秀，花大艷麗、色彩豐富、花期長，近年來深受人們的歡迎，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值與觀賞價(jià)值[1-3]。隨著人們生活水平的不斷提高，蝴蝶蘭的市場需求量也越來越大，但蝴蝶蘭為典型的單莖性熱帶附生蘭，植株很少發(fā)生側(cè)枝，分株繁殖系數(shù)極低，其種子沒有胚乳，自然條件下很難萌發(fā)，通過自身的營養(yǎng)繁殖和種子繁殖均不能滿足工廠化育苗的要求[4-5]。應(yīng)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行蝴蝶蘭的快速繁殖可以縮短育苗周期，在短時(shí)間內(nèi)獲得大量成株。但是蝴蝶蘭依靠種子繁殖其速度較慢，所以人們經(jīng)過幾年的研究得出蝴蝶蘭利用組織培養(yǎng)能加快其繁殖速度[6-7]，研究蝴蝶蘭最好的附加物是椰乳，但是由于椰乳的產(chǎn)地在南方，在北方做關(guān)于蝴蝶蘭的組織快繁用椰乳很不方便，且做組織快繁成本也比較高。為了降低成本、使用方便，本試驗(yàn)選用香蕉來代替椰乳作為組織培養(yǎng)附加物，以不同成熟度香蕉對蝴蝶蘭愈傷組織增殖的影響及降低試管苗生產(chǎn)成本進(jìn)行了系統(tǒng)的研究比較，以期為我國蝴蝶蘭在工廠的大規(guī)模生產(chǎn)提供理論與技術(shù)參考。

1 材料和方法

1.1 供試材料

供試材料為實(shí)驗(yàn)室自主培養(yǎng)的蝴蝶蘭無菌苗，于2015年5至11月份在內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝園林系組培實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行繁育。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)，在培養(yǎng)基、激素濃度、蔗糖、瓊脂用量以及培養(yǎng)條件保持不變的情況下，采用5種不同成熟度的香蕉來進(jìn)行單因素試驗(yàn)，將5種不同成熟度香蕉培養(yǎng)基配方分別編為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ。

Ⅰ：MS+6-BA 4.0 mg/L+瓊脂12 g+蔗糖30 g+香蕉綠色100 g/L；Ⅱ：MS+6-BA 4.0 mg/L+瓊脂12 g+蔗糖30 g+香蕉黃綠色100 g/L；Ⅲ：MS+6-BA 4.0 mg/L+瓊脂12 g+蔗糖30 g+香蕉黃色100 g/L；Ⅳ：MS+6-BA 4.0 mg/L+瓊脂12 g+蔗糖30 g+香蕉黑點(diǎn)100 g/L；Ⅴ：MS+6-BA 4.0 mg/L+瓊脂12 g+蔗糖30 g+香蕉黑色100 g/L。

稱取不同成熟度的香蕉各100 g，將其制成香蕉泥加入培養(yǎng)基中，不同成熟度香蕉培養(yǎng)基各配制1 L，每升培養(yǎng)基分為20瓶，每瓶50 mL；將培養(yǎng)基滅菌后進(jìn)行接種，每瓶中接2個蝴蝶蘭無菌苗，進(jìn)行培養(yǎng)觀察。在觀察的過程中將不同成熟香蕉做的培養(yǎng)基各隨意抽取10瓶來觀察褐變情況、增殖情況及蝴蝶蘭葉片生長的影響，調(diào)查褐變快慢程度、轉(zhuǎn)接褐變的次數(shù)，增殖倍數(shù)、增殖類型以及葉片生長的顏色、數(shù)量、大小及曲展程度等指標(biāo)。

將接好的蝴蝶蘭無菌苗置于培養(yǎng)室中，按不同培養(yǎng)基配方有規(guī)律地?cái)[放在培養(yǎng)架上進(jìn)行培養(yǎng)，以便于觀察記錄。每天進(jìn)行光照培養(yǎng)12 h，暗培養(yǎng)12 h，同時(shí)觀察蝴蝶蘭褐變程度，以及時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)接，保證蝴蝶蘭的正常生長。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對蝴蝶蘭增殖過程中褐變情況的影響

