胡錢東，熊小琴（.內(nèi)江市市中區(qū)水產(chǎn)漁政局，四川 內(nèi)江　64000；.中國科學(xué)院水生生物研究所，湖北 武漢　43007）

三環(huán)唑?qū)S鱔魚種的急性毒性及安全濃度評價

胡錢東1，熊小琴2
（1.內(nèi)江市市中區(qū)水產(chǎn)漁政局，四川 內(nèi)江641000；2.中國科學(xué)院水生生物研究所，湖北 武漢430072）

在常溫條件下［水溫為（23±2）℃，pH值6.8，溶氧4.6 mg/L］用經(jīng)過處理的自來水，采用靜水試驗法，對平均體質(zhì)量8.7 g/尾黃鱔魚種進行三環(huán)唑的急性毒性試驗。隨著藥物濃度的上升和浸泡時間的延長，黃鱔魚種死亡量上升。三環(huán)唑?qū)S鱔魚種24 h、48 h和96 h半致死濃度分別為9.87 mg/L、8.36 mg/L、6.53 mg/L，安全濃度為0.653 mg/L.結(jié)果表明：黃鱔魚種對三環(huán)唑敏感，毒性為中毒級。

三環(huán)唑，黃鱔，急性毒性，半致死濃度

doi：10.3969/j.issn.1004-2091.2016.04.003

黃鱔（Monopterus albus Zuiew）在脊椎動物分類學(xué)上屬硬骨魚綱，合鰓目，合鰓科，黃鱔屬。多生活在湖泊、塘堰、河道、溝渠、稻田及池沼中的底部，有性逆轉(zhuǎn)現(xiàn)象［1-3］。由于黃鱔肉質(zhì)細嫩，味道鮮美，富含不飽和脂肪酸，具有滋陰補腎的藥用價值和食用價值，深受廣大消費者的青睞，在國內(nèi)外市場上銷量大。稻田養(yǎng)鱔具有成本低、管理方便、疾病少、收益高等特點，稻田天然餌料比較豐富，水深正好適合黃鱔養(yǎng)殖的要求。而且黃鱔在田中鉆洞打穴，疏松土壤，捕食稻田中的各種水生、陸生昆蟲及其幼蟲，減少水稻病蟲害促進水稻生長，提高水稻產(chǎn)量［4-5］。因此，稻田養(yǎng)殖黃鱔意義重大。然而稻田施用農(nóng)藥與養(yǎng)魚的矛盾尤為突出。在稻田養(yǎng)魚過程中我們應(yīng)選用高效、低毒、低殘留、廣譜性的農(nóng)藥，并且掌握農(nóng)藥的正常使用量和對魚類的安全濃度［6-8］。

三環(huán)唑是中國稻田里常用的農(nóng)藥，主要用來治療稻瘟病。其化學(xué)式為5-甲基-1，2，4三唑駢［3，4-b］苯駢噻唑，屬于中等毒性殺菌劑，劑型95%原藥，20%、40%、75%三環(huán)唑可濕性粉劑，30%懸浮劑，1%、4%粉劑，20%溶膠劑。特點為具有較強的內(nèi)吸性的保護性殺菌劑。能迅速被各部位吸收，持效期長，藥效穩(wěn)定，用量低并且抗雨水沖刷［9］。在以往的研究中有三環(huán)唑?qū)︴庺~、鯽魚、草魚等稻田主養(yǎng)魚的毒性報道［6］，但對黃鱔魚種的毒性研究還未曾有過，所以我們選擇這種藥物對其進行急性毒性試驗，找出三環(huán)唑?qū)S鱔苗種的安全濃度，希望在水稻增產(chǎn)的同時保護好稻田中的黃鱔資源，做到稻魚雙豐收，并為稻田中合理施用三環(huán)唑提供參考。

1　材料及方法

1.1供試魚種和用水

黃鱔魚種采購于內(nèi)江農(nóng)貿(mào)市場，平均體長16.8 cm，平均體質(zhì)量8.7 g/尾；魚種體表無傷痕，在水中游動正常，身體健康。試驗用水為經(jīng)充分曝氣的自來水，pH值6.8，溶氧4.6 mg/L，水溫為常溫（23± 2）℃。

試驗前黃鱔魚種在試驗室內(nèi)規(guī)格為25 cm×30 cm×50 cm的水族缸內(nèi)暫養(yǎng)7 d，使其適應(yīng)試驗環(huán)境，并剔除不活潑個體。試驗前一天停止喂食，試驗期間也不喂食［10］。

