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手足口病中醫(yī)證型與血清炎性細(xì)胞因子、T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞相關(guān)性分析

2016-07-06 06:59黃偉李芹
關(guān)鍵詞:百分比證型亞群

黃偉 李芹

摘要:目的 研究手足口病(HFMD)肺脾濕熱證、濕熱郁蒸證、毒熱動(dòng)風(fēng)證與白細(xì)胞介素-6(IL-6)、降鈣素原(PCT)、C反應(yīng)蛋白(CRP)及CD3+、CD4+、CD8+ T細(xì)胞、NK細(xì)胞之間的相關(guān)性。方法 隨機(jī)選取90例HFMD患者,肺脾濕熱證、濕熱郁蒸證、毒熱動(dòng)風(fēng)證各30例,檢測(cè)血清炎性細(xì)胞因子(IL-6、PCT、CRP)、T細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+)、NK細(xì)胞等指標(biāo),分析上述指標(biāo)在各證型間的分布情況。結(jié)果 毒熱動(dòng)風(fēng)證IL-6、PCT、CRP水平明顯高于肺脾濕熱證、濕熱郁蒸證,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);CD3+、CD4+、CD8+、NK細(xì)胞絕對(duì)值毒熱動(dòng)風(fēng)證與肺脾濕熱證組、濕熱郁蒸證組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);CD3+細(xì)胞百分比毒熱動(dòng)風(fēng)證組與肺脾濕熱證組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),與濕熱郁蒸證組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);CD4+細(xì)胞百分比毒熱動(dòng)風(fēng)證組與肺脾濕熱證組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與濕熱郁蒸證組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);CD8+、NK細(xì)胞百分比毒熱動(dòng)風(fēng)證組與肺脾濕熱證組、濕熱郁蒸證組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論 HFMD肺脾濕熱證、濕熱郁蒸證、毒熱動(dòng)風(fēng)證在相關(guān)炎性細(xì)胞因子、促炎標(biāo)志物及T細(xì)胞亞群等方面不僅與發(fā)病有關(guān),并且與病情輕重及預(yù)后密切相關(guān),能夠較為有效地評(píng)估病情及判斷預(yù)后。

關(guān)鍵詞:手足口病;白細(xì)胞介素-6;降鈣素原;C反應(yīng)蛋白;T細(xì)胞亞群

DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2016.07.005

中圖分類號(hào):R259.125 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1005-5304(2016)07-0017-05

Analysis on Correlation Between TCM Syndromes of Hand, Foot and Mouth Disease and Serum Proinflammatory Cytokines, T Cell Subgroup and NK Cells HUANG Wei, LI Qin (Fuzhou Infectious Disease Hospital, Fuzhou 350000, China)

Abstract: Objective To study the correlation between hand, foot and mouth disease (HFMD) in lung-spleen damp-heat syndrome, syndrome of stagnation and steaming due to damp-heat, and syndrome of stirring wind due to toxic-heat with IL-6, PCT, CRP, CD3+, CD4+, CD8+ and NK cells. Methods Ninety patients with HFMD were randomly selected, dividing into lung-spleen damp-heat syndrome, syndrome of stagnation and steaming due to damp-heat, and syndrome of stirring wind due to toxic-heat, 30 cases for each syndrome. IL-6, PCT, CRP, CD3+, CD4+, CD8+ and NK cells were detected, and the distribution of above indicators in the three syndromes were analyzed. Results Levels of IL-6, PCT and CRP in syndrome of stirring wind due to toxic-heat were significantly higher than those in lung-spleen damp-heat syndrome and syndrome of stagnation and steaming due to damp-heat, with statistical significance (P<0.01); There was statistical significance in absolute value counting of CD3+, CD4+, CD8+ and NK cells among the three syndromes (P<0.01); There was statistical significance in the percentage of CD3+ cells in syndrome of stirring wind due to toxic-heat and lung-spleen damp-heat syndrome (P<0.01) and syndrome of stagnation and steaming due to damp-heat (P<0.05); There was statistical significance in the percentage of CD4+ cells

基金項(xiàng)目:國(guó)家科技重大專項(xiàng)-艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治(2012ZX10004301-005);福州市衛(wèi)生系統(tǒng)科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013-S-wt8)

