賀愛軍,任　羽

(延安大學(xué)附屬醫(yī)院,1.普通外科; 2.血液科,陜西 延安,716000)

?

結(jié)腸癌中Ezrin蛋白的表達(dá)及臨床病理學(xué)意義

賀愛軍1,任羽2

(延安大學(xué)附屬醫(yī)院,1.普通外科; 2.血液科,陜西 延安,716000)

摘要:目的觀察和分析結(jié)腸癌中Ezrin蛋白的表達(dá)及臨床病理學(xué)意義。方法選取100例結(jié)腸癌組織標(biāo)本、100例癌旁組織標(biāo)本、56例轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織標(biāo)本作為研究材料，應(yīng)用免疫組化法對(duì)各類標(biāo)本中的Ezrin蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)和比較。結(jié)果轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于結(jié)腸癌組織或癌旁組織，結(jié)腸癌組織中的Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于癌旁組織(P<0.05); 不同腫瘤分化程度、侵犯漿膜情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期和生存時(shí)間患者的結(jié)腸癌組織中的Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論結(jié)腸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移等臨床病理特征與腫瘤組織中的Ezrin蛋白高表達(dá)密切相關(guān)，Ezrin蛋白表達(dá)水平可作為評(píng)價(jià)結(jié)腸癌病理特征和患者預(yù)后的輔助指標(biāo)。

關(guān)鍵詞:結(jié)腸癌; Ezrin蛋白; 免疫組化法; 病理學(xué)特征

結(jié)腸癌是臨床上較為常見的胃腸道惡性腫瘤，以40～60歲人群的發(fā)病率最高[1]。目前，臨床上針對(duì)結(jié)腸癌的主要治療方式為手術(shù)治療，在保證根除病灶的前提下，綜合應(yīng)用術(shù)后化療、靶向治療、內(nèi)分泌治療及免疫治療能夠減少轉(zhuǎn)移的發(fā)生率和復(fù)發(fā)率，提高患者的生活質(zhì)量和生存率[2]。消化道是血供和淋巴循環(huán)分布豐富的組織，結(jié)腸癌易早期出現(xiàn)血行轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，而且結(jié)腸癌細(xì)胞的生物學(xué)行為存在較大的異質(zhì)性，這導(dǎo)致結(jié)腸癌患者的腫瘤病理特征和預(yù)后也存在著較大的差異[3]。本研究分析結(jié)腸癌中Ezrin蛋白的表達(dá)及臨床病理學(xué)意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2009年1月—2013年5月在本院行手術(shù)切除的結(jié)腸癌標(biāo)本100份，標(biāo)本均來(lái)自不同患者，均經(jīng)術(shù)后病理檢查證實(shí)為結(jié)腸癌。所有納入患者術(shù)前均未經(jīng)化療治療，且均無(wú)遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移，其中男61例，女39例，年齡為35～76歲，平均為(54.3±9.2)歲；高分化癌51例，中等分化癌33例，低分化癌16例; 59例患者的腫瘤直徑≤5 cm者,41例患者的腫瘤直徑>5 cm者; 56例患者伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,48例患者的腫瘤侵及漿膜。同時(shí)選取與上述腫瘤組織一并切除的100例癌旁良性組織、56例轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織作為研究對(duì)象。

1.2研究方法

應(yīng)用免疫組化法對(duì)上述組織中的Ezrin蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)和分析，具體方法為:取上述標(biāo)本組織，經(jīng)脫蠟、水化，抗原修復(fù)后以PBS漂洗，置于H2O2中10 min后于正常血清中在37 ℃溫度下孵育15 min,加入1:50稀釋的抗Ezrin單克隆抗體，以PBS代替一抗作為對(duì)照，在4 ℃的溫度下過夜，加人二抗在37℃下孵育60 min,經(jīng)DAB顯色、蘇木精復(fù)染后封片鏡檢。Ezrin蛋白陽(yáng)性著色主要分布在細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜中，根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度和表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞比例進(jìn)行分級(jí)，其中各視野中均無(wú)著色細(xì)胞計(jì)為(-),各視野平均著色細(xì)胞數(shù)<50%或染色較淺計(jì)為(+),各視野中平均著色細(xì)胞數(shù)>50%且染色較深計(jì)為(2+),以分級(jí)結(jié)果為(+)或(2+)為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用 SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以百分比的形式表示，有等級(jí)關(guān)系的計(jì)數(shù)資料比較應(yīng)用頻數(shù)表的秩和檢驗(yàn)(Mann-Whitney U法)進(jìn)行處理，無(wú)等級(jí)關(guān)系的計(jì)數(shù)資料應(yīng)用卡方檢驗(yàn)或Fisher 精確概率法進(jìn)行處理，均以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同組織中的Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率的比較

