張錦炳廖豐蘊* 張 艷（ 廣東省韶關市中醫(yī)院，廣東 韶關 506； 廣州中醫(yī)藥大學中藥學院，廣東 廣州 50006）

?

蛇床子素凝膠劑的處方優(yōu)選研究

張錦炳1廖豐蘊2* 張 艷2
（1 廣東省韶關市中醫(yī)院，廣東 韶關 512026；2 廣州中醫(yī)藥大學中藥學院，廣東 廣州 510006）

【摘要】目的 優(yōu)化蛇床子素凝膠劑的處方。方法 采用Franz擴散池，以離體大鼠腹部皮膚為透皮屏障，用高效液相法測定接受液中蛇床子素的含量，考察不同濃度卡波姆、不同促滲劑單用及合用對經皮滲透的影響，以透皮速率Jss為指標優(yōu)化蛇床子素凝膠劑處方，并對蛇床子素凝膠劑物理性質進行表征。結果 0.5%卡波姆的透皮速率較高；幾種不同的促滲劑對蛇床子素凝膠劑透皮吸收具有促進作用，促滲劑單用考察中，氮酮：3%＞5%＞1%，油酸：5%＞1%＞10%，冰片：3%＞5%＞1%，合用考察中：5%異丙醇+3%冰片＞5%，2%異丙醇+3%氮酮＞3%氮酮+5%油酸。結論 5%異丙醇與3%冰片合用后，促滲效果較二者單用表現明顯的協(xié)同作用，為蛇床子素經皮給藥制劑處方設計提供依據。

【關鍵詞】蛇床子素；凝膠劑；處方優(yōu)選

蛇床子素是從中藥蛇床子藥材中提取分離到的香豆素類化合物。藥理研究表明，蛇床子素具有抗骨質疏松癥、抗菌、殺蟲、抗高血壓、抗炎鎮(zhèn)痛等功效［1］。目前臨床多用蛇床子及其復方制劑治療婦科炎癥、足癬及銀屑病等疾病，生物利用度較低［2］。中藥凝膠劑是一種新型的外用制劑，適用于皮膚、黏膜及腔道，既可避免口服給藥胃腸道內的酶、酸的影響，又可減輕不良反應，符合中醫(yī)的“內病外治”的理念，具有使用方便、患者依從性和生物相容性好等多種優(yōu)點［3］。本研究透皮速率Jss為指標，考察不同用量卡波姆，以及不同種類促滲劑對蛇床子素凝膠劑透皮吸收的影響，優(yōu)選最佳的凝膠劑處方。

1 儀器與材料

蛇床子素標準品（批號110822-201308，中國藥品生物制品檢定所）；蛇床子素原料藥（南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司，純度98%）；無水乙醇（天津市致遠化學試劑有限公司）；卡波姆940（廣州全奧化工產品有限公司）；乙腈（迪馬公司，色譜純）；純凈水（華潤怡寶飲料有限公司）。

SD大鼠，雄性，體質量（220±20）g，購于廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心，實驗動物生產許可證號：SCXK（粵）2013-0020。Waters高效液相色譜儀，515泵（Waters，美國）；2487紫外檢測器，N3000色譜工作站；TK-12D型透皮擴散試驗儀（上海鍇凱科技貿易有限公司）；AUW120D電子分析天平（日本島津）。

2 方法與結果

2.1 樣品的制備：稱取卡波姆加適量水溶脹充分溶脹，再取3%蛇床子素、10%甘油、20%無水乙醇（w/w）、按比例加入不同種類的促滲劑，超聲溶解后，加入上述溶脹后的卡波姆中，攪拌均勻后滴加3～4滴三乙醇胺，攪拌均勻，即得蛇床子素凝膠劑。

2.2 標準品溶液的制備：精密稱定蛇床子素對照品0.02502 g，用甲醇定容至25 mL，即為1 mg/mL的對照品儲備液。

2.3 蛇床子素含量測定方法

2.3.1 色譜條件。色譜柱：Hypersil ODS2（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（80∶20；檢測波長：322 nm；流速為1.0 mL/min；柱溫為室溫；進樣量為10 μL。

2.3.2 線性范圍考察：取上述1 mg/mL蛇床子素儲備液用甲醇稀釋成濃度分別為2、20、80、120、160、200、400、800 μg/mL的蛇床子素標準品溶液，按色譜條件進樣測定峰面積，以峰面積（A）對蛇床子素標準品溶液濃度（C）進行線性回歸，得回歸方程A=34639C+43426，R2=0.999，結果表明：蛇床子素在2～800 μg/mL濃度范圍內呈良好線性。