通訊作者:李芹,E-mail:liqing05912006@163.com

syndrome of stirring wind due to toxic-heat and lung-spleen damp-heat syndrome (P<0.05) and syndrome of stagnation and steaming due to damp-heat (P<0.01); There was statistical significance in the percentages of CD8+ and NK cells in the three syndromes (P<0.01). Conclusion Proinflammatory cytokines, proinflammatory markers, and T cell sub-group related to HFMD in lung-spleen damp-heat syndrome, syndrome of stagnation and steaming due to damp-heat, syndrome of stirring wind due to toxic-heat are not only correlative with morbidity, but also with the severity of diseases and prognosis, which can relatively effectively evaluate the state of diseases and judge prognosis.

Key words: hand, foot and mouth disease; IL-6; calcitonin original; C-reactive protein; T cell sub-group

手足口?。℉FMD)是一種常見(jiàn)兒童感染性疾病,約70%是由柯薩奇病毒A 16型(COX A16)和腸道病毒71型(EV71)引起[1-2],主要癥狀為發(fā)熱、手足臀等部位及口腔出現(xiàn)斑丘疹或皰疹[3]?!妒肿憧诓≡\療指南(2010年版)》[4]將該病分為肺脾濕熱證、濕熱郁蒸證、毒熱動(dòng)風(fēng)證、心陽(yáng)衰微肺氣欲脫證4種證型。根據(jù)本院收治患兒特點(diǎn)及病例數(shù)量,患兒大多集中在肺脾濕熱證、濕熱郁蒸證、毒熱動(dòng)風(fēng)證這3個(gè)證型。本研究采集HFMD患者血液樣本,對(duì)白細(xì)胞介素-6(IL-6)、降鈣素原(PCT)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、T細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+)等指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè),分析HFMD不同證型在上述檢測(cè)指標(biāo)之間的差異及相關(guān)性,為中醫(yī)在臨床工作中與實(shí)驗(yàn)室理化指標(biāo)相結(jié)合提供循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究病例均來(lái)自福州市傳染病醫(yī)院感染科門診2014年8月-2015年6月收治的HFMD患者。按隨機(jī)數(shù)字法選取90例,入院即按順序編號(hào),然后按隨機(jī)數(shù)表第一行第一列分配隨機(jī)數(shù),3種證型的隨機(jī)數(shù)為偶數(shù)者納入本研究。肺脾濕熱證共編號(hào)58例,納入30例(男13例,女17例);濕熱郁蒸證共編號(hào)64例,納入30例(男14例,女16例);毒熱動(dòng)風(fēng)證共編號(hào)55例,納入30例(男19例,女11例)。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),相關(guān)檢查項(xiàng)目均獲得患兒監(jiān)護(hù)人知情同意。3組患者年齡、性別、病程差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性,見(jiàn)表1。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

①年齡最小6個(gè)月,最大6歲;②病程在48 h內(nèi);③符合《手足口病診療指南(2010年版)》[4]中肺脾濕熱證、濕熱郁蒸證、毒熱動(dòng)風(fēng)證中醫(yī)臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)。肺脾濕熱證主癥:發(fā)熱,手、足和臀部出現(xiàn)斑丘疹、皰疹,口腔黏膜出現(xiàn)散在皰疹,咽紅、流涎,神情倦怠,舌淡紅或紅,苔膩,脈數(shù),指紋紅紫。濕熱郁蒸證主癥:高熱,疹色不澤,口腔潰瘍,精神萎頓,舌紅或絳、少津,苔黃膩,脈細(xì)數(shù),指紋紫黯。毒熱動(dòng)風(fēng)證主癥:高熱不退,易驚,嘔吐,肌肉瞤動(dòng),或見(jiàn)肢體痿軟,甚則昏矇,舌黯紅或紅絳,苔黃膩或黃燥,脈弦細(xì)數(shù),指紋紫滯;④患兒監(jiān)護(hù)人簽署知情同意書(shū)。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)

①HFMD核酸檢測(cè)未檢出相關(guān)病毒者;②合并其他嚴(yán)重器質(zhì)性疾病、發(fā)育不健全者;③合并其他病毒感染如巨細(xì)胞、EB病毒感染及HIV、水痘、麻疹者。

