丁曉帆，張端強(qiáng)，陸召軍，石　月，祖茂衡，徐　浩，高修銀

血清轉(zhuǎn)化生長因子β1、血管內(nèi)皮生長因子在布-加綜合征患者中的表達(dá)研究

丁曉帆1，張端強(qiáng)1，陸召軍1，石月1，祖茂衡2，徐浩2，高修銀1

目的 研究血清轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）在布-加綜合征（BCS）患者中的表達(dá)，探討其在BCS病情進(jìn)展中的作用。方法 選取101例BCS患者作為實(shí)驗(yàn)組，選取健康體檢者125例作為對照組。采用ELISA法檢測兩組人群血清TGF-β1、VEGF表達(dá)水平。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組血清TGF-β1、VEGF的含量高于對照組血清TGF-β1、VEGF的含量，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。實(shí)驗(yàn)組中單純BCS患者、BCS合并淤血性肝硬化患者、BCS合并肝癌患者血清TGF-β1、VEGF表達(dá)水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001），其中，BCS合并肝癌患者血清TGF-β1、VEGF水平高于BCS合并淤血性肝硬化患者，BCS合并淤血性肝硬化患者血清TGF-β1、VEGF水平高于單純BCS患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。BCS患者血清TGF-β1與VEGF呈正相關(guān)性（r=0.30，P=0.01）。結(jié)論 隨著BCS患者病情的進(jìn)展，患者血清TGF-β1、VEGF表達(dá)水平增高，兩因子的協(xié)同作用可能會加快病情的發(fā)展進(jìn)程。

布-加綜合征；轉(zhuǎn)化生長因子β1；血管內(nèi)皮生長因子；肝纖維化

網(wǎng)絡(luò)出版時間：2016-5-9 15：43：11 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20160509.1543.052.html

在我國，布-加綜合征（Budd-Chiari syndrome，BCS）表現(xiàn)為一種慢性疾病［1］，常由下腔靜脈和（或）肝靜脈阻塞導(dǎo)致肝纖維化，進(jìn)一步形成淤血性肝硬化，最終發(fā)展為肝癌［2］。近年來，在對肝臟疾病的研究中，細(xì)胞因子的作用越來越受關(guān)注。研究［3］表明，血清轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factor beta1，TGF-β1）、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是與肝臟纖維化發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的細(xì)胞因子。但以往多應(yīng)用于慢性肝炎導(dǎo)致的肝纖維化、肝硬化的研究，較少應(yīng)用于BCS的研究。該研究通過對血清TGF-β1、VEGF在BCS患者中表達(dá)的檢測，探討其在BCS病情進(jìn)展中的作用。

1　材料與方法

1.1病例資料 實(shí)驗(yàn)組為2013年11月～2014年11月徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院介入放射科收治的101例BCS患者，所選患者經(jīng)下腔靜脈和（或）肝靜脈造影確診，排除標(biāo)準(zhǔn)：病毒性肝炎、酒精性肝炎及其他肝病患者或其他肝纖維化病變者；肝癌以外的其他惡性腫瘤患者。對照組為同期該院體檢中心體檢的健康者125例，入選標(biāo)準(zhǔn)：肝、腎功能等血清學(xué)指標(biāo)正常，無酗酒史，無病毒性肝炎、免疫性肝炎等相關(guān)疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并肝纖維化相關(guān)疾病者；合并血栓、冠心病、糖尿病、腎病綜合征及腫瘤者。

1.2試劑與方法 實(shí)驗(yàn)組患者在介入手術(shù)前抽取下腔靜脈血液5 ml，置于5 ml分離膠-促凝管中，室溫靜置30 min，在4℃條件下以3 000 r/min離心15 min，將上層血清裝入1.5 ml EP管中，置于-80℃冰箱中冷藏保存。冷藏過程中避免反復(fù)取出血清樣本，反復(fù)凍融。采集符合入選條件的健康體檢者肘靜脈血5 ml于5 ml分離膠-促凝管中，血清分離方法同實(shí)驗(yàn)組。血清制備后，3個月內(nèi)采用ELISA法檢測TGF-β1、VEGF含量，實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行分析，呈正態(tài)分布的計量資料以±s表示。進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若方差齊，則兩組間指標(biāo)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，否則采用Satterthwaite近似t檢驗(yàn)；多組間比較方差齊時采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，否則采用Welth法，組間兩兩比較采用Dunnet′s T3檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson直線相關(guān)。

2　結(jié)果

2.1一般資料比較 101例BCS患者，男51例，女50例；年齡26～71（46.6±10.9）歲，其中，單純BCS患者53例，BCS合并淤血性肝硬化39例，BCS合并肝癌9例。125例正常對照者中，男67例，女58例；年齡28～77（46.4±8.8）歲。兩組在性別（Χ2= 0.216，P=0.642）、年齡（t=0.153，P=0.879）上具有可比性，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 TGF-β1、VEGF兩種因子ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線方程的r2分別為0.997 1、0.996 1（r2＞0.99），提示各標(biāo)準(zhǔn)品濃度與吸光度值呈高度相關(guān)性，試劑盒良好，符合實(shí)驗(yàn)要求。

