鄭昆

（吉林化工學(xué)院，吉林吉林132012）

糖蛋白的提取及免疫調(diào)節(jié)功能研究

鄭昆

（吉林化工學(xué)院，吉林吉林132012）

驗(yàn)證糖蛋白生理活性及免疫調(diào)節(jié)功能以蛋清粉作為試驗(yàn)原料，對(duì)其進(jìn)行提取及提純處理，并通過(guò)對(duì)小鼠進(jìn)行為期20d的喂養(yǎng)，然后分別取出脾臟及肝臟，進(jìn)行胸腺指數(shù)及脾指數(shù)的SPASS分析，用來(lái)驗(yàn)證可溶性糖蛋白是否對(duì)免疫器官有影響；通過(guò)在小鼠尾靜脈中注射中華墨汁，判斷糖蛋白對(duì)小鼠非特性免疫功能的影響；通過(guò)定量溶血試驗(yàn)，驗(yàn)證可溶性糖蛋白對(duì)小鼠體液免疫功能的影響。結(jié)果表明：高劑量的糖蛋白對(duì)小鼠免疫器官無(wú)顯著影響，而對(duì)機(jī)體的非特性免疫功能、機(jī)體的溶血值具有顯著影響。

糖蛋白；可溶性糖；生理活性；免疫

在動(dòng)植物及微生物當(dāng)中糖蛋白普遍存在，并且是生物體中重要的組成部分，在細(xì)胞膜、細(xì)胞間質(zhì)甚至是細(xì)胞外液中都存在糖蛋白[1]。由于糖蛋白的生理功能較為強(qiáng)大[2]，所以一直以來(lái)都是學(xué)術(shù)界研究的重點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與試劑

新鮮蛋清粉，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供；所需試劑有分析純氯化鈉、分析純鹽酸、分析純無(wú)水乙醇、分析純氫氧化鈉和去離子水。中華墨汁，糖蛋白，小鼠（實(shí)驗(yàn)室喂養(yǎng)）

1.2 可溶性糖蛋白的提取優(yōu)化方法

依據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，針對(duì)sevage試劑（以下簡(jiǎn)稱A試劑）添加比例、sevage試劑中正丁醇和氯仿的比例、脫蛋白時(shí)間等進(jìn)行正交試驗(yàn)見(jiàn)表1，然后利用多糖及蛋白質(zhì)二者的含量指標(biāo)對(duì)糖蛋白脫蛋白的工藝進(jìn)行優(yōu)化。

表1 正交試驗(yàn)因素變動(dòng)表

1.3 可溶性糖蛋白對(duì)免疫器官的影響試驗(yàn)方法

對(duì)小鼠進(jìn)行為期20d的喂養(yǎng)，然后分別取出脾臟及肝臟，進(jìn)行胸腺指數(shù)及脾指數(shù)的SPASS分析，用此來(lái)驗(yàn)證可溶性糖蛋白是否對(duì)免疫器官有所影響。

1.4 可溶性糖蛋白對(duì)非特異性免疫功能的影響試驗(yàn)方法

將中華墨汁作為外來(lái)異物通過(guò)尾靜脈注射到小鼠體內(nèi)，這些小鼠已經(jīng)喂養(yǎng)20d的糖蛋白，在注射完中華墨汁后分別在2min和10min時(shí)從小鼠靜脈叢中進(jìn)行取血，然后對(duì)血液的OD值進(jìn)行測(cè)定，將小鼠處死，然后對(duì)其體重、脾臟及肝臟的重量進(jìn)行測(cè)定，最后計(jì)算出吞噬指數(shù)，采用SPASS法進(jìn)行結(jié)果分析。

1.5 可溶性糖蛋白對(duì)體液免疫功能的影響試驗(yàn)方法

將喂養(yǎng)了20d的小鼠使用SRBC進(jìn)行免疫，免疫5d后將小鼠的脾臟細(xì)胞取出，然后用SRBC進(jìn)行補(bǔ)體孵育，測(cè)定上清液的OD值進(jìn)行測(cè)定，同樣也采取SPASS法進(jìn)行分析。

