王玉霞，姜　威，劉宇帥，孟利強(qiáng)，李　晶曹　旭，胡基華，陳靜宇，張淑梅*

（1.黑龍江省科學(xué)院微生物研究所，哈爾濱　150010；2.黑龍江省科學(xué)院高技術(shù)研究院，哈爾濱　150020）

寒地耐冷生防菌株篩選鑒定及特性研究

王玉霞1,2，姜威1,2，劉宇帥1,2，孟利強(qiáng)1,2，李晶1,2曹旭1,2，胡基華1，陳靜宇1，張淑梅1,2*

（1.黑龍江省科學(xué)院微生物研究所，哈爾濱150010；2.黑龍江省科學(xué)院高技術(shù)研究院，哈爾濱150020）

試驗(yàn)分離鑒定黑龍江省鶴崗地區(qū)玉米根圍凍土中生防菌株wswshg-10，并檢測其低溫生長特性、分泌活性物質(zhì)能力、拮抗病原菌活性及催芽促生特性。綜合形態(tài)和理化特性、16S rDNA和gyrB基因序列分析將其鑒定為甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌Bacillus methylotrophicus。該菌株在4～15℃低溫及20～30℃常溫范圍內(nèi)可正常生長，是一株耐冷生防菌株，分泌幾丁質(zhì)酶、纖維素酶、蛋白酶、嗜鐵素、吲哚乙酸、抗菌蛋白等多種活性物質(zhì)，抑制煙草角斑病菌、玉米莖基腐病菌、黃瓜枯萎病菌、大豆菌核病菌、水稻惡苗和稻曲病菌、番茄灰霉病菌以及刺五加根腐病菌生長，抑制率74.3%～89.2%。菌液處理玉米種子能促進(jìn)種子萌發(fā)及幼苗生長，根長和莖長顯著增加。該菌株具有低溫生長、抗菌促生特性，為低溫菌劑研發(fā)提供菌株資源。

寒地；耐冷生防菌；鑒定；特性

網(wǎng)絡(luò)出版時間2016-8-24 15:04:00[URL]http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20160824.1504.008.html

王玉霞,姜威,劉宇帥,等.寒地耐冷生防菌株篩選鑒定及特性研究[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2016,47(8):31-38.

Wang Yuxia,Jiang Wei,Liu Yushuai,et al.Study on isolation and characterization of a psychrotrophic antagonistic bacterium from cold area[J].Journal of Northeast Agricultural University,2016,47(8):31-38.(in Chinese with English abstract)

低溫菌在自然界中分布廣泛，主要包括嗜冷菌（Psychrophilies）和耐冷菌（Psychrotrophic）。嗜冷菌主要分布于常冷環(huán)境，生長溫度為0～20℃，耐冷菌從常冷到不穩(wěn)定低溫環(huán)境中均有分布，在0～ 5℃可生長，最高生長溫度高于20℃[1]。低溫菌以獨(dú)特的生理功能適應(yīng)環(huán)境，是一類重要菌株資源。目前，低溫菌研究主要側(cè)重于環(huán)境污染治理[2-4]、食品開發(fā)[5]、工業(yè)發(fā)酵[6]及農(nóng)業(yè)廢棄物降解等領(lǐng)域[7-9]，生防領(lǐng)域研究較少，國內(nèi)僅謝永麗和劉芳等從青海和西藏分離到低溫適生生防芽孢桿菌[10-12]。黑龍江省微生物肥料和農(nóng)藥用量逐年增大。然而，黑龍江省低溫時間長，春播時土壤溫度偏低（約15℃），生防菌生存環(huán)境差，生防效果不佳。迄今為止，國內(nèi)尚無低溫菌微生物肥料和農(nóng)藥產(chǎn)品。

本研究基于黑龍江省特有寒地氣候和低溫微生物資源豐富等條件，篩選低溫生防菌株，通過形態(tài)和生理生化特性以及16S rDNA和gyrB基因序列分析確定其種屬地位，檢測分泌活性代謝產(chǎn)物能力和低溫生長特性，確定其對植物病原菌抑制效果及對玉米種子萌發(fā)影響，為低溫生防菌株應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1供試菌株

