羅燕芬，李有強(qiáng)，區(qū)頌邦，肖　倩，鄧光遠(yuǎn)，許振杰，王麗娜，李　沫，陳　茶△

(1.廣東省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣州 510000；2.中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院，廣州 510000)

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Sebia Minicap全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀檢測(cè)糖化血紅蛋白的性能評(píng)價(jià)

羅燕芬1，李有強(qiáng)1，區(qū)頌邦2，肖倩1，鄧光遠(yuǎn)1，許振杰1，王麗娜1，李沫1，陳茶1△

(1.廣東省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣州 510000；2.中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院，廣州 510000)

目的評(píng)價(jià)Sebia Minicap Flex Piercing全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀檢測(cè)糖化血紅蛋白(HbA1c)的檢測(cè)性能。方法根據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)的相關(guān)文件及其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)該檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)HbA1c的精密度、準(zhǔn)確度、攜帶污染率和參考區(qū)間指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)，同時(shí)與Premier Hb 9210糖化血紅蛋白儀檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行一致性驗(yàn)證。結(jié)果該檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)高低兩個(gè)濃度的HbA1c的批內(nèi)精密度分別為1.2%和0.74%；準(zhǔn)確度驗(yàn)證其與Premier Hb 9210糖化血紅蛋白儀相關(guān)性較好，r2為0.990 26，相對(duì)偏倚<5%；攜帶污染率為0.99%。結(jié)論Sebia Minicap Flex Piercing全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀檢測(cè)HbA1c主要儀器性能達(dá)到CLSI指南和廠家說(shuō)明書(shū)的要求，可滿足臨床檢測(cè)需求。

全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀；糖化血紅蛋白；性能評(píng)價(jià)

糖化血紅蛋白(HbA1c)是血紅蛋白與血糖進(jìn)行不可逆非酶促反應(yīng)的產(chǎn)物，可以反映近2～3個(gè)月血糖的水平，是判斷糖尿病長(zhǎng)期控制的良好指標(biāo)，是世界衛(wèi)生組織(WHO)、美國(guó)糖尿病學(xué)會(huì)(ADA)及多個(gè)國(guó)際組織推薦的糖尿病診斷和監(jiān)測(cè)的指標(biāo)[1-3]。HbA1c的檢測(cè)有多種方法，其結(jié)果的可靠性與準(zhǔn)確性是臨床應(yīng)用中首要考慮的關(guān)鍵。本科室近期新引進(jìn)一臺(tái)法國(guó)Sebia Minicap Flex Piercing全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀用于HbA1c的檢測(cè)，其分辨率高于傳統(tǒng)的離子交換色譜法和瓊脂糖電泳。目前國(guó)內(nèi)尚缺乏該型號(hào)儀器的性能評(píng)估報(bào)告，因此，本研究參考美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)的相關(guān)文件，對(duì)該儀器檢測(cè)HbA1c的主要性能指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證和評(píng)估。

1　資料與方法

1.1一般資料準(zhǔn)確度驗(yàn)證:收集臨床患者標(biāo)本40份，標(biāo)本中分析物濃度覆蓋高、中、低3個(gè)水平。參考區(qū)間驗(yàn)證則收集健康人標(biāo)本20份。標(biāo)本采用EDTA-K2抗凝管采集，標(biāo)本均無(wú)溶血、黃疸和脂血。

1.2儀器與試劑實(shí)驗(yàn)方法的儀器為法國(guó)Sebia Minicap Flex Piercing全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀(法國(guó)Sebia公司)，采用Minicap FP HbA1C試劑盒和minicap FP HbA1C質(zhì)控品。比較方法采用Premier Hb9210糖化血紅蛋白儀(美國(guó)Primus公司)及配套的試劑和質(zhì)控品。

1.3方法

1.3.1精密度驗(yàn)證應(yīng)用EP15-A2文件使用高低兩個(gè)濃度水平的Minicap FP HbA1C質(zhì)控品，每天分析1個(gè)批次，各測(cè)定3次，每次2個(gè)通道同時(shí)運(yùn)行，連續(xù)測(cè)定5 d。根據(jù)文件要求對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算出精密度，要求精密度符合廠商聲明(CV≤2%)。

