曾日祥　馬勇　賴玉靈

516300　廣東省惠東縣人民醫(yī)院骨科(曾日祥、賴玉靈)；南昌大學第一附屬醫(yī)院骨二科(馬勇)

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·論著·

急性脊髓損傷患者外周血 hs-CRP、TNF-α、IL-6和 IL-10 的動態(tài)表達及臨床意義

曾日祥馬勇賴玉靈

516300廣東省惠東縣人民醫(yī)院骨科(曾日祥、賴玉靈)；南昌大學第一附屬醫(yī)院骨二科(馬勇)

【摘要】目的研究分析不同損傷程度的急性脊髓損傷患者外周血炎性細胞因子超敏C-反應蛋白(hs-CRP)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)、白細胞介素-10(IL-10)的動態(tài)變化及意義。方法對脊柱外科2012至2014年收治的87例急性脊柱骨折患者依據(jù)美國脊柱損傷協(xié)會(ASIA)標準進行分組，其中A級患者21例(完全損傷組)，B、C、D級患者42例(不完全損傷組)，E級患者24例(骨折組，僅脊柱骨折，無脊髓損傷)、正常健康人群30例為健康組；分別檢測各組不同時間細胞因子水平并進行比較分析。結果完全損傷組、不完全損傷組及骨折組hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-10水平在傷后第1天逐漸升高、傷后第3天達到高峰，后逐漸回落；傷后不同時間比較，hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-10水平組間比較；結果為完全損傷組>不完全損傷組>骨折組>健康組，且組間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結論急性脊髓損傷患者外周血炎性細胞因子水平顯著增高，其變化水平與患者的脊髓損傷程度有一定關系。

【關鍵詞】急性脊髓損傷；炎性細胞因子；超敏C-反應蛋白；腫瘤壞死因子-α；白細胞介素-6；白細胞介素-10；動態(tài)變化

脊髓損傷是脊柱損傷最嚴重的并發(fā)癥，可導致?lián)p傷節(jié)段以下肢體嚴重功能障礙。脊髓損傷不僅會給患者本人帶來身體和心理的嚴重傷害，還會對整個社會造成巨大的經(jīng)濟負擔。急性脊髓損傷導致的脊髓休克以及脊髓震蕩可導致相應下肢節(jié)段的中樞性癱瘓或周圍性癱瘓，同時可伴有周圍神經(jīng)麻痹以及大小便失禁等癥狀[1,2]。近年來對進行脊髓損傷導致的相關病變的研究開始關注與相關炎性因子的改變，認為包括外周血炎性細胞因子超敏C-反應蛋白(hs-CRP)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)、白細胞介素-10(IL-10)水平的改變可以通過交錯作用的方式加重脊髓細胞損傷、加重脊髓前角或后角神經(jīng)根的刺激作用[3]，加重病情。本文通過分析不同損傷程度的急性脊髓損傷患者外周血炎性細胞因子的變化，進而揭示相關炎性因子對于急性脊髓損傷病情的評估作用。

1資料與方法

1.1一般資料選取廣東省惠東縣人民醫(yī)院和南昌大學第一附屬醫(yī)院脊柱外科2012至2014年收治的87例急性脊柱骨折患者依據(jù)美國脊柱損傷協(xié)會(ASIA)標準進行分組，其中A級患者21例(完全損傷組)，B、C、D級患者42例(不完全損傷組)，E級患者24例(骨折組，僅脊柱骨折，無脊髓損傷)、正常健康人群30例為健康組(南昌大學第一附屬醫(yī)院體檢中心)。完全損傷組男16例，女5例；年齡21～65歲，平均年齡(36.3±13.9)歲；ASIA分級均為A級；其中胸腰椎骨折13例、頸椎骨折8例。不完全損傷組男31例，女9例；年齡18～65歲，平均年齡(39.3±14.0)歲；ASIA分級：B級11例、C級18例、D級13例；其中胸腰椎骨折28例，頸椎骨折15例。骨折組男17例，女7例；年齡26～61歲，平均年齡(35.8±15.2)歲；ASIA分級均為E級，其中胸腰椎骨折18例，頸椎骨折6例。健康組男22例，女8例；年齡24～60歲，平均年齡(37.8±14.9)歲；4組患者年齡、性別比等一般資料構成無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2納入與排除標準

