陳夕軍孫佳佳陳銀鳳董京萍陳孝仁魏利輝黃奔立*

（1揚(yáng)州大學(xué)園藝與植物保護(hù)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州 225009；2揚(yáng)州市邗江區(qū)植保植檢站，江蘇揚(yáng)州 225100；3江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，江蘇南京 210014）

不同綠色防控措施對辣椒疫病的控制效果

陳夕軍1孫佳佳1陳銀鳳2董京萍1陳孝仁1魏利輝3黃奔立1*

（1揚(yáng)州大學(xué)園藝與植物保護(hù)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州 225009；2揚(yáng)州市邗江區(qū)植保植檢站，江蘇揚(yáng)州 225100；3江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，江蘇南京 210014）

以辣椒品種卞椒1號為試材，采用太陽能消毒、添加不同比例蚯蚓糞和使用生防菌劑灌根3種方法，研究不同防控措施對辣椒疫病的控制效果。結(jié)果表明，太陽能消毒可以殺滅土壤中的疫病病菌，且處理時間越長效果越佳，但對土壤菌群中各類微生物的影響不同；添加不同比例的蚯蚓糞均對辣椒幼苗具有明顯的促生作用，添加30%蚯蚓糞的育苗基質(zhì)對辣椒疫病的控制效果最佳。從蚯蚓糞中分離獲得兩株生防菌A116和B107，均對辣椒疫病病菌有很好的拮抗作用。將太陽能消毒與生防菌劑灌根兩種方法配合使用，對辣椒疫病的最高防效可達(dá)91.67%。

綠色防控措施；辣椒疫?。豢刂菩Ч?/p>

辣椒 疫病是 由 辣椒疫 霉（Phytophthora capsici）引起的重要土傳病害，在世界各辣椒產(chǎn)地均有發(fā)生，常造成辣椒的大幅減產(chǎn)、甚至絕收（Aragaki & Uchida，2001；馬云艷 等，2015）。隨著我國設(shè)施辣椒栽培面積的不斷擴(kuò)大，由辣椒疫病導(dǎo)致的連作障礙已成為制約辣椒產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要因素之一。由于辣椒采收期長，病害常在棚中快速蔓延，造成毀棚；而長期過量的使用化學(xué)農(nóng)藥，又容易引起農(nóng)藥殘留（Residue）、病菌抗藥性（Resistance）和再猖獗（Resurgence）等“3R”問題。因此，發(fā)展綠色防控措施，保證市民菜籃子的豐富與安全，顯得尤為重要。

辣椒疫霉病菌常以卵孢子在土壤中存活，且可以侵染多種植物（Lamour et al.，2012；Gilardi et al.，2015）。而土傳病害的化學(xué)防治往往用藥量大且防治效果不佳。因而，經(jīng)濟(jì)有效、對環(huán)境友好、對人和非靶標(biāo)生物安全的綠色防控措施受到了廣泛關(guān)注。有機(jī)肥（李勝華 等，2009）、堆肥水浸液（Kyung et al.，2010）、 生 防 菌（Sang & Kim，2012；劉永亮 等，2013）及肥菌結(jié)合（常志州 等，2005）等都被應(yīng)用于辣椒疫病的防治中，但防治效果卻不盡如人意，一般情況下田間發(fā)病率的降低幅度均小于50%。本試驗(yàn)通過多種防治措施選擇與復(fù)合使用，擬尋得高效環(huán)保的辣椒疫病綠色防控方法，為指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)于2009～2015年進(jìn)行。辣椒疫霉病菌由揚(yáng)州大學(xué)植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室分離自江蘇辣椒疫病病株。供試?yán)苯菲贩N為卞椒1號，由揚(yáng)州大學(xué)園藝與植物保護(hù)學(xué)院蔬菜教研室提供。供試蚯蚓糞由揚(yáng)州大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院蚯蚓糞實(shí)驗(yàn)基地提供，為蚯蚓在牛糞中養(yǎng)殖所產(chǎn)生的代謝物。