三種組織標(biāo)本中的Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=27.243,P<0.01),其中轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于結(jié)腸癌組織或癌旁組織，結(jié)腸癌組織中的Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于癌旁組織(P<0.05),見表1。

表1　不同組織中的Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率的比較

與癌組織比較,*P<0.05; 與癌旁組織比較,##P<0.05。

2.2Ezrin蛋白表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性分析

不同腫瘤分化程度、侵犯漿膜情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期和生存時(shí)間患者的結(jié)腸癌組織中的Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(U=2.995、4.576,χ2=13.675、21.645、15.818,P<0.05),見表2。

表2　Ezrin蛋白表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性

與同一臨床特征的亞項(xiàng)比較,**P<0.01。

3討論

侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的主要生物學(xué)特征，也是導(dǎo)致腫瘤患者死亡的重要原因之一。研究[4]發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移與腫瘤浸潤(rùn)深度、分化程度及腫瘤所在的解剖部位等臨床病理因素有關(guān)。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)和人類基因組學(xué)研究的迅速發(fā)展，發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移是多種基因調(diào)控、多因素參與、多階段發(fā)展的復(fù)雜病理過程，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)了很多與之高度相關(guān)的基因及其產(chǎn)物，而他們也成為了臨床腫瘤靶向治療的重要靶點(diǎn)或評(píng)價(jià)腫瘤患者預(yù)后、轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)，針對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)蛋白研究已成為腫瘤研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)問題。相關(guān)研究結(jié)果[5-8]顯示，磷脂酰肌醇3激酶(P13K)/絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶(Akt)信號(hào)通路、Wnt信號(hào)通路/Hedgehog(Hh)信號(hào)通路、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號(hào)通路等蛋白信號(hào)通路在結(jié)腸癌遷移、侵襲、相關(guān)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能異常、表皮生長(zhǎng)因子和肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子表達(dá)水平上調(diào)等多種生物學(xué)行為中均發(fā)揮著重要的作用。

本研究結(jié)果顯示，在結(jié)腸癌腫瘤組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中,Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率均明顯升高，而且轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率還要顯著高于結(jié)腸癌組織，結(jié)腸癌組織中的Ezrin蛋白表達(dá)水平與腫瘤分化程度、侵犯漿膜情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期和患者生存時(shí)間等均具有相關(guān)性，這說(shuō)明結(jié)腸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移等病理特征及患者預(yù)后均與Ezrin蛋白表達(dá)水平的上調(diào)具有密切的相關(guān)性。Ezrin蛋白表達(dá)水平可作為評(píng)價(jià)結(jié)腸癌病理特征和預(yù)后的重要輔助指標(biāo)。Ezrin蛋白是ERM蛋白家族中的重要成員之一，是一種膜細(xì)胞骨架連接蛋白，能夠通過介導(dǎo)細(xì)胞膜與細(xì)胞骨架的連接來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞形態(tài)、運(yùn)動(dòng)、黏附及細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，是細(xì)胞維持其形狀、運(yùn)動(dòng)、極性及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)所不可缺少的一種蛋白。研究結(jié)果[9]顯示，Ezrin蛋白參與了微絨毛的形成并能夠與CD43、CD44、E-cadherin、ICAM-1、F-型肌動(dòng)蛋白等細(xì)胞膜和細(xì)胞骨架組件相連接而發(fā)揮多種生物學(xué)作用。Ezrin蛋白在1981年首次被發(fā)現(xiàn)，但其后的10多年中一直被認(rèn)為只是細(xì)胞骨架的重要組成成分。直到2004年，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)Ezrin蛋白表達(dá)水平異常與骨肉瘤、橫紋肌肉瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān),Ezrin蛋白的重要意義才被逐漸重視。近年來(lái)的研究[10]證實(shí),Ezrin蛋白在婦科腫瘤、消化道腫瘤、黑色素瘤及鼻咽癌、成人軟組織腫瘤等多種腫瘤細(xì)胞中存在高表達(dá)，并在腫瘤組織中的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為中發(fā)揮著重要作用，與多種腫瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)、病情進(jìn)展及預(yù)后高度相關(guān)。研究者[11]發(fā)現(xiàn)Ezrin蛋白的高表達(dá)能夠通過改變腫瘤細(xì)胞極性和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞間及細(xì)胞外基質(zhì)的黏附力、參與腫瘤細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種機(jī)制來(lái)影響惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移,Ezrin蛋白的高表達(dá)可打破正常細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)分子(Rho)、受體酪氨酸蛋白激酶等信號(hào)傳遞網(wǎng)絡(luò)，并借助這些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)對(duì)腫瘤細(xì)胞的形態(tài)、黏附、吞噬、運(yùn)動(dòng)、血管形成等一系列生物學(xué)行為發(fā)揮調(diào)控作用，最終賦予腫瘤細(xì)胞高轉(zhuǎn)移活性。Ezrin蛋白的作用幾乎貫穿于腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的整個(gè)過程，包括腫瘤細(xì)胞從原發(fā)灶脫落并具有運(yùn)動(dòng)性、侵入周圍組織及脈管系統(tǒng)、穿透基底膜、在靶器官增殖形成轉(zhuǎn)移灶等多個(gè)環(huán)節(jié)。