1.3.2準(zhǔn)確度驗(yàn)證參照EP9-A2文件，將Sebia Minicap Flex Piercing全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀檢測(cè)系統(tǒng)與Premier Hb9210糖化血紅蛋白儀檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行可比性試驗(yàn)，Premier Hb9210糖化血紅蛋白檢測(cè)系統(tǒng)為比較系統(tǒng)。每天抽取8份標(biāo)本，標(biāo)本濃度覆蓋高、中、低3個(gè)水平，每個(gè)標(biāo)本分別在上述兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)中進(jìn)行測(cè)定，標(biāo)本按一定順序排列先測(cè)一遍，然后將順序顛倒過(guò)來(lái)做第2次檢測(cè)，取兩次檢測(cè)平均值作為最終檢測(cè)值。連續(xù)測(cè)定5 d。根據(jù)文件要求計(jì)算相關(guān)系數(shù)(r2) 和回歸方程，并對(duì)HbA1c的醫(yī)學(xué)決定水平進(jìn)行偏倚評(píng)估。

1.3.3攜帶污染率的驗(yàn)證取本次試驗(yàn)的較高值14.2%和較低值4.1%標(biāo)本各1份，首先連續(xù)測(cè)定高值標(biāo)本3次(H1、H2、H3)，隨后立即連續(xù)測(cè)定低值標(biāo)本3次(L1、L2、L3)，記錄所有數(shù)據(jù)，按下列公式計(jì)算：攜帶污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%。

1.3.4參考區(qū)間的驗(yàn)證參照CLSI C28-A2文件，采用本系統(tǒng)檢測(cè)20份健康人標(biāo)本，采用“1/3”規(guī)則進(jìn)行離群值檢驗(yàn)，剔除離群值，并用新的參考個(gè)體代替。若20 份標(biāo)本中不超過(guò)2 份標(biāo)本的檢測(cè)值超出參考區(qū)間， 則現(xiàn)行的參考區(qū)間可以接受。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 19.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和統(tǒng)計(jì)分析。

2　結(jié)　　果

2.1精密度驗(yàn)證結(jié)果采用高低兩個(gè)濃度的HbA1c質(zhì)控品進(jìn)行精密度驗(yàn)證，結(jié)果如表1所示。參照CLSI EP15-A2文件的要求，兩個(gè)水平質(zhì)控品精密度均符合要求。

表1　　Sebia Minicap Flex Piercing全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀精密度驗(yàn)證結(jié)果

2.2準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果采用實(shí)驗(yàn)室中經(jīng)過(guò)性能驗(yàn)證的Premier Hb9210糖化血紅蛋白儀作為比對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行可比性試驗(yàn)，排除離群值后，計(jì)算回歸方程和r2，結(jié)果見(jiàn)圖1?；貧w方程：Y=1.012 5X-0.001 85，r2=0.990 26>0.95，說(shuō)明兩種方法相關(guān)性良好，檢測(cè)結(jié)果具有可比性，能保證臨床結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。將醫(yī)學(xué)決定水平處的值10%和16%代入回歸方程計(jì)算相對(duì)偏倚，結(jié)果見(jiàn)表2，可見(jiàn)相對(duì)偏倚均小于原衛(wèi)生部臨檢中心允許總誤差(TEa)的1/2，結(jié)果可接受。

2.3攜帶污染率按照1.3.3公式計(jì)算測(cè)得的數(shù)據(jù)，結(jié)果見(jiàn)表3，可見(jiàn)Sebia Minicap Flex Piercing全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀的攜帶污染率為0.99%，在相關(guān)文件要求的攜帶污染率范圍內(nèi)，保證了檢測(cè)系統(tǒng)在檢測(cè)臨床標(biāo)本時(shí)標(biāo)本之間攜帶污染小，結(jié)果可靠。

圖1　　兩種檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)HbA1c的相關(guān)分析圖

表2　　兩種檢測(cè)系統(tǒng)比對(duì)結(jié)果

表3　　Sebia Minicap全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀檢測(cè)HbA1c的攜帶污染率

2.4參考區(qū)間驗(yàn)證檢測(cè)結(jié)果表明， HbA1c的檢測(cè)結(jié)果落在當(dāng)前使用的參考區(qū)間內(nèi)(3%～6%)，說(shuō)明該檢測(cè)系統(tǒng)符合要求。

3　討　　論

HbA1c不僅是WHO推薦的糖尿病診斷指標(biāo)，也是糖尿病血糖控制和糖尿病治療方案有效性監(jiān)測(cè)的重要指標(biāo)[3]，因此，無(wú)論是早期篩查還是患病期間的監(jiān)控，對(duì)HbA1c進(jìn)行檢測(cè)都具有重要的意義。