1.2 太陽能處理對土壤菌群的影響

試驗(yàn)在揚(yáng)州大學(xué)園藝與植物保護(hù)學(xué)院園藝學(xué)科蔬菜基地露地進(jìn)行，土壤為沙壤土。將試驗(yàn)田深翻后整平，灌水以保持土壤濕潤。灌水后24 h用兩層0.1 mm厚的聚乙烯薄膜覆蓋于土壤表面，邊緣用土蓋嚴(yán)，進(jìn)行太陽能消毒處理，以同一地塊未覆膜區(qū)作對照。分別于處理0、10、20、30 d后，在處理田塊和對照田塊10 cm土層隨機(jī)取自然土樣。將1 g土樣溶于10 mL無菌水中，雙層紗布過濾后，分別取100 μL溶液均勻展布于NA培養(yǎng)基（蛋白胨10 g，牛肉粉3 g，氯化鈉5 g，瓊脂17 g，水1 000 mL，pH=7.3）、馬丁氏培養(yǎng)基（磷酸二氫鉀1.0 g，硫酸鎂0.5 g，蛋白胨5.0 g，葡萄糖10.0 g，瓊脂17.0 g，水1 000 mL。每1 000 mL培養(yǎng)基中加入1.0%孟加拉紅水溶液3.3 mL，使用前每1 000 mL培養(yǎng)基中加入1.0%鏈霉素0.3 mL）和高氏1號培養(yǎng)基（可溶性淀粉20 g，硝酸鉀1 g，磷酸氫二鉀0.5 g，硫酸鎂0.5 g，氯化鈉0.5 g，硫酸亞鐵0.01 g，瓊脂17 g，水1 000 mL）表面，并分別于24、48、72 h后，計數(shù)培養(yǎng)基表面細(xì)菌、真菌和放線菌菌落數(shù)。每處理3次重復(fù)。試驗(yàn)過程中實(shí)時記錄天氣情況。

1.3 辣椒疫霉病菌的耐熱性

1.3.1 菌絲體耐熱性測定 用直徑5 mm的打孔器在未產(chǎn)孢子囊的辣椒疫霉病菌菌落邊緣打孔，菌碟置于含有5 mL蒸餾水的無菌小試管中，然后將試管置于不同溫度水浴鍋中處理一定時間，共設(shè)40、45、50、55、60、65 ℃ 6個溫度梯度及5、10、15、20、25 min 5個時間段。處理后將菌碟取出，置于PDA平板上28 ℃培養(yǎng)，3 d后觀察其生長情況。每處理5個平板，2次重復(fù)。

1.3.2 孢子囊（游動孢子）耐熱性測定 辣椒疫病病菌于CA平板（胡蘿卜200 g，瓊脂20 g，水1 000 mL）上28 ℃黑暗培養(yǎng)7 d后，加入10 mL無菌水，完全覆蓋菌絲體，將CA平板置于28 ℃光照恒溫培養(yǎng)箱，連續(xù)光照培養(yǎng)120 h以上，以誘導(dǎo)孢子囊的產(chǎn)生（鄭小波，1997）。用無菌水將孢子囊（游動孢子）洗出，置于無菌小試管中，設(shè)6個溫度梯度、5個時間段，同1.3.1。處理后將孢子（囊）懸浮液混入PDA制成平板，3 d后觀察其生長情況。每處理5個平板，2次重復(fù)。

1.4 太陽能處理對辣椒疫霉病菌的滅殺效果

將配好的辣椒疫霉病菌孢子（囊）液均勻拌入滅菌土制成病土，取30 g病土置于滅菌的培養(yǎng)皿中，用兩層紗布封口后，分別置于5、10、15、20 cm不同深度土層。將土面平整后，覆膜條件下進(jìn)行太陽能處理。于處理5、10、15、20、25 d后，分別取1 g樣土溶于10 mL滅菌水中，充分?jǐn)噭蚝笥秒p層紗布過濾。吸取100 μL濾液，用展棒均勻展布于OMA選擇性培養(yǎng)基表面。72 h后計數(shù)菌落數(shù)，計算太陽能對辣椒疫霉病菌的滅殺率。以未拌入孢子（囊）液的滅菌土作對照，每處理5次重復(fù)。

1.5 蚯蚓糞對辣椒幼苗的促生作用

將辣椒種子在50～55 ℃溫水中浸泡1～2 min，然后在30 ℃水中浸種6～8 h。取出種子，用濕潤的紗布包好，放于28 ℃培養(yǎng)箱中催芽。4～5 d后，選取芽長較一致的種子，播于5 cm×10 cm規(guī)格的塑料穴盤中，每處理播20穴，3次重復(fù)。穴盤中置有蛭石混合基質(zhì)與蚯蚓糞的混合物，蚯蚓糞體積比分別為30%、60%、100%，以未添加蚯蚓糞的蛭石混合基質(zhì)作對照。辣椒播種后7～11 d，逐日統(tǒng)計出苗數(shù)，第25天測定辣椒幼苗株高、地上部鮮質(zhì)量和干質(zhì)量等生長指標(biāo)（Chen et al.，1987；Cheryl & Eric，1996）。