褐變是植物組織培養(yǎng)過程中常見的一種現(xiàn)象，是外植體在培養(yǎng)過程中，組織自身從表面向培養(yǎng)基釋放出的褐色物質(zhì)，導(dǎo)致培養(yǎng)基慢慢變成褐色，外植體也隨之進(jìn)一步褐變從而死亡的現(xiàn)象[8]；表1表明，通過組織培養(yǎng)方式對蝴蝶蘭無菌苗進(jìn)行繁殖培育過程中，5種不同配方的培養(yǎng)基對蝴蝶蘭增殖過程中褐變的發(fā)生有明顯差異，在配方Ⅰ培養(yǎng)基上生長的蝴蝶蘭無菌苗發(fā)生褐變的時(shí)間最晚為18 d，其次配方Ⅲ為14 d，褐變發(fā)生最快的為配方Ⅴ，僅有6 d；從褐變發(fā)生的程度來看，在配方Ⅰ培養(yǎng)基上生長的蝴蝶蘭無菌苗發(fā)生褐變的斑塊最小，直徑僅為0.5 cm，其次配方Ⅲ的斑塊大小為1 cm，發(fā)生褐變斑塊最大的為配方Ⅴ上生長的蝴蝶蘭無菌苗，直徑可達(dá)4 cm左右；在控制褐變轉(zhuǎn)接次數(shù)方面，在配方Ⅰ培養(yǎng)基上生長的蝴蝶蘭無菌防止苗褐變轉(zhuǎn)接次數(shù)為1，其次配方Ⅲ為2次，次數(shù)最多的為配方Ⅴ達(dá)4次。

表1 不同培養(yǎng)基對蝴蝶蘭褐變情況對比

2.2 不同培養(yǎng)基對蝴蝶蘭增殖情況的影響

本試驗(yàn)采用組織培養(yǎng)方法對蝴蝶蘭無菌苗進(jìn)行快速繁殖，該方法具有增殖率高，不受季節(jié)限制，易除病毒等優(yōu)點(diǎn)；由5種不同培養(yǎng)基對蝴蝶蘭增殖情況的對比說明，配方Ⅲ對蝴蝶蘭的增殖倍數(shù)是相對較多（可達(dá)4.5倍），其次為配方Ⅳ（4倍），而蝴蝶蘭增殖倍數(shù)最少的為配方Ⅰ上生長的類原球莖；蝴蝶蘭無菌苗在5種不同培養(yǎng)基上的增殖方式也不盡相同，培養(yǎng)Ⅰ的增殖方式為類原球莖，而配方Ⅱ、Ⅴ為叢生芽，配方Ⅲ和Ⅳ的增殖方式為類原球莖及叢生芽混合增殖（表2）。

2.3 不同培養(yǎng)基對蝴蝶蘭增殖過程中葉片生長的影響

由表3可知，采用5種不同的培養(yǎng)基進(jìn)行蝴蝶蘭無菌苗快速繁殖時(shí)，其不同的培養(yǎng)基對蝴蝶蘭葉片的生長有明顯差異；配方Ⅲ上生長的蝴蝶蘭無菌苗葉片數(shù)量最多為4片，配方Ⅱ、Ⅳ和Ⅴ上生長的蝴蝶蘭無菌苗葉片數(shù)相同，均為3片，配方Ⅰ上生長的葉片數(shù)最少為2片；從顏色上觀察可以發(fā)現(xiàn)，配方Ⅱ和Ⅲ生長的蝴蝶蘭無菌苗葉片為濃綠色，配方Ⅰ和Ⅳ生長的蝴蝶蘭無菌苗葉片為綠色，而配方Ⅴ生長的蝴蝶蘭無菌苗葉片為葉片綠色發(fā)紅；在葉片大小上Ⅱ、Ⅲ長得較好；經(jīng)比較分析發(fā)現(xiàn)，配方Ⅱ、Ⅲ對蝴蝶蘭無菌苗葉片生長的效果較好，生長健壯。