想象假期是工作間隙里大腦休息的最佳方式之一。只是打開地圖，瀏覽一下目標城市的空間或比較一下機票旅館的價格，就好像聞到了度假的空氣。度假要到別處去，這是一種不需要理由的認定。反而是留下來，留在家里，才需要解釋，需要自辯。也許是因為家每天都在那里，每天都一樣，每天都等著自己開門，換鞋，換上軟和寬松的衣服，往沙發(fā)里一下沉下去。別處則樣樣不同：從公交車的涂裝到人行道地磚的花樣，從面條的粗細到街貓的身材。到別處去轉(zhuǎn)一圈，其實是讓人更好地認識自己的日常生活。即使是阿Q，也會主動地對煎魚該加切細的蔥絲還是半寸長的蔥葉做出識別與分辨，需要時便是論爭的武器。

1.2.1納入標準：①脊柱骨折伴脊髓損傷患者均具有明確的外傷病史，入院時經(jīng)X線片、CT、MRI進一步明確診斷；②脊柱骨折伴脊髓損傷程度的診斷及分級標準依據(jù)美國脊柱損傷協(xié)會(ASIA)標準；③患者近期未應用抗菌藥物、消炎鎮(zhèn)痛等藥物；④本研究實施前告知患者家屬研究目的、意義并取得其知情同意，研究方案報本院醫(yī)學倫理委員會批準。

進入新世紀,信息技術、智能智造、生活文化在全球范圍內(nèi)形成了一場新的產(chǎn)業(yè)革命。人類從工業(yè)革命、科技革命進入到創(chuàng)意革命的時代。創(chuàng)意、創(chuàng)新、創(chuàng)造成為時代發(fā)展的亮點。

1.3標本檢測采集清晨空腹靜脈血2 ml，離心2 000 r/min 8 min后，取血清-80℃保存。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清外周血hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-10水平，試劑盒購自上海拜力生物科技有限公司。

上述6個省能成為卡車司機的輸出大省，主要有以下幾個原因：一是人口眾多。2017年最新統(tǒng)計結果顯示，6省人口數(shù)量均位列全國前10。二是經(jīng)濟相對發(fā)達。2017年江蘇和山東的經(jīng)濟總量位居第二位和第三位，頭名是廣東。三是貨源豐富和公路路網(wǎng)發(fā)達。以排名前兩位的江蘇和山東為例，江蘇的公路密度達到了154公里/百平方公里，遠遠高于全國平均水平；而山東的卡車司機主要來自物流之都——臨沂。臨沂是我國北方最大的商品集散中心。

受原材料價格上漲影響，復合肥價格自國慶節(jié)過后一直呈現(xiàn)階梯狀上揚的走勢。尿素價格近期持續(xù)高位，進入11月份，而在供應方面，受北方供暖影響，天然氣供應緊張，北方氣頭將相繼停車，造成供應減少。原料方面，煤炭價格繼續(xù)高位，企業(yè)成本繼續(xù)高位。再加上環(huán)保檢查力度加大，預計后期尿素價格下降的可能性不大。

1.4觀察指標及檢測方法檢測并比較4組研究對象在傷后第1、3、5、7天的患者外周血炎性細胞因子hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-10水平。以標準品稀釋液將標準品復溶，靜置15 min后混勻，背比稀釋為7個濃度，取出板條，除了對照孔外每個孔加入不同濃度的標準品，劑量為100 μl/孔，采用封板蓋封住，室溫反應120 min，使用PBS液體洗滌三次，除了空白對照孔，每孔加入檢測液(100 μl)，室溫孵育一小時，PBS洗滌三次，加入底物(50 μl/孔)，避光孵育25 min，加入終止液5 min后測定450 nm處吸光度。hs-CRP、TNF-α、IL-6 及 IL-10 抗體均購自南京凱基生物科技有限公司，配套試劑購自羅氏檢測公司，嚴格按照說明書的要求進行操作。

2結果

2.14組hs-CRP水平變化完全損傷組、不完全損傷組及骨折組的hs-CRP水平在傷后第1天逐漸升高、傷后第3天達到高峰，后逐漸回落；在傷后不同時間比較，hs-CRP水平組間比較結果為完全損傷組>不完全損傷組>骨折組>健康組，且組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

