何雪冰李作孝*熊 軍張 昊楊思進(jìn)（ 西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，四川 瀘州 646000； 西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，四川 瀘州 646000）

高效液相色譜法測定醒神通竅膠囊中遠(yuǎn)志的含量

何雪冰1李作孝1*熊 軍1張 昊1楊思進(jìn)2
（1 西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，四川 瀘州 646000；2 西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，四川 瀘州 646000）

目的 建立醒神通竅膠囊中遠(yuǎn)志的測定方法。方法 醒神通竅膠囊用70%乙醇作為溶劑超聲提取，采用高效液相色譜法，色譜柱為phenomenex Proidigy柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇-0.4%磷酸（90∶10）流動相；檢測波長為210 nm；柱溫：30 ℃。結(jié)果 遠(yuǎn)志質(zhì)量濃度在22～220 μg/mL范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程Y=0.26940.2676，R2=0.9995（n=7），平均回收率為95.44%，RSD=1.18%。結(jié)論 該方法操作簡便、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，能夠?qū)h(yuǎn)志進(jìn)行含量測定，為提高醒神通竅膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供了一個有效的方法。

高效液相色譜法；醒神通竅膠囊；遠(yuǎn)志；含量測定

［Key words］HPLC； Xingshen Tongqiao； Polygala tenuifolia willd； Content determination

醒神通竅膠囊是正在研究的一種新藥，由川穹、女貞子、遠(yuǎn)志等組方，方中的遠(yuǎn)志為主要藥物之一，研究表明遠(yuǎn)志提取物及遠(yuǎn)志中的主要化學(xué)成分皂苷類和糖酯類化合物均有抗癡呆和腦保護(hù)活性［1］，遠(yuǎn)志提取物有助于修復(fù)因腦內(nèi)膽堿能系統(tǒng)功能障礙引起的記憶缺陷，其對短期記憶的改善有助于修復(fù)東莨菪堿誘導(dǎo)的記憶缺陷［2］。遠(yuǎn)志提取物BT-11不僅能夠提高老年人的認(rèn)知能力［3］，還能提高老年人的記憶力［4］，對于血管性癡呆極為有益［5-6］。臨床上對血管性癡呆有良好的治療效果，為控制醒神通竅膠囊的質(zhì)量，參照遠(yuǎn)志含量測定的相關(guān)文獻(xiàn)［7-9］，對醒神通竅膠囊中的遠(yuǎn)志進(jìn)行了含量測定的研究，經(jīng)過方法學(xué)的系統(tǒng)考察和3批樣品含量的測定，建立了醒神通竅膠囊中測定遠(yuǎn)志含量的高效液相色譜法。報道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（DIONEX U-3000型），甲醇（色譜純，上海國藥集團(tuán)化學(xué)公司），其他所用試劑均為分析純。醒神通竅膠囊（四川醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，批號為150828、150709、141203）遠(yuǎn)志對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為111572-200702，純度為98.7%），供含量測定用。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：色譜柱：phenomenex Proidigy，ODS3 100A（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相∶甲醇-0.4%磷酸（90∶10）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：210 nm；柱溫：30 ℃，進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備：精密稱取在干燥皿中干燥了24 h的遠(yuǎn)志皂苷元對照品4.46 mg，置于20 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即配成220.1010 μg/mL的標(biāo)對照品貯備液。

2.2.2 供試品溶液的制備：取醒神通竅膠囊藥粉2.3646 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇10 mL，超聲提取30 min，取出，放冷，提取過濾液，精密移取2 mL濾液，于燒瓶中蒸干，蒸干后殘渣加入10%鹽酸溶液，沸水浴回流2 h，取出放冷、過濾，沉淀水洗至中性后用甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻及得供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備：按處方比例取不含遠(yuǎn)志的其他藥材，制成缺失遠(yuǎn)志的陰性對照品，按供試品溶液制備方法制得陰性對照溶液。2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 陰性干擾試驗(yàn)：取供試品溶液、對照品溶液及陰性對照品溶液，按擬訂的色譜條件測定。供試品溶液與對照品溶液色譜圖中具有相同保留時間的色譜峰，而陰性無干擾，見圖1。