1.6 蚯蚓糞對辣椒疫病的防效

將基質(zhì)與不同比例的新鮮蚯蚓糞混合，蚯蚓糞所占體積比分別為10%、30%、60%和100%，以不加蚯蚓糞的基質(zhì)為對照。另設(shè)一加入30%滅菌蚯蚓糞的處理。將50 mL含孢子5 000個·mL-1的辣椒疫病病菌孢子懸浮液與1 kg蚯蚓糞和基質(zhì)混合物混拌均勻，制成辣椒疫病病土。每處理栽種24 株6～8葉期的辣椒幼苗，待對照植株大部分發(fā)病時開始調(diào)查，計算發(fā)病率和防效。將蚯蚓糞放置1 a后，重復(fù)上述試驗(yàn)。

防治效果=〔1-（處理發(fā)病率/對照發(fā)病率）〕×100%

1.7 蚯蚓糞中拮抗菌的篩選

稱取1 g蚯蚓糞，向其中加入10 mL滅菌的去離子水，攪拌均勻后略靜置，用吸管分別吸取200 μL水溶液均勻展布于PDA、NA和高氏1號培養(yǎng)基平板表面，待平板出現(xiàn)單菌落后，根據(jù)微生物類型挑取至相應(yīng)培養(yǎng)基斜面。

采用平板對峙培養(yǎng)法測定拮抗菌活性。在28℃恒溫培養(yǎng)4 d的辣椒疫霉病菌前沿用直徑5 mm的打孔器打取菌絲塊，將菌絲塊接種于PDA平板中央，待病原菌菌落直徑達(dá)2～3 cm時，將拮抗菌菌絲塊置于平板四周，以不接拮抗菌平板作對照。28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，至對照菌落接近培養(yǎng)皿邊緣時，測量抑菌帶大小。

1.8 運(yùn)用不同綠色防控措施控制辣椒疫病

試驗(yàn)共設(shè)3個處理，太陽能消毒處理、菌液灌根處理、太陽能消毒+菌液灌根處理，以清水處理為對照。每100 g滅菌土中加入10 mL濃度為5 000個·mL-1的辣椒疫霉病菌孢子（囊）懸浮液，混勻后的病土裝入直徑10 cm的塑料盆缽，將部分盆缽埋入土中，盆缽口與土表平齊，用雙層聚乙烯薄膜覆蓋進(jìn)行太陽能處理。25 d后，將培育好的辣椒苗移入盆缽中，部分盆缽澆灌1.7中篩選出的拮抗菌發(fā)酵液25 mL，以無菌注射器注入根部土壤。待對照大部分發(fā)病時，調(diào)查發(fā)病情況并計算防效。

1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用DPS v6.55軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 太陽能處理對土壤菌群的影響

太陽能消毒處理期間，氣溫與常年無顯著差異，白天最高均溫30 ℃左右，晴天比率約80%。與對照相比，太陽能處理后土壤中放線菌數(shù)量在處理10 d后明顯下降，30 d后與對照相差了近100倍（圖1-A）；而真菌和細(xì)菌的數(shù)量在處理10 d后比對照顯著增加，且隨著時間的延長增幅加大（圖1-B、1-C）。土壤中不同種類微生物數(shù)量變化趨勢并不一致，可能是由于不同微生物對溫度的敏感性不同。

圖1 太陽能處理對土壤菌群的影響

2.2 辣椒疫霉病菌的耐熱性

從表1、2可以看出，辣椒疫霉病菌孢子（囊）與菌絲相比具有更強(qiáng)的耐熱性，45 ℃下處理25 min菌絲體全部致死，而同樣溫度下絕大部分病菌孢子（囊）均能正常生長繁殖；50 ℃下處理10 min所有菌絲體均已死亡，而孢子（囊）在55 ℃下處理5 min仍有部分可萌發(fā)生長。

2.3 太陽能處理對辣椒疫霉病菌的滅殺效果

由圖2可知，太陽能處理時間≤10 d時，不同深度土層間疫霉病菌致死率無顯著差異；當(dāng)處理時間≥20 d時，不同深度土層辣椒疫霉病菌致死率大多差異顯著，越接近土壤表面，太陽能對病菌的殺滅效果越好；當(dāng)處理25 d后，對5 cm土層土壤中辣椒疫霉病菌的滅殺效果可達(dá)52.60%?？梢钥闯觯幚頃r間越長對土壤病菌的殺滅效果越好。