1.2.2排除標準：①不符合上述納入標準的患者；②合并全身系統(tǒng)性疾病(急慢性感染)的患者；③合并風濕、類風濕性疾病，應用免疫抑制劑、消炎鎮(zhèn)痛類藥物的患者；④合并腫瘤、全身其他部位嚴重軟組織損傷、骨折的患者。

表14組hs-CRP水平變化

組別傷后第1天傷后第3天傷后第5天傷后第7天完全損傷組(n=21)16.94±2.7618.29±2.94*13.27±2.65*9.96±1.78*不完全損傷組(n=42)12.68±2.80#13.97±2.73*#8.36±2.28*#6.04±1.40*#骨折組(n=24)4.96±1.94#△5.88±1.75*#△2.93±1.46*#△1.65±1.17*#△健康組(n=30)0.96±0.35#△☆0.96±0.47#△☆0.92±0.38#△☆0.87±0.50#△☆

注：與傷后第1天比較，*P<0.05；與完全損傷組比較，#P<0.05；與不完全損傷組比較，△P<0.05；與骨折組比較，☆P<0.05

2.34組IL-6水平變化完全損傷組、不完全損傷組及骨折組IL-6水平在傷后第1天逐漸升高、傷后第3天達到高峰，后逐漸回落；在傷后不同時間比較，IL-6水平組間比較結果為完全損傷組>不完全損傷組>骨折組>健康組，且組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表24組TNF-α水平變化

組別傷后第1天傷后第3天傷后第5天傷后第7天完全損傷組(n=21)2.09±0.292.28±0.31*1.72±0.35*1.52±0.22*不完全損傷組(n=42)1.68±0.23#1.95±0.27*#1.59±0.25*#1.44±0.24*#骨折組(n=24)1.45±0.20#△1.58±0.19*#△1.40±0.21*#△1.33±0.18*#△健康組(n=30)1.32±0.18#△☆1.34±0.20#△☆1.33±0.19#△1.31±0.20#△

注：與傷后第1天比較，*P<0.05；與完全損傷組比較，#P<0.05；與不完全損傷組比較，△P<0.05；與骨折組比較，☆P<0.05

2.24組TNF-α水平變化完全損傷組、不完全損傷組及骨折組TNF-α水平在傷后第1天逐漸升高、傷后第3天達到高峰，后逐漸回落；在傷后不同時間比較，TNF-α水平組間比較結果為完全損傷組>不完全損傷組>骨折組>健康組，且組間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表34組IL-6水平變化

組別傷后第1天傷后第3天傷后第5天傷后第7天完全損傷組(n=21)0.57±0.120.69±0.11*0.55±0.13*0.37±0.14*不完全損傷組(n=42)0.36±0.14#0.49±0.10*#0.38±0.09*#0.31±0.11*#骨折組(n=24)0.29±0.12*#0.32±0.10*#△0.28±0.08*#△0.24±0.10*#△健康組(n=30)0.24±0.11#△☆0.22±0.12#△☆0.24±0.10#△0.22±0.09#△

注：與傷后第1天比較，*P<0.05；與完全損傷組比較，#P<0.05；與不完全損傷組比較，△P<0.05；與骨折組比較，☆P<0.05

2.44組IL-10水平變化完全損傷組、不完全損傷組及骨折組IL-10水平在傷后第1天逐漸升高、傷后第3天達到高峰，后逐漸回落；在傷后不同時間比較，IL-10水平組間比較結果為完全損傷組>不完全損傷組>骨折組>健康組，且組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表4。

表44組IL-10水平變化

組別傷后第1天傷后第3天傷后第5天傷后第7天完全損傷組(n=21)49.9±5.369.8±8.3*45.2±7.9*33.6±7.0*不完全損傷組(n=42)38.7±6.4#52.8±7.0*#43.7±9.2*#27.6±6.1*#骨折組(n=24)32.3±6.8#△44.9±6.5*#△28.3±7.7*#△26.0±6.4*健康組(n=30)21.4±2.2#△☆22.0±2.4#△☆22.5±2.5#△☆22.7±2.6#△☆