1.2供試藥品

在標(biāo)正作物科學(xué)有限公司購買3袋100 g/袋的75%三環(huán)唑可濕性粉劑。

1.3試驗方法

實驗采用常溫靜水試驗法，在試驗室內(nèi)規(guī)格為25 cm×30 cm×50 cm的水族缸內(nèi)進行該試驗，在通常使用的藥物劑量適當(dāng)擴大或縮小進行預(yù)備試驗，觀察黃鱔的活動情況及存活情況，確定試驗濃度區(qū)間（4.00～12.00 mg/L）。

式中r為公比，b為最高致死劑量，a為最低致死劑量，n為組數(shù).朱蓓蕾，動物毒理學(xué)）［11，12］設(shè)立4.00、5.26、6.93、9.12、12.00 mg/L 5個濃度梯度組。

同時各設(shè)對照組和平行組。各試驗組中隨機放入10尾黃鱔。每24 h換三環(huán)唑試驗液一次，及時剔除死亡個體。

試驗開始時起做8 h連續(xù)觀察，然后繼續(xù)觀察24、48、96 h黃鱔魚種的試驗，記錄試驗其中毒癥狀和病死率［13］。

黃鱔的死亡以鑷子夾起其口裂，身體完全不動，然后用大量水沖洗，放入清水中5 min中仍不動為準(zhǔn)［14］。

1.4數(shù)據(jù)處理方法

根據(jù)黃鱔魚種死亡數(shù)及死亡時間，利用寇氏法［15］計算半致死濃度LC50，安全濃度按96 h LC50×0.1求得。計算公式如下：LgLC50=Xm-d（∑p-0.5），式中Xm為最大劑量的對數(shù)，d為相鄰劑量比值的對數(shù)，p為各組的病死率（病死率以小數(shù)表示），∑p為各組病死率的總和。查反對數(shù)求LC50。

2　結(jié)果與分析

2.1毒性反應(yīng)及癥狀

三環(huán)唑的濃度為12.00 mg/L時，40 min后黃鱔急劇狂游、撞壁，1 h后表現(xiàn)出明顯的中毒癥狀：魚頭朝上伸出水面，魚體卷曲。10 h后開始死亡，24 h病死率達到90%，28 h達到100%；濃度為9.12 mg/ L時，1h后急劇狂游，7 h后有明顯的中毒癥狀，16 h后開始死亡，24 h病死率為20%，48 h為40%，96 h為60%；濃度為6.93時，2.3 h后魚群游動劇烈，10h時有明顯的中毒癥狀，20 h時病死率為10%，48 h病死率為30%，96 h為50%；濃度為5.26 mg/L時，3 h有狂游、擊壁現(xiàn)象，隨后程度減弱，在48 h時病死率為10%，但96 h時高達40%切有明顯的中毒癥狀；濃度為4.00 mg/L時，4 h后也出現(xiàn)狂游、擊壁現(xiàn)象，然后變得安靜，96 h時病死率為10%。黃鱔魚種死后身體僵直、彎曲，鰓部腫大、出血，肛門紅腫、出血，體表有大量黏液。

2.2半致死濃度及95%置信值

三環(huán)唑?qū)S鱔魚種96 h的急性毒性試驗結(jié)果，見表1（為2次平行試驗的平均結(jié)果）。

表1　三環(huán)唑?qū)S鱔魚種急性毒性試驗死亡統(tǒng)計

從表1可知，黃鱔苗種的病死率隨著藥物濃度的增加而上升，在12.00 mg/L時達到100%。24 h時，4.00、5.26、6.93、9.12、12.00 mg/L組的病死率分別為0%、0%、10%、20%、90%；48 h分別為0%、10%、30%、40%、100%；96h分別為 10%、40%、50%、70%、100%。對表1中的數(shù)據(jù)按公式進行計算，分別計算出三環(huán)唑?qū)S鱔魚種的半致死濃度及Lg LC50的95%可信限［16］，見表2。

表2　三環(huán)唑?qū)S鱔魚種的半致死濃度及LgLC50的95%可信限

從表2可知，三環(huán)唑?qū)S鱔魚種24，48，96 h的半致死濃度分別為9.87、8.36、6.53 mg/L，安全質(zhì)量濃度為0.653 mg/L。