植物病原細(xì)菌煙草角斑病菌（Pseudomonas sy?ringae）和植物病原真菌大豆菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum）、水稻惡苗病菌（Fusarium monili?forme）、水稻稻曲病菌（Ustilaginoidea oryzae）、黃瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum）、玉米莖基腐病菌（Fusarium graminearum）、刺五加根腐病菌（Rhi?zoctonia solani）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、大豆根腐病菌（Pythium spp.）均由黑龍江省生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室保存。

1.2耐冷生防菌篩選

從黑龍江省鶴崗地區(qū)玉米根部凍土中分離篩選耐冷生防菌。取10 g土樣研磨后加入裝有100 mL無菌水三角瓶中，10℃震蕩3 h，倍比稀釋至10-7，取10-6和10-7稀釋液各100 μL分別涂布LB平板，10℃溫箱培養(yǎng)直至菌落生長。挑取不同形態(tài)單菌落劃線純化后，以Fusarium oxysporum為指示菌采用平板對峙方法篩選生防菌株。

1.3菌株鑒定

1.3.1形態(tài)和生理生化特性鑒定

采用LB培養(yǎng)基10℃培養(yǎng)菌株3 d，通過革蘭氏染色觀察菌體和芽孢形態(tài)。參照伯杰細(xì)菌鑒定手冊測定生理生化特性，包括葡萄糖發(fā)酵、MR、VP、氧化酶、接觸酶、淀粉水解、明膠液化、尿素酶、檸檬酸鹽利用、硝酸鹽還原、石蕊牛奶、吲哚反應(yīng)，7%NaCl生長，pH 5.7生長。

1.3.216S rDNA序列鑒定

以基因組DNA為模板，選用細(xì)菌通用引物27F：5'AGAGTTTGATCMTGGCTCAG 3'和1 492R: 5'GGYTACCTTGTTACGACTT 3'擴(kuò)增16S rDNA基因。PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min；95℃變性30 s，50℃退火1 min，72℃延伸1.5 min，35個循環(huán)；72℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物純化后測序，所得序列在NCBI數(shù)據(jù)庫中作BLAST比對，MEGA5.1軟件進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。

1.3.3gyrB基因序列鑒定

選用引物UP1：5'GAAGTCATCATGACCGTTC TGCAYGCNGGNGGNAARTTYGA 3'和UP2r:5'AG CAGGGTACGGATGTGCGAGCCRTCNACRTNGCR?TCNGTCAT 3'從基因組DNA中擴(kuò)增gyrB基因[10]。PCR擴(kuò)增條件參照文獻(xiàn)[13]。PCR產(chǎn)物純化后測序，將序列在NCBI上作BLAST比對，MEGA5.1軟件進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。

1.4菌株特性

1.4.1噬鐵素檢測

采用CAS平板法檢測菌株是否分泌噬鐵素[14]。取10 μL菌液接種于CAS平板上，10℃溫箱培養(yǎng)3～7 d，觀察有無酶解圈。

1.4.2幾丁質(zhì)酶檢測

采用幾丁質(zhì)酶檢測培養(yǎng)基檢測菌株是否分泌幾丁質(zhì)酶。取10 μL菌液接種幾丁質(zhì)酶檢測培養(yǎng)基（膠體幾丁質(zhì)1%，蛋白胨0.2%，酵母粉0.2%，硫酸鎂0.02%，硫酸鐵0.001%，磷酸氫二鉀0.07%，磷酸二氫鉀0.03%，瓊脂粉2%），10℃培養(yǎng)3～7 d，觀察有無酶解圈。

1.4.3纖維素酶檢測

采用纖維素剛果紅培養(yǎng)基檢測菌株是否分泌纖維素酶，取10 μL菌液接種纖維素剛果紅培養(yǎng)基（硫酸銨0.2%，磷酸二氫鉀0.1%，氯化鈉0.05%，纖維素粉2%，剛果紅0.02%，瓊脂粉2%），10℃培養(yǎng)3～7 d，觀察有無酶解透明。

1.4.4蛋白酶檢測

采用蛋白酶檢測培養(yǎng)基檢測菌株是否分泌蛋白酶。取10 μL菌液接種蛋白酶檢測培養(yǎng)基平板上（脫脂奶粉1%，牛肉膏0.3%，蛋白胨1%，氯化鈉0.5%），10℃培養(yǎng)3～7 d，觀察有無酶解圈。