2.3.3 精密度試驗：用120 μg/mL蛇床子素對照品溶液重復進樣測定6次，計算峰面積RSD為0.28%，表明該儀器的精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗：取同一份透皮接收液樣品，分別于2、4、6、8、10、12、18、24 h測定其蛇床子素含量，計算RSD為1.17%，表明蛇床子素在24 h內穩(wěn)定性良好。

2.3.5 重復性試驗：取相同取樣點的透皮接收液6份，按上述色譜條件樣分析測定蛇床子素濃度RSD為2.11%，表明本方法重復性良好。

2.3.6 回收率試驗：采用空白加樣法，取空白接收液9份，每份1 mL，分別加入0.2、0.4、0.6 mL，80 μg/mL蛇床子素對照品溶液，用30%乙醇生理鹽水定容至2 mL制成低、中、高濃度分別為8、16、24 μg/mL的系列溶液，每個濃度3份，分別進樣測定，計算回收率，其中低中高濃度的平均回收率分別99.50%、100.14%、100.21%，RSD分別為1.11%、0.22%、0.18%。

2.4 體外透皮實驗

2.4.1 離體皮膚的制備：將SD大鼠麻醉后，剪去腹部皮毛，6%硫化鈉脫毛，24 h后觀察，選取皮膚無損傷大鼠頸椎脫臼法處死，剝取腹部皮膚后將其角質層朝下平鋪在潔凈的玻璃板上，小心用手術刀片刮除皮膚的脂肪層與結締組織，用生理鹽水沖洗，置于-20 ℃冰箱保存，備用。

2.4.2 透皮實驗方法：參考文獻［4］中方法，取離體皮膚解凍后用生理鹽水洗凈，濾紙吸干其表面水分，角質層朝上固定于擴散池的供給池和接收池之間，接收池內放置磁力攪拌子，并注入8 mL 30%乙醇生理鹽水作為接收液。然后在供給池離體皮膚表面均勻涂抹1 g蛇床子凝膠（無促滲劑）或分別含促滲劑蛇床子素凝膠劑，控制水浴溫度（32 ±0.5） ℃，轉速200 rpm，分別于1、2、4、6、8、10、12 h從接收池取樣，每次取樣1 mL，并立即補充等體積同溫的空白接收液，樣品液過0.22 μm微孔濾膜，按2.3.1項下色譜條件測定各樣品中蛇床子素含量，數據處理參考文獻［5］中方法：Qt=（VCn+Σcivi）/A（i=1，2…n-1），以其透皮速率（Jss）和增滲倍數（ER）為指標，考察不同處方對凝膠中蛇床子素的透皮吸收特性的影響。（其中Jss為Q-t方程斜率；ER=Jss/J0，公式中Qn為n時間藥物的累計透過量（μg/cm2），Cn 為n時間以前濃度測定值（μg/mL），V為接收液總體積（mL），Vi每次取樣體積（mL）Jss為透皮速率常數［μg/（cm·h）］，J0未加促滲劑的透皮速率常數［μg/（cm·h）］，A為滲透面積（3.14 cm2）。

2.5 卡波姆用量的考察：按2.1凝膠制備方法，分別制備含0.5%、1.0%、1.5%卡波姆凝膠劑，所制備的凝膠劑均成型性好，利于涂布。進行體外透皮實驗，并按2.3.1色譜方法測定各接收液中蛇床子素濃度，計算蛇床子素累積透過量和透皮速率，結果見圖1。

圖1 卡波姆用量對藥物透皮特性的影響

2.6 促滲劑單用考察：按2.1方法制備樣品，分別考察加入促滲劑氮酮（1%、3%、5%）、油酸（1%、5%、10%）和冰片（1%、3%、5%）對蛇床子素凝膠劑透皮特性的影響，結果見表1。

表1 促滲劑單用對藥物透皮特性的影響

2.7 促滲劑合用考察：根據促滲劑單用考察的結果，選擇3%氮酮、5%油酸和3%冰片進行促滲劑合用對蛇床子素凝膠劑的促滲效果影響。分別制備含5%異丙醇+3%冰片、5%1，2-丙二醇+3%氮酮和3%氮酮+5%油酸的凝膠劑，進行透皮試驗。結果表明三者促滲效果均明顯，5%異丙醇+3%冰片、5%1，2-丙二醇+3%氮酮表現明顯協(xié)同作用，3%氮酮+5%油酸不表現協(xié)同作用，結果見表2、圖2。

