西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院中心實驗室(西安 710038)

嚴(yán)喜章　常　盼　于　軍▲　鐵　茹　張學(xué)策　陳建婷△

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糞鈣衛(wèi)蛋白和乳鐵蛋白檢測在診斷潰瘍性結(jié)腸炎中的臨床意義*

西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院中心實驗室(西安 710038)

嚴(yán)喜章常盼于軍▲鐵茹張學(xué)策陳建婷△

摘要目的：研究糞鈣衛(wèi)蛋白和乳鐵蛋白在診斷潰瘍性結(jié)腸炎中的表達(dá)水平及臨床診斷價值。 方法:收集潰瘍性結(jié)腸炎患者63例和健康對照43例，采用ELISA方法測定糞便中糞鈣衛(wèi)蛋白和乳鐵蛋白，并進行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果： 潰瘍性結(jié)腸炎患者鈣衛(wèi)蛋白含量明顯高于健康對照組(P<0.01)，且隨活動期級別增高，糞鈣衛(wèi)蛋白的水平逐漸增高(P<0.05)。潰瘍性結(jié)腸炎患者乳鐵蛋白含量明顯高于健康對照組(P<0.01)，隨活動期級別增高，糞鈣衛(wèi)蛋白的水平逐漸增高(P<0.05)。乳鐵蛋白(r=0.71，P<0.01)和鈣衛(wèi)蛋白(r=0.79，P<0.01)含量均與腸鏡分級結(jié)果顯著相關(guān)。 結(jié)論：糞便中鈣衛(wèi)蛋白和乳鐵蛋白在評價潰瘍性結(jié)腸炎具有一定的臨床意義。

主題詞@鈣衛(wèi)蛋白乳鐵蛋白/診斷應(yīng)用結(jié)腸炎，潰瘍性/診斷

潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis，UC)是炎癥性腸病的主要類型之一，主要與機體免疫應(yīng)答、腸粘膜免疫識別失調(diào)相關(guān)[1]。目前臨床上主要通過結(jié)腸鏡和內(nèi)鏡下活組織檢查來判斷UC，屬于侵入性檢查，風(fēng)險大及患者痛苦較多。因此尋找一種非侵入性檢測手段評價UC已成為國內(nèi)外學(xué)者關(guān)注的焦點之一。國內(nèi)外有研究顯示糞便炎性標(biāo)志物在反應(yīng)腸道局部的炎癥程度上具敏感性和特異性[2-3]。

鈣衛(wèi)蛋白(Calprotectin)和乳鐵蛋白(Lactoferrin)主要來源于中性粒細(xì)胞，有少部分來源于單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞[4-5]。是近年來新發(fā)現(xiàn)的急性炎癥標(biāo)志物，因具有耐熱性和抗蛋白酶活性，同時在腸腔和外界環(huán)境中可長期保持相對穩(wěn)定[6]，在炎癥性腸道疾病中引起了越來越多學(xué)者的關(guān)注。本研究定量檢測UC患者不同病變階段患者糞便中鈣衛(wèi)蛋白和乳鐵蛋白含量，并與腸鏡檢查結(jié)果進行相關(guān)性分析，旨在研究糞鈣衛(wèi)蛋白和乳鐵蛋白在UC的臨床診斷價值。

資料和方法

1一般資料2013年4月1日至2014 年11月30日在西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院內(nèi)鏡中心接受腸鏡檢查的UC患者63例和健康對照43例。UC患者依據(jù)內(nèi)鏡及病理分級診斷為緩解期22例，活動期41例，其中I級12例，Ⅱ級18例，Ⅲ級11例。留取患者腸鏡檢查1周內(nèi)的糞便，2 h內(nèi)送至醫(yī)院，密封后置于- 20℃保存，以備鈣衛(wèi)蛋白和乳鐵蛋白的檢測。所有入選者行腸鏡檢查，腸鏡檢查時均取活檢，病理診斷采用Truelove - Wiffs標(biāo)準(zhǔn)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重心、肝、腎等重要臟器和血液、系統(tǒng)性疾病、包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等；近期腸道感染病史或其他部位感染病史；近1個月內(nèi)曾應(yīng)用過糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑；2周內(nèi)有使用非甾體抗炎藥及乙醇成癮者。

2儀器和試劑酶標(biāo)儀為美國Bio-Rad 550型。檢測糞鈣衛(wèi)蛋白和乳鐵蛋白ELISA 試劑盒購自芬蘭Hycult公司。

3檢驗方法將留存糞便在室溫解凍后，挑取50～150 mg，準(zhǔn)確稱重。按照糞便質(zhì)量/容積( mg/ml) = 1∶50的比例加入萃取液, 充分震蕩30 min，混勻后取1 勻漿高速離心(10 000 r /10 min)，取上清液。酶聯(lián)免疫反應(yīng)嚴(yán)格按照ELISA檢測試劑盒說明書進行，將蛋白提取液以1∶10比例稀釋，樣本均設(shè)復(fù)孔，行常規(guī)ELISA操作程序( 雙抗體夾心法)。將酶標(biāo)儀設(shè)置為450 nm進行測定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度和濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定范圍為10～600 g/g，若>600 g/g，再取糞便抽提上清液，進一步擴大稀釋比例，稀釋后行常規(guī)ELISA流程操作。