綜上所述，結(jié)腸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移等臨床病理特征與腫瘤組織中的Ezrin蛋白高表達(dá)密切相關(guān),Ezrin蛋白表達(dá)水平可作為評(píng)價(jià)結(jié)腸癌病理特征和患者預(yù)后的輔助指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)

[1]康清杰,向征.結(jié)腸癌篩查和診療的研究進(jìn)展[J].重慶醫(yī)學(xué),2015,44(28):4001-4003.

[2]黃永坤.結(jié)腸癌的臨床治療進(jìn)展[J].中外醫(yī)學(xué)研究,2012,10(31):150-151.

[3]王理,張文斌.結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型的研究進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代普通外科進(jìn)展,2014,17(2):162-165.

[4]田衍.進(jìn)展期結(jié)腸癌患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)因素分析[J/CD].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘:電子版,2013,13(30):5-6.

[5]肖高春,鄭勇斌,童仕倫,等.抑制磷脂酰肌醇3激酶/絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶和絲裂原細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶/細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶信號(hào)通路對(duì)結(jié)腸癌血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2015,32(8):1911-1914.

[6]李文玲,任樺,宋莉,等.Gli1與β-catenin相互作用促進(jìn)二者在結(jié)腸癌細(xì)胞中的協(xié)同核輸入[J].中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào),2014,30(12):1202-1209.

[7]黃偉華,來(lái)偉,籃球生,等.蛋白酪氨酸磷酸酶-3對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞表皮生長(zhǎng)因子相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)節(jié)[J].嶺南現(xiàn)代臨床外科,2015,15(3):348-350.

[8]賈漪濤,王振寶,黃萬(wàn)剛,等.絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路在肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子促進(jìn)人結(jié)腸癌細(xì)胞增殖移行中的作用[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2012,29(11):2188-2190.

[9]于興燕,于東紅.Ezrin蛋白在腫瘤中的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2015,21(23):4278-4280.

[10]趙楊.Ezrin蛋白與婦科惡性腫瘤相關(guān)性的研究進(jìn)展[J].吉林醫(yī)學(xué),2014,35(30):6771-6772.

[11]嚴(yán)飛,鄭義,萬(wàn)俊,等.Ezrin蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及其對(duì)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的最新進(jìn)展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2012,12(36):7167-7170.

收稿日期:2016-04-11

中圖分類號(hào):R 735.3

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1672-2353(2016)15-050-03

DOI:10.7619/jcmp.201615014

Expression of Ezrin protein in colonic carcinoma and its clinical pathological significance

HE Aijun1,REN Yu2

(1.Department of General Surgery; 2.Department of Hematology,The Affiliated Hospital of Yan′an University,Yan′an,Shaanxi,716000)

ABSTRACT:ObjectiveTo observe and analyze the expression of Ezrin protein in colonic carcinoma and its clinical pathological significance.MethodsA total of 100 specimens of colonic carcinoma tissues,100 specimens of paracancerous tissues and 56 specimens of metastatic lymph node tissue were selected as the research materials.The immunohistochemical method was used to detect the expression of Ezrin protein in all kinds of specimens.ResultsThe positive expression rate of Ezrin protein in metastatic lymph node tissues was significantly higher than that in colonic carcinoma tissues or paracancerous tissues,and the positive expression rate of Ezrin protein in colonic carcinoma tissues was significantly higher than that in paracancerous tissues (P<0.05).There were significant differences in the positive expression rates of Ezrin protein among the patients with different conditions of tumor differentiation degree,serosa invasion,lymph node metastasis,clinical stage and survival time (P<0.05).ConclusionThe clinical pathological characteristics such as invasion and metastasis of colonic carcinoma are closely correlated with the high expression of Ezrin protein in tumor tissues,and the expression of Ezrin protein can be used as an auxiliary indicator to evaluate the clinical pathological characteristics and the prognosis of the patients with colonic carcinoma.

KEYWORDS:colonic carcinoma; Ezrin protein; immunohistochemistry method; pathological characteristics