A B C圖1 高效液相色譜圖A.對照品溶液；B.陰性對照品溶液；C.供試品溶液

2.3.2 線性關(guān)系考察：分別精密取對照貯備液適量，配制成2 2.0 1 0 1 μg/mL、44.0202 μg/mL、88.0404 μg/mL、110.0505 μg/mL、132.0606 μg/mL、176.0808 μg/mL、220.1010 μg/mL的系列質(zhì)量濃度溶液，分別進(jìn)樣20 μL測定，按2.1項下色譜條件測定，記錄色譜面積，以遠(yuǎn)志的質(zhì)量濃度X為橫坐標(biāo)、峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程Y=0.26940.2676，R2=0.9995 （n=7）。結(jié)果表明，對照品質(zhì)量濃度在22.0101～220.1010 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.3.4 精密度試驗(yàn)：取110.0505 μg/mL的對照品溶液20 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次。測定遠(yuǎn)志峰面積，結(jié)果得RSD=1.115%，表明儀器的精密度良好。2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取同一批樣品（批號為150828）6份，按擬2.2.2方法平行制備成供試品溶液，分別進(jìn)樣20 μL，進(jìn)行測定，按外標(biāo)法以峰面積計算含量及RSD。結(jié)果分別為4.8862、4.8612、4.8891、4.8464、4.8959、4.8555 μg/mL，平均值為4.8724 μg/mL RSD=0.4215%，表明本方法重現(xiàn)性良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取供試品溶液（檢品號：150828）20 μL，分別于0、2、4、8、12、16、24 h進(jìn)樣，測定遠(yuǎn)志峰面積，結(jié)果測得供試品遠(yuǎn)志峰面積的RSD=0.2831%，表明供試品溶液中遠(yuǎn)志在24 h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.3.7 加樣回收試驗(yàn)：精密稱取已知遠(yuǎn)志含量的樣品9份（檢品號：150828樣品含量為1.0303 mg/g）適量，分別精密加入適量的對照品溶液（22.0101 μg/mL）50、100、150 μL，按供試品溶液制備方法處理，測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定：取3批樣品，按2.2項下方法制備供試品溶液，取20 μL進(jìn)樣測定，每批測定3次計算含量，結(jié)果批號150828、150709、141203的樣品中遠(yuǎn)志平均含量分別為1.0303、1.1524、1.1778 mg/g。

3 討 論

3.1 紫外線波長的選擇：取遠(yuǎn)志對照品適量，用流動相溶液溶解，本文通過考察在不同檢測波長下（210、237、320 nm）所測成分紫外吸收，僅在210 nm處遠(yuǎn)志有最大吸收，且靈敏度高，干擾較小，故選210 nm作為檢測波長。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

3.2 流動相的選擇：參考相關(guān)文獻(xiàn)［10-11］，在試驗(yàn)過程中，曾采用多種流動相進(jìn)行試驗(yàn)，包括乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85），乙腈-水（15∶85）、甲醇-水等測試，結(jié)果色譜峰分離效果均不理想，未形成良好峰形的峰，而未被采用。文中所選用的流動相甲醇-0.4%磷酸（90∶10）分離，主峰與其他雜質(zhì)分離度和峰形都理想效果較好，且保留時間較短。

3.3 供試品提取時間的選擇：在試驗(yàn)過程中，分別考察不同柱溫（10、25、35、40 ℃）對色譜分離效果的影響，結(jié)果各柱溫對分離效果、保留時間的影響均有明顯區(qū)別，柱溫為30 ℃分離效果好，因此確定柱溫為30 ℃。醒神通竅膠囊為復(fù)方制劑，遠(yuǎn)志的含量可作為該制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)。綜上所述，文中建立的高效液相色譜法方法具有有操作簡便、結(jié)果可靠等特點(diǎn)，能夠用于醒神通竅膠囊的質(zhì)量評價與控制。

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Determination of Polygala Tenuifolia Willd in Xingshen Tongqiao Capsule by HPLC

HE Xue-bing1， LI Zuo-xiao1*， XIONG Jun1， ZHANG Hao1， YANG Si-jin2
（1 Affiliated Hospital of the Southwest Medical University， Luzhou 646000， China； 2 Affiliated Chinese Medicine Hospital of Southwest Medical University， Luzhou 646000， China）

Objective To establish the determination method of Polygala tenuifolia willd in Xingshen Tongqiao capsule. Method Ultrasonic extraction of Xingshen Tongqiao capsule with 70% methanol as solvent. The separation was performed on a phenomenex proidigy column（250 mm × 4.6 mm， 5 μm）， the mobile phase consisted of methanol-0.4%phosphoric acid（90∶10）. The detection wavelength was set at 210 nm， and the column temperature was 30 ℃. Result There was a good linearity between the peak areas and the quantity of Polygala tenuifolia willd within the range of 22～220 μg/mL， equation of linear regression Y=0.26940.2676， R2=0.9995（n=7）. The average recovery was 95.44%， RSD=1.18%. Conclusion The establish method is simple， accurate，reproducible， and can be applied to the quality control of Xingshen Tongqiao capsule， which supplies an effective method for advance the quality control of Xingshen Tongqiao Capsule.

R282.710.3

B

1671-8194（2016）18-0037-02

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