4統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS17．0統(tǒng)計學(xué)軟件，以中位數(shù)表示，多組間比較采用Kruskal-Wallis檢驗，相關(guān)分析采用Spearman秩相關(guān)。P< 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P< 0.01為差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1糞鈣衛(wèi)蛋白與UC活動性關(guān)系緩解期鈣衛(wèi)蛋白含量與健康對照組比較，無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；UC活動期糞鈣衛(wèi)蛋白含量明顯高于健康對照組和緩解期(P<0.01)；UC患者不同分期之間兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且分期級別越高，鈣衛(wèi)蛋白含量越高，見表1。相關(guān)性分析結(jié)果表明，鈣衛(wèi)蛋白與腸鏡分級顯著相關(guān)(r=0.79，P<0.01)。

表1　不同分期UC患者鈣衛(wèi)蛋白含量與健康對照比較

注：與健康對照組相比，*P<0.01；與緩解期相比，#P<0.01;與活動Ⅰ期比較,△P<0.05;與活動Ⅱ期比較,▽P<0.01

2糞便乳鐵蛋白與UC活動性關(guān)系緩解期UC患者糞乳鐵蛋白含量與健康對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；UC活動期糞乳鐵蛋白含量明顯高于健康對照組及緩解期(P<0.01)，UC患者不同分期之間乳鐵蛋白含量兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且分期級別越高，乳鐵蛋白含量越高，見表2。相關(guān)性分析結(jié)果表明，乳鐵蛋白與腸鏡分級顯著相關(guān)(r=0.71，P<0.01)。

表2　不同分期UC患者乳鐵蛋白含量與健康對照比較

注：與健康對照組相比，*P<0.01；與緩解期相比，#P<0.01;與活動Ⅰ期比較,△P<0.05與活動Ⅱ期比較,▽P<0.01

討論

UC是一種病因和發(fā)病機制尚未完全明確的炎癥性腸病，為腸道慢性非特異性疾病，臨床癥狀主要為腹瀉伴黏液血便，不同程度的腹痛，腹瀉，多呈反復(fù)發(fā)作，可癌變[1,7]。糞便標(biāo)志物的檢查與結(jié)腸鏡相比，方便、廉價、更容易被患者接受，而且有利于進行實時監(jiān)控，可連續(xù)的反映腸道局部炎癥的變化情況。

有研究者對經(jīng)過結(jié)腸鏡檢查并懷凝有腸道炎癥的患者進行研究，發(fā)現(xiàn)在診斷炎癥方面，糞鈣衛(wèi)蛋白相比結(jié)腸鏡檢查具有更高的敏感性[8]，新近的研究報道稱，糞乳鐵蛋白是腸道炎癥可靠的生物標(biāo)志物之一[9]，可見，糞鈣衛(wèi)蛋白和乳鐵蛋白與炎癥性腸道疾病的發(fā)生密切相關(guān)。

本實驗通過ELISA檢測發(fā)現(xiàn)UC患者活動期糞便中鈣衛(wèi)蛋白和乳鐵蛋白含量增高。說明鈣衛(wèi)蛋白和乳鐵蛋白含量增加是UC患者腸道發(fā)生病理改變之一。可見，糞鈣衛(wèi)蛋白聯(lián)合乳鐵蛋白檢測，在一定程度上有利于醫(yī)生對UC進行初篩，減輕患者痛苦、降低診療費用。由于UC病變部位有大量炎性細(xì)胞如中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞，其存在明顯高于非炎癥部位和健康對照者，因此測定中性粒細(xì)胞來源的鈣衛(wèi)蛋白和乳鐵蛋白有望成為反應(yīng)腸道炎癥的可靠標(biāo)志物。另一方面，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)UC患者糞便中鈣衛(wèi)蛋白和乳鐵蛋白含量與活動期疾病分級相關(guān)，提示炎性細(xì)胞可能通過鈣衛(wèi)蛋白和乳鐵蛋白調(diào)節(jié)內(nèi)臟敏感性參與UC的發(fā)生。

綜上所述，鈣衛(wèi)蛋白和乳鐵蛋白含量的檢測為臨床診斷UC提供了一種有價值且具良好發(fā)展前景的方法，同時對UC活動性的診斷、治療、預(yù)后判斷可起到指導(dǎo)作用。

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(收稿:2015-08-24)

通訊作者：▲西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院中心實驗室

【中圖分類號】R574.1

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.07.63

Clinical significance of fecal calprotectin and lactoferrin in patients with ulcerative colitis

Central Laboratory, Secomd Affiliated Hospital of Xi’an Medical College (Xi’an 710038)

Yan XizhangChang PanYu Junet al

ABSTRACTObjective: To evaluate the expression and clinical diagnostic value of fecal calprotection and lactoferrin in patients with ulcerative colitis. Methods: 63 patients with ulcerative colitis and 43 healthy controls were enrolled from our hospital. The concentrations of calprotectin and lactoferrin in fecal was measured by ELISA assay and analyzed statistically.Results:The expression of fecal calprotection in ulcerative colitis patients was higher than that in healthy controls (P<0.01), with the increase of active grade of ulcerative colitis，the level of fecal calprotection gradually increased (P<0.05). The protein of lactoferrin was increased in ulcerative colitis patients (P<0.01), with the increase of active grade of ulcerative colitis，the level of fecal lactoferrin gradually increased (P<0.05). Levels of fecal lactoferrin (r=0.71，P<0.01) and calprotection (r=0.79，P<0.01) in active grade group were significantly related to histological grade under colonoscopy.Conclusion:Fecal calprotection and lactoferrin helped to evaluate the ulcerative colitis.

KEY WORDS@Calprotectin lactoferrinLactoferrin/diagnostic useColitis,ulcerative/diagnosis

*陜西省教育廳自然科學(xué)基金資助項目(12JK0776)

△西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院消化內(nèi)科