表2 不同培養(yǎng)基對葉片生長影響的對比

3 結(jié)論與討論

相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，蝴蝶蘭無菌苗的快速繁殖、培養(yǎng)過程中，其培養(yǎng)基中的不同添加物會對增殖及分化產(chǎn)生影響；水解酪蛋白能夠促進(jìn)蝴蝶蘭原球莖的增殖，而香蕉泥與水解酪蛋白混合則對原球莖產(chǎn)生一定的抑制作用，有機(jī)添加物與培養(yǎng)基之間的作用以及有機(jī)添加物自身內(nèi)部的相互作用都可以對蝴蝶蘭原球莖的增殖產(chǎn)生一定的影響；也有研究表明，如在基本培養(yǎng)基中添加適當(dāng)?shù)南憬赌?、椰乳或含有膠質(zhì)的果汁、菜汁等，都將在一定程度上促進(jìn)蝴蝶蘭原球莖的增殖[9]。張敏等[10]在蝴蝶蘭組織培養(yǎng)生根影響因子的篩選研究中發(fā)現(xiàn)：基本培養(yǎng)基以1/2MS培養(yǎng)基最為適宜，香蕉泥對無菌試管苗生長及生根都有明顯的促進(jìn)作用；本試驗(yàn)選用香蕉來代替椰乳作為組織培養(yǎng)附加物，以不同成熟度香蕉對蝴蝶蘭愈傷組織增殖的影響及降低試管苗生產(chǎn)成本進(jìn)行了系統(tǒng)研究比較，發(fā)現(xiàn)從無菌苗的褐變情況來看，培養(yǎng)基配方Ⅰ、Ⅲ在控制褐變現(xiàn)象方面較好，從無菌苗增殖情況觀察發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基配方Ⅲ、Ⅳ上生長的蝴蝶蘭增殖情況較好，而從葉片生長情況考慮，培養(yǎng)基配方Ⅱ、Ⅲ上生長的蝴蝶蘭無菌苗葉片生長情況較好。

近年來，對蝴蝶蘭組織培養(yǎng)快繁技術(shù)的研究報(bào)道較多，多以花梗、幼葉、莖尖和根尖等多種器官為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)研究，而這些方法都對母株有不同程度的損傷[11]；在蝴蝶蘭組織培養(yǎng)過程中，經(jīng)過長期繼代培養(yǎng)后的無菌苗生長發(fā)育緩慢、根系生長困難，但形態(tài)正常，可繼續(xù)用于蝴蝶蘭分生苗的快速繁殖，通過對組織培養(yǎng)條件的優(yōu)化，培養(yǎng)基中可添加適宜種類與濃度的生長調(diào)節(jié)劑和有機(jī)物進(jìn)行調(diào)控生長量與增殖率的平衡，從而實(shí)現(xiàn)蝴蝶蘭組織培養(yǎng)快速繁殖效益的最大化[12]；潘虹虹等在春石斛試管苗生根試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中使用椰汁效果較好，而添加香蕉汁后，試管苗易污染及褐化現(xiàn)象發(fā)生，可能與蝴蝶蘭品種及試驗(yàn)條件差異有關(guān)[13]。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，采用5種不同成熟度香蕉對蝴蝶蘭無菌苗增殖的影響研究中，培養(yǎng)基配方Ⅳ，即MS+6-BA 4.0 mg/L+瓊脂12 g+蔗糖30 g+有機(jī)附加物（黃香蕉）100 g較適合蝴蝶蘭無菌瓶苗的增殖生長；表明選用香蕉來代替椰乳作為蝴蝶蘭組織培養(yǎng)附加物可行性，為在我國北方地區(qū)進(jìn)行蝴蝶蘭的組織快繁降低成本、使用方便、快捷提供參考，也為內(nèi)蒙古地區(qū)進(jìn)一步對蝴蝶蘭無菌瓶苗增殖研究奠定基礎(chǔ)。

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