1.4 觀察指標(biāo)與方法

1.4.1 血清細(xì)胞因子、T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞 患者均于就診當(dāng)日抽取靜脈血3 mL,3000 r/min離心10 min(美國(guó)Beckman GS-15R離心機(jī)),留取血清,無(wú)菌分裝后置于-80 ℃冰箱備用(T細(xì)胞亞群檢測(cè)均于抽血后常溫保存并在4 h內(nèi)檢測(cè))。IL-6、PCT檢測(cè)均應(yīng)用羅氏電化學(xué)發(fā)光法診斷試劑,采用羅氏E601全自動(dòng)免疫分析儀檢測(cè);CRP檢測(cè)使用BodiTech i-CHROMA試劑盒及配套艾可美分析儀。CD3+、CD4+、CD8+、NK細(xì)胞采用美國(guó)Becton Dickinson流式細(xì)胞儀及配套試劑檢測(cè)。均按照相關(guān)說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格操作。

1.4.2 腸道病毒核酸分型 患者均于就診當(dāng)日采集肛拭子標(biāo)本,用中山大學(xué)達(dá)安公司生產(chǎn)的診斷試劑盒,美國(guó)生命科學(xué)公司Step one plus-Real Time PCR儀定量分析。取約2g糞便于離心管中,加入10 mL磷酸鹽緩沖液、2g玻璃珠、1 mL氯仿,振蕩混勻,3500 r/min離心20 min,取上清液140 ?L,提取RNA。反應(yīng)體系為25 ?L:熒光RT-PCR反應(yīng)液20 ?L,DNA聚合酶1 ?L,反轉(zhuǎn)錄酶0.35 ?L,模板RNA 5 ?L,充分混勻,6000 r/min離心10 s。實(shí)時(shí)熒光RT-PCR擴(kuò)增程序:50 ℃反轉(zhuǎn)錄30 min;95 ℃預(yù)變性3 min;95 ℃變性15s,50 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 min,共5個(gè)循環(huán);95 ℃變性10 s,55 ℃退火40 s,采集熒光,共40個(gè)循環(huán)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料用 —x±s表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn),多組間比較采用單因素方差分析,兩兩比較用LSD法。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 中醫(yī)證型與血清促炎因子的相關(guān)性

毒熱動(dòng)風(fēng)證IL-6明顯高于另兩證(P=0.003);毒熱動(dòng)風(fēng)證PCT明顯高于另兩證(P=0.000);毒熱動(dòng)風(fēng)證CRP也明顯高于另兩證(P肺脾濕熱證=0.002,P濕熱郁蒸證=0.037)。肺脾濕熱證與濕熱郁蒸證IL-6、PCT、CRP比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2 中醫(yī)證型與T細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)的相關(guān)性

毒熱動(dòng)風(fēng)證CD3+計(jì)數(shù)與肺脾濕熱證、濕熱郁蒸證間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.005,P=0.006);毒熱動(dòng)風(fēng)證CD4+計(jì)數(shù)與另兩證比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000);毒熱動(dòng)風(fēng)證CD8+計(jì)數(shù)與另兩證比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.005,P=0.000);毒熱動(dòng)風(fēng)證NK細(xì)胞計(jì)數(shù)與另兩證比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。肺脾濕熱證與濕熱郁蒸證CD3+、CD4+、CD8+、NK細(xì)胞計(jì)數(shù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見(jiàn)表3。

2.3 中醫(yī)證型與T細(xì)胞亞群百分比的相關(guān)性

毒熱動(dòng)風(fēng)證CD3+百分比與另兩證比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P肺脾濕熱證=0.012,P濕熱郁蒸證=0.041);毒熱動(dòng)風(fēng)證CD4+百分比與另兩證比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P肺脾濕熱證=0.033,P濕熱郁蒸證=0.001);毒熱動(dòng)風(fēng)證CD8+百分比與另兩證比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P肺脾濕熱證=0.008,P濕熱郁蒸證=0.000);毒熱動(dòng)風(fēng)證NK細(xì)胞百分比與另兩證比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P肺脾濕熱證=0.000,P濕熱郁蒸證=0.000)。肺脾濕熱證與濕熱郁蒸證CD3+、CD4+、CD8+、NK細(xì)胞百分比比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見(jiàn)表4。

