汪賢梅，張志強，唐 方

（1.天津醫(yī)科大學總醫(yī)院中醫(yī)科，天津300052；2.天津紅日藥業(yè)股份有限公司，天津301700）

論著

不同廠家及批次麻黃配方顆粒質(zhì)量差異的研究

汪賢梅1，張志強2，唐 方1

（1.天津醫(yī)科大學總醫(yī)院中醫(yī)科，天津300052；2.天津紅日藥業(yè)股份有限公司，天津301700）

目的：考察不同廠家及不同批次麻黃配方顆粒劑質(zhì)量差異。方法：采用紅外光譜（FTIR）法明確麻黃顆粒劑與麻黃對照藥材成分的相似度；高效液相色譜法（HPLC）對其主要生物堿成分麻黃堿和偽麻黃堿進行含量測定，分析柱：WondaSil C18（250 mm×4.6 mm,5 μm），流動相：乙腈-0.3%磷酸溶液（含0.05%三乙胺）（4∶96，v:v）,流速：1.0 mL·min-1，柱溫：30℃，檢測波長：210 nm。結果：不同廠家各批次麻黃配方顆粒與麻黃對照藥材紅外特征圖譜的相似度≥92%；不同品牌麻黃顆粒劑中，麻黃堿和偽麻黃堿含量存在顯著性差異（P＜0.01）；同廠家不同批次麻黃顆粒劑中麻黃堿和偽麻黃堿含量間存在差異，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，P＜0.01）。結論：不同廠家、同廠家不同批次麻黃配方顆粒劑中麻黃堿和偽麻黃堿含量存在顯著差異。

麻黃配方顆粒劑；紅外光譜；高效液相色譜法；麻黃堿；偽麻黃堿

中藥配方顆粒是一種有別于傳統(tǒng)中藥飲片的新型制劑，通過現(xiàn)代制藥技術制成的單味中藥制劑[1]。目前我國批復試點生產(chǎn)中藥配方顆粒的企業(yè)共6家，均已具備獨立的質(zhì)量標準和工藝規(guī)范。該產(chǎn)品與傳統(tǒng)飲片水煎劑相比，其便于攜帶、儲存、調(diào)配等優(yōu)勢，正逐漸受到醫(yī)療市場的認可、推廣與使用。但由于配方顆粒劑生產(chǎn)企業(yè)缺乏統(tǒng)一、規(guī)范化生產(chǎn)工藝及統(tǒng)一的質(zhì)量標準，導致同品種存在規(guī)格不一、等效劑量不一等問題。目前有5家企業(yè)生產(chǎn)的麻黃配方顆粒劑在醫(yī)療市場流通，但尚未有對不同廠家及同廠家不同批次間樣品比較的報道。本試驗選取其中3個企業(yè)共6批次的麻黃配方顆粒劑，通過紅外光譜技術對其進行定性鑒別，并采用高效液相色譜法（HPLC）測定其主要有效成分麻黃堿和偽麻黃堿的含量，以比較其存在的差異，為產(chǎn)品質(zhì)量控制提供依據(jù)，也為不同品牌配方顆粒劑在臨床中交互應用提供便利。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 Spectrum Two IR（PerkinElmer公司）；FW-5壓片機（天津博天勝達科技發(fā)展有限公司）；島津LC-2010AHT高效液相色譜儀【四元泵、SPD-10AVP紫外檢測器、COT-10AVP柱溫箱、WondaSil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm）（島津企業(yè)管理（中國）有限公司）】。

1.1.2 試藥及試劑 鹽酸麻黃堿對照品（批號:171241-201007）、鹽酸偽麻黃堿對照品（批號: 171237-201208）由中國食品藥品檢定研究院提供；草麻黃對照藥材（批號:121051-201005）由中國食品藥品檢定研究院提供。甲醇、乙腈均為色譜純（賽默飛世爾科技（中國）有限公司），屈臣氏蒸餾水（廣州屈臣氏食品飲料有限公司），其它試劑均為市售分析純。麻黃配方顆粒劑分別購自天津紅日康仁堂（KRT）藥業(yè)銷售有限公司，批號:14006411（KRT1）、14017809（KRT2）；四川新綠色（LS）藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，批號:13070157（LS1）、14030117（LS2）；江陰天江（TJ）藥業(yè)有限公司，批號:1309118（TJ1）、1403125（TJ2）。樣品基源均標注為草麻黃。

1.2 方法

1.2.1 FTIR （1）儀器參數(shù):光譜范圍4000～400cm-1，分辨率4cm-1，信號掃描累加次數(shù)4次，自動增益,自動大氣背景扣除。（2）測定方法:取樣品粉末（過9號篩）約1.5 mg加溴化鉀200 mg，壓片，待測。每個樣品取樣4次測定，求取其平均光譜進行數(shù)據(jù)分析。