注：與傷后第1天比較，*P<0.05；與完全損傷組比較，#P<0.05；與不完全損傷組比較，△P<0.05；與骨折組比較，☆P<0.05

3討論

急性脊髓損傷相關病情的影響以及轉(zhuǎn)歸主要與兩方面的因素相關[4，5]：(1)急性機械性損傷導致的相關脊髓節(jié)段的橫斷性損傷、出血以及擠壓作用，壓迫相關脊髓灰質(zhì)以及白質(zhì)部分神經(jīng)元，進而導致相關神經(jīng)元水腫、炎癥刺激等病理改變；(2)急性脊髓損傷12 h內(nèi)產(chǎn)生的遲發(fā)性炎性反應，可以通過影響中性粒細胞、單核巨噬細胞、T淋巴以及其所分泌的炎性因子的富集，進而加重局部組織的水腫以及間質(zhì)增生等病理改變[6]。損傷的脊髓神經(jīng)元膠質(zhì)細胞自身分泌的大量炎性因子與局部富集的白血病共同分娩大量細胞因子，通過復雜的炎性因子網(wǎng)絡進而影響神經(jīng)元細胞的功能，并調(diào)控急性脊髓損傷后相關并發(fā)癥的發(fā)生機制。外周血炎性細胞因子hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-10已被證實在顱腦損傷過程中明顯升高，不同細胞因子的上調(diào)均在一定程度上提示了疾病的嚴重程度和不良轉(zhuǎn)歸[7]。但迄今為止對于其在急性脊髓損傷中作用的探討較少，本文通過分析不同急性脊髓損傷程度炎性因子的變化，為臨床上準確判斷病情嚴重程度提供一定依據(jù)。

Hs-CRP是血漿中的一種C-反應蛋白，又稱為高敏C反應蛋白，其在相關炎癥以及腫瘤中的早期升高可以作為診斷以及評估病情的重要依據(jù)。hs-CRP在急性顱腦損傷中可升高40%[8]，筆者發(fā)現(xiàn)在急性脊髓損傷后第1天即可明顯升高，最高可達18 ng/ml，第3天達到高峰，之后逐漸下降。而TNF-α是由單核細胞/巨噬細胞分泌的一種重要的細胞因子,具有雙重的生物學作用。一方面TNF-α是機體免疫防護的重要介質(zhì);另一方面可通過刺激IL-6以及干擾素的分泌，進而加重炎癥損傷[9]。不同組別的TNF-α水平在傷后第1天逐漸升高、在傷后第3天達到高峰，后逐漸回落，這些均提示了hs-CRP以及TNF-α與急性脊髓損傷的病情轉(zhuǎn)歸具有一定關聯(lián)，而脊髓完全損傷組hs-CRP與TNF-α變化較為明顯，明顯高于脊髓部分損傷以及單純骨折組，提示了hs-CRP以及TNF-α對于評估脊髓損傷嚴重程度以及疾病轉(zhuǎn)歸的重要價值[10]。IL-6是重要的炎性反應介質(zhì)，其可參與機體的Ⅰ型過敏反應、缺血再灌注損傷以及遲發(fā)性炎性反應，IL-10又稱白細胞激活蛋白，是最強的中性粒細胞趨化因子之一,單核巨噬細胞、多分葉的中性粒細胞以及分化成熟的漿細胞均可分泌，IL-6以及IL-10可以通過募集下游炎性因子，廣泛參與損傷血管的滲透性改變、加劇損傷組織的細胞膜溶解以及間質(zhì)成分刺激作用[11,12]。研究組IL-6及IL-10在傷后第3天達到高峰，后逐漸回落，兩者均在完全脊髓損傷中明顯升高，提示了臨床上可以通過檢測患者外周血研究組IL-6及IL-1，進而為是否需要手術以及臨床用藥提供參考，具有較為理想的臨床應用價值。

急性脊髓損傷患者外周血炎性細胞因子hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-10明顯升高，不同炎性因子的變化可以作為臨床上反應脊髓損傷程度的參考指標，但相關結論仍需根據(jù)患者病情程度進一步分析。

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(收稿日期：2015-08-18)

【中圖分類號】R 651.21

【文獻標識碼】A

【文章編號】1002-7386(2016)10-1509-03

doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2016.10.019

項目來源：惠州市科技局課題(編號：2014Y259)