表1 辣椒疫霉病菌菌絲的耐熱性

表2 辣椒疫霉病菌孢子囊（游動孢子）的耐熱性

圖2 太陽能消毒對土壤中辣椒疫霉病菌的滅殺效果

2.4 蚯蚓糞對辣椒幼苗的促生作用

育苗基質(zhì)中添加不同比例的蚯蚓糞可以促進(jìn)辣椒的出苗率，且以添加60%蚯蚓糞的復(fù)合基質(zhì)出苗率最高，播種7～11 d的出苗率均顯著高于對照，播種11 d后出苗率可達(dá)92.80%（表3）。

在育苗基質(zhì)中添加蚯蚓糞對辣椒幼苗的生長有明顯促進(jìn)作用，株高、地上部鮮質(zhì)量及干質(zhì)量均以添加60%蚯蚓糞的復(fù)合基質(zhì)處理最大（表3）。

表3 添加不同比例蚯蚓糞對辣椒種子出苗率和幼苗生長的影響

2.5 蚯蚓糞對辣椒疫病的防控作用

每千克基質(zhì)中加入50 mL含孢子5 000個·mL-1的辣椒疫霉病菌孢子懸浮液，辣椒苗發(fā)病率可達(dá)100%（圖3）?；|(zhì)中加入不同比例的新鮮蚯蚓糞后，辣椒疫病的發(fā)生均受到一定程度的抑制（表4），添加30%蚯蚓糞的復(fù)合基質(zhì)對疫病的防效可達(dá)79.17%，與其他處理差異顯著。蚯蚓糞經(jīng)滅菌處理后，其對病害的抑制效果大幅下降，基質(zhì)中添加30%滅菌蚯蚓糞，其對辣椒疫病的防效僅為20.83%。

將新鮮的蚯蚓糞放置1 a后再進(jìn)行辣椒疫病的防控效果測定。結(jié)果表明（表4），長期放置會降低蚯蚓糞對病害的防控效果，其中添加100%蚯蚓糞的防控效果最好，但其對病害的抑制率也僅為20.83%。

表4 蚯蚓糞對辣椒疫病的抑制作用

2.6 太陽能消毒與生防菌對辣椒疫病的控制作用

從蚯蚓糞中共分離出對辣椒疫霉病菌有拮抗活性的生防菌31株，其中真菌6株、細(xì)菌3株、放線菌22株。所有拮抗菌中以放線菌A116和細(xì)菌B107的拮抗效果最好，抑菌帶大小分別為0.65 cm 和1.17 cm（圖4）。

圖3 辣椒疫霉病菌孢子懸浮液接種盆缽發(fā)病情況

圖4 蚯蚓糞中拮抗菌對辣椒疫霉病菌的抑制作用

B107發(fā)酵菌液灌根和太陽能消毒處理對辣椒疫病均有很好的控制作用，盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明（表5），其防效可分別達(dá)79.16%和62.50%；而將拮抗菌液灌根與太陽能消毒結(jié)合使用，防效更是高達(dá)91.67%。

表5 太陽能消毒與菌液灌根對辣椒疫病的抑制作用

3 結(jié)論與討論

全球范圍內(nèi)，每年因有害生物（病原物、害蟲、雜草）危害造成的作物產(chǎn)量損失約35%（Popp et al.，2013）。化學(xué)防治因其快速、高效、易操作等特點(diǎn)而成為近年來有害生物綜合治理的主要手段。但過量使用化學(xué)農(nóng)藥的弊端已日益顯現(xiàn)，環(huán)境污染、人畜中毒、有害生物抗藥性和再猖獗等問題日趨嚴(yán)重（高希武，2010；Ge et al.，2010；Jiang et al.，2012；Liang et al.，2013），特別是辣椒、番茄、黃瓜、茄子等采摘期較長的設(shè)施蔬菜，長期用藥已經(jīng)嚴(yán)重影響了果實(shí)品質(zhì)（于淑晶 等，2014；Bozena et al.，2015）。2006年，在農(nóng)業(yè)部召開的全國植保植檢工作會議上，首次提出了“綠色植?！钡睦砟?。2011年農(nóng)業(yè)部辦公廳發(fā)布了關(guān)于推進(jìn)農(nóng)作物病蟲害綠色防控的意見，提出對農(nóng)作物病蟲害要進(jìn)行綠色防控，即用生態(tài)調(diào)控、生物防治、物理防治和科學(xué)用藥等環(huán)境友好措施來控制病蟲害，以達(dá)到確保我國農(nóng)產(chǎn)品高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的目的。