3　討論

3.1三環(huán)唑安全濃度

有毒物質(zhì)對魚類的毒性按LC50的大小可分為劇毒、高毒、中毒、低毒和微毒5個等級。本試驗中，三環(huán)唑?qū)S鱔魚種96 h LC50為6.53 mg/L，屬中毒級，與標(biāo)準(zhǔn)毒性評價相同［17-19］。而三環(huán)唑的使用方法是：每667 m2用75%可濕性粉劑22 g，對水20～50 L，全田噴施［20］，施用濃度為0.44～1.10 g/L大于黃鱔魚種的安全濃度0.653 mg/L，而且室外溫度變化多端，會影響三環(huán)唑的作用機制使其毒性發(fā)生改變，同實驗室條件下所得到的數(shù)據(jù)會有偏差，因此建議養(yǎng)殖戶在黃鱔稻田養(yǎng)殖過程中慎用此藥物，且養(yǎng)殖用水一定要經(jīng)過嚴格的水質(zhì)檢查。

3.2影響三環(huán)唑半致死濃度的因素

黃鱔苗種周身無鱗、多黏液，能用咽腔和表皮呼吸。同時，由于其體表直接接觸水體，所以也容易受水體中化學(xué)物質(zhì)的影響。在以往的研究中有三環(huán)唑?qū)︴庺~（平均體質(zhì)量為21.3 g/尾）的LC50為16.0 mg/L，對鯽魚（平均體質(zhì)量為27.3 g/尾）LC50為24.0 mg/L，對草魚（平均體質(zhì)量為32.3 g/尾）LC50為15.5 mg/L，它們的毒性評價都為中毒級，與該試驗結(jié)果相同，但由于黃鱔魚種是無鱗魚類相對于以上有鱗魚類在受到外源性藥物的毒理作用時缺少了鱗片的保護黃鱔魚種更容易受到傷害［15］；體質(zhì)量大小的不一致也可能是導(dǎo)致三環(huán)唑藥物不同劑量的原因之一，因此黃鱔魚種的LC50為6.53 mg/L小于以上半致死濃度在影響因素內(nèi)。而且不同種之間的種間差異——主要體現(xiàn)在生理功能方面，在對藥物刺激的反應(yīng)上有著不同的應(yīng)答，在排毒時間、耐受性等方面的強弱造成藥物的安全濃度、半致死濃度、死亡濃度的差異都值得我們?nèi)パ芯?、探求?1］。

試驗測得的黃鱔魚種的96 h LC50為6.53 mg/ L，是在實驗室條件下獲得的數(shù)據(jù)，而野外環(huán)境中如pH值、溫度、溶氧等都和實驗室環(huán)境有著很大的差異且各種環(huán)境數(shù)據(jù)很不穩(wěn)定，這時黃鱔魚種的實際半致死濃度就會偏離實驗數(shù)據(jù)，因此實驗數(shù)據(jù)只能作為養(yǎng)殖用藥參考，在實際生產(chǎn)中我們要根據(jù)黃鱔魚種的具體中毒情形采取妥善的措施進行施救，挽回經(jīng)濟損失。

LC50值是評價外源化學(xué)物急性毒性的重要參數(shù)，但仍存在一定的局限性，主要表現(xiàn)在，消耗動物量大；獲得的信息有限，動物死亡和觀察的癥狀不足以反應(yīng)生理學(xué)、血液學(xué)和其他化驗檢查所提供的毒性信息；有許多因素影響LC50的測定，實際上測得的LC50是近似值［22］。因此，客觀性存在不足，還有不少值得推敲和深入探討之處，其需要在實踐中不斷的修改，加以完善。

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Acute toxicity of tricyclazole to Monopterus albus and its safety assessment

Hu Qiangdong1，Xiang Xiaoqin2
（1.Fisheries Bureau of Shizhongqu，Neijiang 641000，China；2.Institution of Hydrobiology，Chinese Academy of Science，Wuhan 430072，China）

At room temperature conditions［water temperature was（23±2）℃，pH value of 6.8，dissolved oxygen 4.6 mg/L］of treated water by using the hydrostatic test，the average weight of 8.7 g/fish for Monopterus albus tail tricyclazole acute toxicity test.The results showed that:the average mortality of the tested Monopterus albus was increased with the raise of concentrations of tricyclazole and the delay of saking time；24 h，48 h and 96 h median lethal concentration of 9.87 mg/L，8.36 mg/L，6.53 mg/L，the safe concentration was 0.653 mg/L.The results showed that:tricyclazole was very sensitive to Monopterus albus and the toxicity was middle level.

tricyclazole；Monopterus albus；acute toxicity；median lethal concentration

S966.4

A

1004-2091（2016）04-0012-04

胡錢東（1987-），男，碩士，專業(yè)方向為水產(chǎn)動物疾病與免疫.E-mail:hqd19871114@163.com

（2015-08-11）