2.4 中醫(yī)證型與核酸病毒分型的相關(guān)性分析

經(jīng)核酸病毒分型檢測(cè),肺脾濕熱證中Cox A16型19例、EV71型8例、其他通用型3例;濕熱郁蒸證中Cox A16型21例、EV71型4例、其他通用型5例;毒熱動(dòng)風(fēng)證中Cox A16型21例、EV71型4例、其他通用型5例??梢?jiàn),毒熱動(dòng)風(fēng)證中EV71型病毒感染明顯高于另兩證,肺脾濕熱證、濕熱郁蒸證均以感染Cox A16為主,而毒熱動(dòng)風(fēng)證以感染EV71型病毒為主,組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=52.74,P=0.002),結(jié)果見(jiàn)表5。

3 討論

中醫(yī)無(wú)HFMD相關(guān)病名,現(xiàn)代中醫(yī)家多將其歸為“溫病”范疇。該病多由學(xué)齡期小兒感染,該時(shí)期小兒臟氣未充,正氣不足,病邪易于乘虛而入,損傷正氣,主要證素為濕和熱,感染疫毒癘氣之邪后導(dǎo)致氣機(jī)逆亂和氣虛,表現(xiàn)為發(fā)熱、精神差等,熱毒夾濕從皮膚口鼻而入,濕熱郁于肌表,則見(jiàn)手足丘皰疹;內(nèi)傳心脾,心脾積熱,濕熱郁蒸,阻滯氣機(jī),表現(xiàn)為咳嗽、嘔吐、納差、腹痛?;馃嶂耙讉騽?dòng)風(fēng)耗氣,擾動(dòng)肝風(fēng),出現(xiàn)肢體抖動(dòng)、煩躁、驚跳等神經(jīng)系統(tǒng)癥狀[5]。《素問(wèn)·評(píng)熱病論篇》有“邪之所湊,其氣必虛”,加之為小兒稚陰稚陽(yáng)之體,素體內(nèi)熱偏勝,脾胃積熱,脾常不足,且多嗜食肥膩甘甜之品,易脾胃積熱,脾失健運(yùn),濕熱內(nèi)蘊(yùn),外加感受邪毒,內(nèi)應(yīng)于脾而發(fā)病,濕熱相搏[6],正氣抗邪外出,毒隨氣泄,外透肌膚,則見(jiàn)皰疹,甚者濕熱內(nèi)浸,波及氣營(yíng),則出現(xiàn)氣營(yíng)兩燔證,表現(xiàn)為高熱不退、皰疹密集等癥。臨床根據(jù)HFMD辨證分型為肺脾濕熱證、濕熱郁蒸證2個(gè)普通證型及毒熱動(dòng)風(fēng)證1個(gè)重癥證型,3種證型在IL-6、PCT、CRP、CD3+、CD4+、CD8+、NK細(xì)胞等方面均存在差異。IL-6是機(jī)體內(nèi)的促炎因子,在HFMD發(fā)病過(guò)程中與機(jī)體免疫防疫、炎性損傷等病理生理過(guò)程有關(guān)[7],HFMD由腸道病毒感染引起,導(dǎo)致一系列免疫調(diào)節(jié)損傷及炎癥反應(yīng),而促炎細(xì)胞因子在該過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[8]。本研究中,肺脾濕熱證、濕熱郁蒸證的IL-6水平明顯低于毒熱動(dòng)風(fēng)證,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明毒熱動(dòng)風(fēng)證較另2個(gè)較輕證型IL-6水平表達(dá)異常,提示IL-6可能與HFMD病情密切相關(guān)。PCT是降鈣素的前體,正常情況時(shí)主要在甲狀腺濾泡旁細(xì)胞內(nèi)合成,一般在嚴(yán)重感染及創(chuàng)傷等情況下明顯升高,同樣也參與炎癥反應(yīng),在臨床中多用于監(jiān)測(cè)感染輕重程度[9]。PCT具有早期、特異、敏感的特性,優(yōu)于傳統(tǒng)的炎性標(biāo)志物,且對(duì)病情的早期評(píng)估、預(yù)后評(píng)價(jià)、療效觀察等具有一定意義[10]。3組患兒中,肺脾濕熱證、濕熱郁蒸證的PCT水平明顯低于毒熱動(dòng)風(fēng)證,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明毒熱動(dòng)風(fēng)證較其他2個(gè)較輕證型的PCT水平表達(dá)異常,提示PCT的表達(dá)可能與HFMD病情密切相關(guān),在一定程度上能反映疾病的嚴(yán)重程度。