太陽能土壤消毒對環(huán)境友好、操作簡單、成本低廉、效果明顯，近年來已經(jīng)逐漸被應(yīng)用于防治作物連作障礙，特別是設(shè)施果蔬因?yàn)橥羵鞑『Χ鸬倪B作障礙（羅楨彬 等，2013；吉沐祥 等，2015）。無論是在0～20 cm淺土層，還是在20～40 cm的深土層，太陽能消毒均可有效降低土壤中真菌、細(xì)菌和放線菌的數(shù)量（陳志杰 等，2009）。但劉耕春和程子林（2010）的研究卻發(fā)現(xiàn)，太陽能處理可促進(jìn)土壤中細(xì)菌數(shù)量的增加，這可能是由于在太陽能消毒過程中，土壤濕潤、溫度高，微生物呼吸十分旺盛，在覆膜封閉條件下，土壤中氧氣逐漸消耗，呈缺氧還原狀態(tài)，改變了土壤特性，一些嗜熱、厭氧、能分解有機(jī)質(zhì)的菌類大量繁殖造成的（馮忠民 等，2008）。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，太陽能處理后，田間除放線菌數(shù)量明顯下降外，細(xì)菌和真菌的數(shù)量卻均有顯著上升，這些試驗(yàn)結(jié)果與前人不同，可能是因?yàn)椴煌飰K土壤菌群種類和土壤中菌群的耐熱性不同。

近年來蚯蚓糞在蔬菜育苗和栽培中已有研究應(yīng)用（尚慶茂和張志剛，2005；張曉蕾 等，2010；張寧 等，2011）。蚯蚓糞作為有機(jī)廢棄物，如畜禽糞便等的消化分解產(chǎn)物，具有很好的通氣性、排水性和高持水量。蚯蚓糞中的大量細(xì)菌、真菌和放線菌不僅能使復(fù)雜的物質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)橹参镆孜盏挠行镔|(zhì)，而且還能合成一系列如糖、氨基酸和維生素等活性物質(zhì)，顯著促進(jìn)植物生長。另外，蚯蚓糞中的大量有益菌還可以有效抑制病原菌的生長，本試驗(yàn)結(jié)果表明，利用太陽能可以很好地殺滅土壤中的辣椒疫霉病菌，而蚯蚓糞中的拮抗菌可明顯抑制辣椒疫霉病菌的生長。將土壤消毒與生防菌液灌根結(jié)合運(yùn)用，對辣椒疫病的防效可高達(dá)91.67%，高于多數(shù)化學(xué)藥劑（章彥俊 等，2013）。若在育苗基質(zhì)中再添加30%的蚯蚓糞，對控制該病害將更加有效。

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Control Effect of Different Green Control Measures on Pepper Phytophthora Blight

CHEN Xi-jun1，SUN Jia-jia1，CHEN Yin-feng2，DONG Jin-ping1，CHEN Xiao-ren1，WEI Li-hui3，HUANG Ben-li1*

（1Horticulture and Plant Protection College，Yangzhou University，Yangzhou 225009，Jiangsu，China；2Plant Protection and Quarantine Station of Hanjiang District，Yangzhou 225100，Jiangsu，China；3Institute of Plant Protection，Jiangsu Academy of Agricultural Sciences，Nanjing 210014，Jiangsu，China）

In order to clear the control effect of different control measures on pepper phytophthora blight，soil solarization，adding the wormcast and dripping the antagonistic bacteria suspension were adopted.Results showed that solarization could kill the pathogen of pepper phytophthora blight，the longer treating time，the better effect.But it had different effects on different kinds of microorganisms in soil.The wormcast could promote the growth of pepper seedling and had the best control effect on pepper phytophthora blight，when 30% of it was added to the cultivating substratum.A116 and B107，2 antagonistic strains were isolated from the wormcast，both of them had better antagonistic activity against Phytophthora capsici.Combining soil solarization with dripping the antagonistic bacteria suspension，the highest control effect could reach 91.67%.

Green control measure；Pepper phytophthora blight；Control effect

）：黃奔立，男，副教授，主要從事蔬菜病害防控研究，E-mail：yzhbl2003@163.com

國家公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)（201403032），江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金項(xiàng)目〔CX（15）1037〕

陳夕軍，男，博士，副教授，主要從事農(nóng)作物病害防治研究，E-mail：xjchen@yzu.edu.cn

（

2016-02-29；接受日期：2016-05-31