1.6 測(cè)定方法

可溶性糖蛋白使用考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行含量的測(cè)定。

2 試驗(yàn)結(jié)果及分析

2.1 提取優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果

以所測(cè)的蛋白質(zhì)含量、多糖含量作為具體的衡量指標(biāo)，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用正交試驗(yàn)方法對(duì)脫蛋白的工藝進(jìn)行優(yōu)化，最終得到以下結(jié)論：①當(dāng)在2∶1的正丁醇與氯仿混合液中添加3∶1的sevage試劑，脫蛋白的時(shí)間為30min，該試驗(yàn)條件下所得到的可溶性糖蛋白中蛋白質(zhì)的含量是最低的，也就是說(shuō)該試驗(yàn)條件下脫蛋白脫的是最徹底的，其蛋白質(zhì)的含量大約為8%；②當(dāng)在2∶1的正丁醇與氯仿混合液當(dāng)中添加3∶1的sevage試劑，脫蛋白的時(shí)間為40min，該試驗(yàn)條件下所得到的可溶性糖蛋白中多糖的含量是最低的，也就是說(shuō)該試驗(yàn)條件下脫蛋白的效果是最好的，其多糖的含量大約為4.6%。

2.2 可溶性糖蛋白對(duì)免疫器官的影響結(jié)果與分析

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)雖然喂養(yǎng)了糖蛋白的小鼠不管是胸腺指數(shù)還是脾指數(shù)都有了不同程度的提高，但是這種提高和對(duì)照組相比較并不是非常明顯，這從側(cè)面說(shuō)明了糖蛋白對(duì)于免疫器官的影響并不是非常明顯的。

2.3 可溶性糖蛋白對(duì)非特異性免疫功能的影響

從表1可以看出，與空白對(duì)照組相比，不管是低劑量、中劑量還是高劑量的糖蛋白對(duì)小鼠的吞噬指數(shù)值都有明顯的影響，使其不同程度的有所提高，其中低劑量和中劑量的效果差不多，而高劑量的影響是最大的。我們知道吞噬細(xì)胞所具有的吞噬功能夠反映出小鼠非特異性免疫功能，所以根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果能夠得出糖蛋白能夠顯著提高機(jī)體吞噬細(xì)胞的功能，從而使其非特異性免疫功能得到顯著提高，其中高劑量的糖蛋白作用效果是最強(qiáng)的。

表1 糖蛋白對(duì)小鼠非特異性免疫功能的影響

2.4 可溶性糖蛋白對(duì)體液免疫功能的影響

從表2可以看出，和對(duì)照組相比，低劑量、中劑量和高劑量糖蛋白都能夠?qū)C(jī)體的溶血值產(chǎn)生影響，并且是正相關(guān)。這說(shuō)明了糖蛋白可以影響機(jī)體的體液免疫，并且高劑量的糖蛋白度小鼠的體液免疫是最為顯著的。

表2 糖蛋白對(duì)機(jī)體溶血值的影響結(jié)果

3 結(jié)論

首先對(duì)可溶性糖蛋白的提取進(jìn)行了優(yōu)化，然后為了對(duì)其所具有的免疫調(diào)節(jié)功能進(jìn)行研究，分別用不同濃度的糖蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行為期20d的喂養(yǎng)，并采用不同的方法對(duì)其免疫功能進(jìn)行定量測(cè)定，最后得出了高劑量的糖蛋白對(duì)小鼠免疫器官無(wú)顯著影響，而對(duì)機(jī)體的非特性免疫功能、機(jī)體的溶血值具有顯著影響。

[1]李琦,景浩.蛋清蛋白糖基化及其成膜性的研究[A]//中國(guó)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會(huì)第七屆年會(huì)論文摘要集,2010.

[2]張艷.裸燕麥糖蛋白的提取純化及抗氧化作用研究[D].保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2010.

Study on the Extraction of Glycoprotein and the Function of Immune Regulation

Zheng Kun
(Jilin Institute of Chemical Technology,Jilin Jilin 132012)

In order to verify the physiological activity and immune regulation function of glycoprotein.Test methods:the egg white powder as the test material,the extraction and purification process,and through a 20d feed on mice,and then remove the spleen and liver,thymus index and spleen index were analyzed by SPASS,to verify whether the soluble glycoprotein has effect on immune organs;the Chinese ink injection in mice in a vein,to evaluate the influence of P-glycoprotein on characteristics of immune function in mice;through quantitative hemolysis test,verify the effect of soluble glycoprotein on humoral immune function in mice.The results showed that high dose of glycoprotein had no significant effect on the immune organs of mice,but had significant effect on the immune function of the body and the hemolytic value of the body.

Glycoprotein;Soluble sugar;Physiological activity;Immunity

Q599

A

2096-0387（2016）06-0063-02

鄭昆（1970-），男，吉林省吉林市人，博士，副教授，研究方向：生物化工-酶制劑。