HbA1c的檢測(cè)方法有多種，大致可分為以下幾種：第1 種是依據(jù)糖化、非糖化血紅蛋白帶電荷的差異；第2種是基于糖化的血紅蛋白基團(tuán)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)；第3種是抗原抗體反應(yīng)的原理；第4 種是免疫反應(yīng)和電化學(xué)相結(jié)合的傳感器方法；第5種是床邊檢測(cè)的方法[4]。本實(shí)驗(yàn)室新引進(jìn)的Sebia Minicap Flex Piercing全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀是依據(jù)糖化和非糖化血紅蛋白所帶的電荷不同進(jìn)行分離，根據(jù)《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室——質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》(ISO15189)的規(guī)定，臨床實(shí)驗(yàn)室在建立或引進(jìn)新的檢驗(yàn)儀器和檢驗(yàn)項(xiàng)目時(shí)應(yīng)對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)的性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，以判斷其能否滿足臨床使用要求[5]。相同檢測(cè)項(xiàng)目在不同檢測(cè)系統(tǒng)間結(jié)果的互認(rèn)是檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)一致化和標(biāo)準(zhǔn)化的目標(biāo)，也是循證檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的要求[6]。因此，本研究對(duì)該系統(tǒng)的精密度、準(zhǔn)確度、攜帶污染率進(jìn)行驗(yàn)證和評(píng)估。

精密度是用來(lái)表示一系列重復(fù)測(cè)定結(jié)果分散程度的量值。美國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)于2010年明確提出了HbA1c測(cè)定的總不精密度的接受標(biāo)準(zhǔn)，即允許誤差標(biāo)準(zhǔn)≤5%[2]，美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)文件也要求批內(nèi)CV和批間CV均小于5%。從表1可看出，該檢測(cè)系統(tǒng)的批內(nèi)精密度分別為1.2%和0.74%，均<5%，符合文件要求和廠家聲明的精密度(≤2%)。與李卿等[7]報(bào)道的8通道毛細(xì)管電泳儀結(jié)果基本一致。

準(zhǔn)確度是一定條件下多次測(cè)定的均值與真值相符合的程度。本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確度驗(yàn)證是通過(guò)方法學(xué)的比對(duì)試驗(yàn)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，將應(yīng)用HPLC原理的Premier Hb9210糖化血紅蛋白儀檢測(cè)系統(tǒng)作為比較方法(HPLC法是檢測(cè)HbA1c的“金標(biāo)準(zhǔn)”)，計(jì)算回歸方程及r2。從圖1可得知，兩種檢測(cè)系統(tǒng)的相關(guān)性良好，r2>0.95。將醫(yī)學(xué)決定水平處的值代入回歸方程中(表2)，得知比對(duì)項(xiàng)目的相對(duì)偏倚均小于原衛(wèi)生部臨檢中心要求的TEa的1/2，因此可認(rèn)為該檢測(cè)系統(tǒng)與Premier Hb9210糖化血紅蛋白儀檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)數(shù)據(jù)具有可比性。

攜帶污染率是不同標(biāo)本間連續(xù)測(cè)定的影響，主要是高濃度標(biāo)本對(duì)低濃度標(biāo)本的影響。本實(shí)驗(yàn)中，該檢測(cè)系統(tǒng)的攜帶污染率為0.99%，在允許范圍內(nèi)，表明該檢測(cè)系統(tǒng)的攜帶污染率極小，不會(huì)對(duì)臨床標(biāo)本的檢測(cè)造成影響，與其他糖化檢測(cè)系統(tǒng)相當(dāng)[8-9]。

本文參照C28-A2文件要求對(duì)現(xiàn)行使用的參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證。檢測(cè)結(jié)果表明，90%以上的檢測(cè)結(jié)果落在當(dāng)前使用的參考區(qū)間內(nèi)，說(shuō)明現(xiàn)行使用的參考區(qū)間在Sebia Minicap Flex Piercing全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀檢測(cè)系統(tǒng)上符合要求。

綜上所述，Sebia Minicap Flex Piercing全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀檢測(cè)HbA1c在精密度、準(zhǔn)確度和攜帶污染率和參考區(qū)間方面均符合CLSI文件要求，且與廠商規(guī)定的分析性能基本一致，可滿足臨床檢測(cè)的需要。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.16.037

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1673-4130(2016)16-2299-02

2016-01-28

2016-03-27)