表2 促滲劑合用

圖2 促滲劑合用的藥物透皮特性

3 結果與討論

3.1 流動相的選擇：參考文獻［6］選擇流動相為甲醇-水（80∶20）進行實驗，結果發(fā)現蛇床子素色譜峰拖尾，采用甲醇換成乙腈后，峰型有很大改善，確定乙腈-水（80∶20）為流動相。

3.2 卡波姆用量的選擇：實驗考察了0.5%、1.0%、1.5%卡波姆用量，結果表明，隨著卡波姆用量的增大，透皮速率下降，可能原因為黏度增大導致凝膠劑透皮速率降低。實驗選擇卡波姆用量為0.5%。

3.3 促滲劑考察：氮酮、油酸、冰片單用均表現出良好的促滲效果，但在經皮吸收研究中，很多單一的促滲劑都難以達到理想的促滲效果，因此多選擇兩種或多種促滲劑聯(lián)用［7-8］。但結果顯示氮酮與油酸合用后促滲效果較二者單用未體現出明顯優(yōu)勢，可能是由于油酸與氮酮合用后凝膠劑的黏度增加，抑制了皮膚的水合作用。在經皮給藥制劑中，丙二醇、異丙醇等醇類促滲劑常作為溶媒或載體；通過促進藥物和其他促滲劑的溶解，達到增加藥物的滲透的目的［9］。

參考文獻

［1］ 賴瀅瀅，王巖.星點設計-效應面法進行蛇床子素脂質體處方優(yōu)化的研究［J］.中國新藥雜志，2015，24（6）：708-712.

［2］ 王永輝，房樹標，高麗，等.蛇床子素微乳的制備及其理化性質研究［J］.世界中西醫(yī)結合雜志，2014，9（3）：257-259.

［3］ 賴寶林，王利勝.中藥凝膠劑的研究進展［J］.中藥新藥與臨床藥理，2010，21（2）：211-213.

［4］ 龐幗敏，葉秀波.不同促滲劑對復方蛇床子凝膠的透皮吸收特性的研究［J］.中國醫(yī)藥導報，2013，10（22）：16-18.

［5］ 周開，岑銳標.不同促滲劑對蛇床子軟膏透皮吸收特性的影響［J］.中國藥業(yè)，2013，22（14）：34-35.

［6］ 王利勝，占建坤.高效液相色譜法測定跌打活絡微乳中蛇床子素的含量［J］.時珍國醫(yī)國藥，2006，38（9）：683-685.

［7］ Samir M.Synergistic effect of enhancers for transdermal drug delivery［J］.Pharm Res，2000，17（11）：1354-1359.

［8］ Finnin BC，Morgan TM. Transdermal penetration enhancers：applica tions，limitations，and potential［J］.J Pharm Sci，1999，88（10）：955-959.

［9］ 黎綾，何世英.萜類促滲劑對鹽酸普萘洛爾凝膠體外經皮滲透的影響［J］.中國藥學雜志，2015，50（1）：63-67.

中圖分類號：R283.6

文獻標識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）16-0024-02

*通訊作者

Study on Optimizing Prescription of Osthole Hydrogels

ZHANG Jin-bing1， LIAO Feng-yun2*， ZHANG Yan2
（1 Shaoguan Hospital of Traditional Chinese Medicine， Shaoguan 512026， China； 2 School of Chinese Material Medical， Guangzhou University of Chinese Medicine， Guangzhou 510006， China）

［Abstract］Objective Optimization of Osthole hydrogels. Methods Osthole gels： using Franz diffusion cell from rat abdominal skin as transdermal barrier，accepted by the content was determined by HPLC， effects of different concentrations of carbomer， different penetration enhancers and combined effects on percutaneous penetration， transdermal rate Jss study investigated as an index to Optimized the hydrogels prescription. Results 0.5% carbomer performed higher penetration rate； several different penetration enhancers can promote percutaneous absorption of osthole hydrogels. The Investigation of different penetration enhancers， Azone： 3%＞5%＞1 oleic acid： 5%＞1%＞10%， borneol： 3%＞5%＞1%， combined expedition： 5% isopropanol+3% borneol＞5%， 2% isopropyl alcohol+3% Azone＞3% Azone+5% oleic acid. Conclusion 5% isopropyl alcohol and 3% borneol combination， penetration was better than the two alone show significant synergies， provide the basis for osthole transdermal preparation prescription design.

［Key words］Osthole； Hydrogels； Optimizing prescription