CRP是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白,主要由IL-6刺激肝臟和上皮細(xì)胞合成和分泌,也是炎癥反應(yīng)的非特異性指標(biāo),在HFMD早期診斷中有一定價(jià)值[11]。本研究中,肺脾濕熱證、濕熱郁蒸證的CRP水平明顯低于毒熱動(dòng)風(fēng)證,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明CRP的高低對(duì)疾病的嚴(yán)重程度評(píng)估有一定意義。T淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫反應(yīng)細(xì)胞,也是免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞,能起到調(diào)節(jié)機(jī)體正常免疫功能的作用,正常情況下CD3+、CD4+、CD8+計(jì)數(shù)及百分比均維持動(dòng)態(tài)平衡,以維持機(jī)體免疫功能穩(wěn)定[12]。在本研究中,毒熱動(dòng)風(fēng)證CD3+、CD4+、CD8+計(jì)數(shù)及百分比均低于肺脾濕熱證、濕熱郁蒸證,HFMD時(shí)感染腸道病毒,導(dǎo)致機(jī)體免疫機(jī)制失調(diào),T淋巴細(xì)胞亞群分布異常[13],B淋巴細(xì)胞表達(dá)和分泌的血清免疫球蛋白受T淋巴細(xì)胞調(diào)節(jié),當(dāng)CD4+細(xì)胞減少或功能低下時(shí),其產(chǎn)生淋巴因子協(xié)助B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力也相對(duì)減弱[14]。機(jī)體免疫力下降既是HFMD感染的前提,也是病情加重、影響預(yù)后的重要因素。毒熱動(dòng)風(fēng)證屬重證HFMD,相較于其他2個(gè)普通證型,細(xì)胞免疫功能明顯低下,在疾病發(fā)展過(guò)程中檢測(cè)T細(xì)胞亞群水平,既能綜合評(píng)估病情,又能評(píng)估預(yù)后及轉(zhuǎn)歸。NK細(xì)胞是人體內(nèi)固有免疫中的一種重要的效應(yīng)細(xì)胞,它可以繞過(guò)T細(xì)胞受體(TCR)/CD3識(shí)別途徑,以主要組織相容性復(fù)合物(MHC)非限制方式迅速識(shí)別和殺滅入侵的病原菌,同時(shí)分泌大量干擾素-γ等細(xì)胞因子,上調(diào)吞噬細(xì)胞的吞噬功能,在抗感染、抗腫瘤等方面發(fā)揮突出的作用,NK細(xì)胞的升高能在HFMD轉(zhuǎn)歸及預(yù)后方面有積極作用[15]。在本研究中,毒熱動(dòng)風(fēng)證的NK細(xì)胞計(jì)數(shù)及百分比均高于另兩證,提示在抗感染的過(guò)程中,重癥患者的NK細(xì)胞表達(dá)水平更高,可能針對(duì)病毒感染的機(jī)體免疫反應(yīng)更強(qiáng)烈,也在一定程度上反映了疾病的輕重程度,本研究中毒熱動(dòng)風(fēng)證患者預(yù)后均良好,也提示在判別預(yù)后方面NK細(xì)胞可能有一定作用。目前流行的腸道病毒以Cox A16和EV71型居多,普通型以前者居多,重癥仍以感染EV71型病毒為主。

本研究在HFMD肺脾濕熱證、濕熱郁蒸證、毒熱動(dòng)風(fēng)證3個(gè)證型中發(fā)現(xiàn)相關(guān)的促炎細(xì)胞因子、促炎標(biāo)志物及T細(xì)胞亞群等方面不僅與發(fā)病有關(guān),并且與病情輕重及預(yù)后密切相關(guān)。在臨床診治HFMD工作中,綜合檢測(cè)上述指標(biāo)能夠較為有效的評(píng)估病情及判斷預(yù)后。在HFMD診療中,以上述檢測(cè)指標(biāo)結(jié)合中醫(yī)臨床辨證分型,能夠更好地指導(dǎo)中醫(yī)臨床,為中醫(yī)臨床診斷客觀化及量化提供重要依據(jù)。

參考文獻(xiàn):

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