1.2.2 HPLC

1.2.2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性[2-6]:色譜柱:WondaSil C18（250mm×4.6mm，5μm），流動相:乙腈-0.3%磷酸溶液（含0.05%三乙胺）（4∶96，v:v），流速:1.0 mL·min-1，柱溫:30℃，檢測波長:210 nm。

1.2.2.2 對照品溶液制備:取鹽酸麻黃堿對照品和鹽酸偽麻黃堿對照品，精密稱定，加甲醇制成1 mL約含鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿各40 μg的混合對照品溶液，備用。

1.2.2.3 供試品溶液制備:取麻黃配方顆粒劑粉末0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入1.44%磷酸溶液50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率600 W，頻率50 kHz）20 min，冷卻，再稱定質(zhì)量，用1.44%磷酸溶液補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.2.2.4 專屬性試驗:分別取對照品溶液10 μL和供試品溶液5 μL，按照“1.2.2.1”項下色譜條件進樣測定。

1.2.2.5 線性范圍考察:精密吸取對照品貯備液分別以 1、2、4、6、8、10、12、14、16 μL進樣，按照“1.2.2.1”項下色譜條件進樣測定。

1.2.2.6 精密度試驗:取鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿混合對照品溶液，按照“1.2.2.1”項下色譜條件進樣測定，連續(xù)進樣6次，進樣量10 μL，記錄峰面積和保留時間。

1.2.2.7 重復性試驗:取廠家KRT1麻黃配方顆粒劑粉末6份，按“1.2.2.3”項下方法制備供試品溶液，按照“1.2.2.1”項下色譜條件進樣10 μL測定，記錄峰面積并計算含量。

1.2.2.8 穩(wěn)定性試驗:取廠家TJ1麻黃顆粒劑供試品溶液，按照“1.2.2.1”項下色譜條件，分別于0、2、4、6、8、12、24 h進樣10 μL測定，記錄峰面積和保留時間。

1.2.2.9 加樣回收率試驗:取已測知含量的廠家KRT1麻黃顆粒劑粉末6份，精密稱定，分別精密加入一定量的鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對照品溶液，按“1.2.2.3”項方法制備供試品溶液，按照“1.2.2.1”項下色譜條件，進樣10 μL測定，記錄峰面積并計算回收率。

1.2.2.10 樣品含量測定:6批次麻黃配方顆粒劑，按“1.2.2.3”項方法制備供試品溶液，按照“1.2.2.1”項下色譜條件，各進樣5 μL進行測定，記錄峰面積并計算含量。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料以s表示，組內(nèi)比較采用t檢驗，組間比較用單因素方差分析，P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 FTIR結果 不同廠家、不同批次麻黃配方顆粒與草麻黃對照藥材（r=1）紅外特征圖譜相比較,相似度均不低于92%，即3個廠家麻黃配方顆粒劑在大生產(chǎn)過程中，其有效藥用成分保留相對完整（圖1）。

圖1 配方顆粒劑與對照藥材紅外圖譜比較Fig 1 Comparison of IR fingerprint about formula particles and contrast medicinal material

2.2 HPLC

2.2.1 專屬性試驗結果 按照HPLC測定方法及相應濃度，繪制色譜圖，見圖2。由圖可知，該色譜條件下，鹽酸麻黃堿保留時間為19.726 min，鹽酸偽麻黃堿保留時間為21.649 min，峰形良好，且與其他峰分離較好。

圖2 鹽酸麻黃堿對照品（A）、混合對照品（B）及其樣品(C)HPLC圖Fig 2 HPLC chromatograms of reference substance(A),mixed reference substances(B)and sample(C)

2.2.2 線性范圍考察結果 以進樣量（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標，繪制標準曲線，得到鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的回歸方程分別是:Y= 108 242X+2 046.2（r=0.999 7，n=7）；Y=104 371X+ 14 018（r=0.999 9，n=7）。表明鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿分別在0.05～0.74 μg、0.04～0.71 μg成良好的線性關系。

2.2.3 精密度試驗結果 鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的保留時間的RSD分別是0.76%和0.83%，峰面積的RSD分別是1.22%和0.91%，均小于2%，說明儀器的精密度良好。

2.2.4 重復性試驗結果 鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量的RSD（n=6）分別是1.01%和0.65%,表明本方法重復性良好。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗結果 鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的保留時間的RSD分別是0.66%和0.71%，峰面積的RSD分別為0.22%和0.52%（n=7），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.6 加樣回收率試驗結果 鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿平均回收率分別為96.27%、103.37%，RSD分別為0.40%和1.00%（n=6）。

2.2.7 樣品含量結果 如表1所示，不同品牌麻黃顆粒劑中，麻黃堿和偽麻黃堿含量存在顯著性差異（P＜0.01）；同廠家不同批次麻黃顆粒劑中麻黃堿和偽麻黃堿含量間存在差異，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，P＜0.01）。