2.3兩組TGF-β1、VEGF表達(dá)水平比較 實(shí)驗(yàn)組血清TGF-β1、VEGF含量均高于對照組，兩組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1　實(shí)驗(yàn)組和對照組血清TGF-β1、VEGF表達(dá)水平比較（ng/L，±s）

表1　實(shí)驗(yàn)組和對照組血清TGF-β1、VEGF表達(dá)水平比較（ng/L，±s）

項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)組（n=101）對照組（n=125）t值P值TGF-β1618.8±105.1471.6±61.813.1＜0.001 VEGF981.4±151.5684.1±71.819.4＜0.001

2.4實(shí)驗(yàn)組中單純BCS患者、BCS合并淤血性肝硬化患者、BCS合并肝癌患者血清TGF-β1、VEGF表達(dá)水平比較 血清TGF-β1、VEGF在單純BCS患者、BCS合并淤血性肝硬化患者、BCS合并肝癌患者中比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。其中，BCS合并肝癌患者血清TGF-β1、VEGF水平均高于BCS合并淤血性肝硬化患者，BCS合并淤血性肝硬化患者血清TGF-β1、VEGF水平均高于單純BCS患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

2.5相關(guān)性分析 對實(shí)驗(yàn)組血清TGF-β1、VEGF水平進(jìn)行相關(guān)性分析得出：TGF-β1和VEGF呈正相關(guān)性（r=0.30，P=0.01）。

3　討論

BCS患者因下腔靜脈、肝靜脈以及副肝靜脈的不同程度阻塞，導(dǎo)致其肝臟呈不同程度的淤血狀態(tài)。長期的淤血狀態(tài)引起肝臟局部發(fā)生慢性缺血低氧，進(jìn)而導(dǎo)致肝細(xì)胞變性壞死，纖維組織和再生結(jié)節(jié)代替壞死肝細(xì)胞，逐漸發(fā)展為肝纖維化和淤血性肝硬化，最終導(dǎo)致肝癌的發(fā)生［4-5］。研究［6］表明BCS是發(fā)生淤血性肝硬化和肝癌的獨(dú)立危險因素，而且大多數(shù)的BCS患者并沒有病毒性肝炎、酒精性肝炎、中毒等其他直接損傷肝臟的因素存在［7］，因此肝臟的長期淤血、肝細(xì)胞的低氧狀態(tài)是BCS發(fā)生淤血性肝硬化甚至肝癌的重要危險因素。TGF-β1和VEGF作為肝纖維化發(fā)展至肝硬化乃至肝癌的重要細(xì)胞因子，目前較少用于BCS導(dǎo)致的淤血性肝硬化及肝癌研究中，因此，本研究主要分析BCS患者不同病程階段的血清TGF-β1和VEGF表達(dá)水平，探討其在BCS病情發(fā)展中的作用。

李曉虹等［3］對乙肝患者、乙肝導(dǎo)致的肝纖維化及肝硬化患者進(jìn)行血清TGF-β1水平的研究，結(jié)果顯示：隨著病情的發(fā)展，患者血清TGF-β1水平逐漸升高。也有學(xué)者實(shí)驗(yàn)［8］顯示，增加TGF-β1的表達(dá)可顯著加快肝纖維化的發(fā)展進(jìn)展，相反，若抑制TGF-β1的合成或阻斷其信號通路可預(yù)防并減少各種肝纖維化模型的形成。本研究結(jié)果顯示：BCS患者隨著單純BCS、淤血性肝硬化至肝癌的發(fā)展，血清TGF-β1水平逐漸升高，且高于正常人群。分析其原因可能是，因下腔靜脈和肝靜脈的阻塞，BCS患者的肝臟表現(xiàn)為慢性缺血低氧，肝細(xì)胞發(fā)生持續(xù)性損傷和炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步導(dǎo)致肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell，HSC）、庫普弗（Kupfffer）細(xì)胞產(chǎn)生TGF-β1。隨著BCS患者病情進(jìn)一步加重，肝組織呈現(xiàn)為更嚴(yán)重的缺血低氧，促使存活的肝細(xì)胞和HSC合成分泌更多的TGF-β1，HSC的持續(xù)活化，使細(xì)胞外基質(zhì)不斷沉積，最終推進(jìn)BCS病情發(fā)展。

VEGF在血管再生中發(fā)揮著重要的作用，能夠特異性地促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖，增加血管的通透性，是目前為止最受重視的血管生成因子之一［9］。有關(guān)于VEGF與肝纖維化發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)報道很多，隨著肝纖維、肝硬化、肝癌病程的不斷發(fā)展，VEGF的表達(dá)逐漸增強(qiáng)，這點(diǎn)在醫(yī)學(xué)界已達(dá)成共識。本研究結(jié)果顯示：BCS患者隨著淤血性肝硬化乃至肝癌的不斷發(fā)展，血清VEGF水平逐漸升高，且高于正常人群，與以往研究［10-11］結(jié)果一致，分析其原因可能是：BCS患者肝靜脈和（或）下腔靜脈不同程度的阻塞，使肝靜脈回流壓力逐漸增大，導(dǎo)致肝臟呈現(xiàn)淤血狀態(tài)并出現(xiàn)缺血低氧刺激活化HSC，進(jìn)而通過自分泌和旁分泌的途徑產(chǎn)生細(xì)胞因子，從而引起VEGF表達(dá)增高。至淤血性肝硬化階段，肝組織缺血低氧進(jìn)一步加重，肝細(xì)胞壞死進(jìn)一步增多，釋放更多的炎性介質(zhì)，刺激HSC合成分泌更多的VEGF。這些結(jié)果表明，VEGF參與BCS患者淤血性肝硬化甚至肝癌的發(fā)生，提示從BCS患者肝臟纖維結(jié)締組織增生到腫瘤的形成過程，血管形成起著推動作用。

表2　單純BCS患者、BCS合并淤血性肝硬化患者、BCS合并肝癌患者血清TGF-β1、VEGF表達(dá)水平比較（ng/L，±s）

表2　單純BCS患者、BCS合并淤血性肝硬化患者、BCS合并肝癌患者血清TGF-β1、VEGF表達(dá)水平比較（ng/L，±s）

與單純BCS比較：*P＜0.05，與BCS合并淤血性肝硬化比較：#P＜0.05

項(xiàng)目單純BCS（n=53）BCS合并淤血性肝硬化（n=39）BCS合并肝癌（n=9）F值P值TGF-β1585.7±118.3636.4±67.6*737.3±27.2*#10.6＜0.001 VEGF898.1±121.11031.7±121.6*1224.5±71.9*#15.7＜0.001

本研究的相關(guān)性分析得出：BCS患者血清TGF-β1和VEGF呈正相關(guān)性，這與李曉虹等［3］的研究結(jié)果一致。李東等［12］也指出：肝纖維化患者血清VEGF與TGF-β1水平呈正相關(guān)性，兩者聯(lián)合檢測可作為診斷及判斷病情的血清學(xué)指標(biāo)。結(jié)合BCS血清TGF-β1和VEGF隨著病情進(jìn)展逐漸升高，可以推斷這兩種因子的協(xié)同作用可能加快了BCS病情的發(fā)展。

綜上所述，隨著BCS患者病情的進(jìn)展，患者血清TGF-β1、VEGF表達(dá)水平增高，兩因子的協(xié)同作用可能會加快病情的發(fā)展進(jìn)程。因此，在臨床診療中，及早發(fā)現(xiàn)BCS患者血清TGF-β1、VEGF表達(dá)異常，在進(jìn)行介入治療的同時，應(yīng)盡早結(jié)合抗肝纖維化治療，及時解除肝臟的淤血性損傷，對延緩患者肝臟的損傷，減少BCS患者淤血性肝硬化甚至肝癌的發(fā)生有重要意義。

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Analysis of the expression of transforming growth factor-β1 and vascular endothelial growth factor in Budd-Chiari syndrome

Ding Xiaofan，Zhang Duanqiang，Lu Zhaojun，et al
（School of Public Health，Xuzhou Medical College，Xuzhou 221004）

Objective To study the expression of transforming growth factor-β1（TGF-β1）and vascular endothelial growth factor（VEGF）in Budd-Chiari syndrome，and to explore whether serum TGF-β1 and VEGF play important roles in the progression of Budd-Chiari syndrome.Methods There were 101 cases of Budd-Chiari syndrome in the experimental group.During the same period，125 controls were recruited from the medical examination center.The serum concentrations of TGF-β1 and VEGF were detected by ELISA.Results The serum concentrations of TGF-β1 and VEGF in the experimental group were higher than those in the control group（P＜0.001）.In the BCS group，the serum concentrations of TGF-β1 and VEGF were different significantly between pure BCS patients，BCS with stasis cirrhosis patients and BCS with hepatic carcinoma patients（P＜0.001）.Among them，the serum concentrations of the two factors of BCS with hepatic carcinoma patients were higher than BCS with stasis cirrhosis patients，and the latter was higher than the pure BCS patients（P＜0.05）.The serum TGF-β1 and VEGF were positive correlated in the BCS group（r=0.30，P=0.01）.Conclusion The serum concentrations of TGF-β1 and VEGF increase with the progression of BCS，and the synergistic effect between TGF-β1 and VEGF may accelerate the development of BCS.

Budd-Chiari syndrome；transforming growth factor β1；vascular endothelial growth factor；liver fibrosis

R 575

A

1000-1492（2016）06-0877-04

2016-03-04接收

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（編號：81172604）

1徐州醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，徐州 2210042徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院介入放射科，徐州 221002

丁曉帆，女，碩士研究生；高修銀，男，教授，碩士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：xzgxy888 @163.com