表1 不同廠家及批次麻黃配方顆粒劑中麻黃堿和偽麻黃堿含量（mg·g-1）（n=4）Tab 1 The content of ephedrine and d-pseudephedrine in mahuang formula granules from different factories and batches（mg·g-1）（n=4）

3 討論

本研究首先采用FTIR測定麻黃顆粒劑與對照藥材成分的相似度，結果顯示，3個廠家6個批次麻黃配方顆粒與麻黃對照藥材的紅外特征圖譜相似度≥92%，提示各廠家在藥用有效成分保留上相對完整，且同一廠家不同批次麻黃顆粒劑紅外特征圖譜相似度比較相似度差異＜10%，提示各廠家質(zhì)量控制相對穩(wěn)定。雖然麻黃配方顆粒保留了麻黃飲片的水煎液的物質(zhì)基礎，但僅以大生產(chǎn)過程中成分保留相對完整作為評價麻黃配方顆粒達到“全成分轉(zhuǎn)移”的質(zhì)控標準并不十分完善。

為此，在藥用有效成分對比分析基礎上，利用HPLC技術對不同廠家及批次麻黃配方顆粒樣品進行了主成分含量比較。結果顯示，不同廠家間及部分廠家不同批次間麻黃堿和偽麻黃堿含量均存在差異，這與文獻報道[7-8]由于工藝不同導致配方顆粒劑主成分含量存在顯著性差異相吻合。另外，各廠家顆粒劑在外觀性狀上也存在差異。以上結果證實工藝間缺乏統(tǒng)一性、規(guī)范化標準是影響各廠家相同產(chǎn)品主成分含量不一，不同廠家同產(chǎn)品間難以交互通用的主要因素。提示以中藥紅外指紋圖譜對配方顆粒成分結構給予的定性鑒別，與高效液相色譜法對配方顆粒主成分含量的定量分析相結合是完善質(zhì)控標準，保證產(chǎn)品質(zhì)量的必要措施。

2010版《中國藥典》收載的麻黃為草麻黃Ephedra sinica Stapf、中麻黃 Ephedra intermedia Schrenk et C.A.Mey.或木賊麻黃Ephedra equisetina Bge.的干燥草質(zhì)莖[9]，目前市售麻黃藥材多把3種麻黃混同使用，以草麻黃為主。大量文獻報道[10-12]，中藥材的產(chǎn)地、種屬等都會影響藥物主成分含量。本課題前期研究結果證實:麻黃種屬與主成分麻黃堿、偽麻黃堿含量的變化呈顯著正相關，且種屬間存在極顯著差異（P＜0.01）。由此提示，制定配方顆粒劑相關企業(yè)統(tǒng)一的質(zhì)控標準和工藝規(guī)范，是提高配方顆粒劑質(zhì)量的重要措施。而科學規(guī)范地確認、選擇藥材資源亦是確保麻黃配方顆粒劑主成分含量相對穩(wěn)定的又一重要措施。

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（2015-09-20收稿）

Research on the quality differences of mahuang formula grarules between different manufacturers and batches

WANG Xian-mei1，ZHANG Zhi-qiang2,TANG Fang1
（1.Department of Traditional Chinese Medicine,General Hospital,Tianjin Medical University,Tianjin 300052,China；2.Tianjin Chase Sun Pharmaceutical.,TLD,Tianjin 301700，China）

Objective：To compare qualities of mahuang formula particles from different manufacturers and batches.Methods：First of all，the similarity of contrast medicinal material and mahuang formula granules of different manufacturers was defined by using the FTIR fingerprint.Then content of ephedrine and d-pseudephedrine in mahuang formula granules was determined with HPLC,chromatographic column was WondaSil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),the mobile phase was V(methylcyanide):V(0.3%ammonium dihydrogen phosphate solution including 0.05%triethylamine)=4∶96,flow rates was 1.0 mL·min-1,the temperature was 30℃,and length of detection wave was 210 nm.Results：FTIR showed the similarity of all components between each sample and contrast medicinal material were higher than 92%.Comparison between different manufacturers,there were significant differences between ephedrine and d-pseudephedrine (P＜0.01)；comparison of different batches of the same manufacturer,there were differences of pehedrine and d-pseudephedrine,with statistical significance(P＜0.01,P＜0.05).Conclusion：The contents of ephedrine and d-pseudephedrine of all samples from different manufacturers and different batches are significantly different.

mahuang formula granules;FTIR;HPLC;ephedrine;d-pseudephedrine

R92

A

1006－8147（2016）02-0168-03

汪賢梅(1989-),女，碩士在讀，研究方向：中藥有效成分含量分析；通信作者:唐方,E-mail:zhongyi3599@sina.com。