1.4.5吲哚乙酸檢測

采用LB培養(yǎng)基10℃培養(yǎng)菌株3～7 d，取菌懸液50 μL滴入白色搪瓷盤中，加入50 μL Salkowski比色液（50 mL 35%HClO4+1 mL 0.5 mol·L-1Fe?Cl3），室溫避光30 min后觀察顏色變化，以不加比色液作對照，顏色變粉紅表示分泌吲哚乙酸，不變色表示不分泌吲哚乙酸。

1.4.6抗菌蛋白檢測

采用LB培養(yǎng)液10℃培養(yǎng)菌株3 d，4 000 r·min-1離心，收集上清液，采用硫酸銨分級沉淀方法獲得抗菌蛋白，先加硫酸銨至30%飽和度，4℃過夜沉淀，10 000 r·min-1離心20 min，收集沉淀，得沉淀I。上清液依次加入硫酸銨至50%、70%和90%飽和度，4℃過夜沉淀，10 000 r·min-1離心20 min，收集沉淀Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ，0.02 mol·L-1PBS pH 8.0緩沖液溶解，透析除鹽，濃縮后以Fusarium oxysporum為指示菌對峙培養(yǎng)方法檢測抑菌活性。

1.5菌株抑菌活性檢測

1.5.1對煙草角斑病菌的抑菌活性

取病原細(xì)菌菌液100 μL涂布LB平板，平板中心放置無菌鋼圈，鋼圈中加入10 μL生防菌液，15℃培養(yǎng)3～7 d，觀察有無抑菌圈。

1.5.2對植物病原真菌的抑菌活性

采用菌絲生長速率法檢測生防菌對8種植物病原真菌抑菌活性。取100 μL生防菌液涂布PDA平板，平板中心接種活化后直徑5 mm病原菌塊，以不接種生防菌作對照，每個處理3次重復(fù)，15℃培養(yǎng)3～7 d，測定抑菌圈直徑，按下列公式計(jì)算抑菌率。抑菌率（%）=（對照真菌直徑-處理真菌直徑）/對照真菌直徑×100%。

1.6菌株適生溫度檢測

將活化后菌株按1%接種量接種到50 mL LB液體培養(yǎng)基中，分別置于4、10、15、20、25、30℃培養(yǎng)3 d，間隔12 h測定菌密度，每個處理3次重復(fù)。

1.7菌株對玉米種子催芽作用

采用LB液體培養(yǎng)基10℃培養(yǎng)菌株3 d，測定菌數(shù)后用無菌水稀釋至107cfu·mL-1，選取100粒玉米種子放入50 mL稀釋液中浸泡4 h，取出后將種子放在潤濕濾紙上，將濾紙放在搪瓷盤中28℃培養(yǎng)2 d，記錄萌發(fā)種子數(shù)，5 d后測量根長和芽長，LB培養(yǎng)液浸種作對照，每個處理3次重復(fù)。

2　結(jié)果與分析

2.1耐冷生防菌株篩選

基于不同菌落形態(tài)，分離到22株耐冷細(xì)菌，以Fusarium oxysporum為指示菌，篩選出1株顯著抑制其生長的生防菌株wswhg-10（見圖1）。

圖1　低溫耐冷生防菌株篩選Fig.1　Screening of psychrotrophicw asnwtsahgogn-i1st0ic bacteria against Fusarium oxysporum

2.2菌株鑒定

2.2.1形態(tài)及生理生化鑒定

菌株wswhg-10革蘭氏陽性、中生芽孢、菌體桿狀、單獨(dú)或成對排列（見圖2）。LB培養(yǎng)基上菌落乳白色、褶皺，近圓形。氧化酶、接觸酶、MR、VP、檸檬酸鹽利用、硝酸鹽還原、明膠液化、淀粉水解、石蕊牛奶和吲哚反應(yīng)均為陽性，葡萄糖發(fā)酵、尿素酶反應(yīng)陰性，7%NaCl和pH 5.7生長（見表1）。與甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌模式菌株CBMB205T特性基本一致[15]。

圖2　菌株wswhg-10菌體與芽孢形態(tài)(1 500×)Fig.2　Morphology of strain wswhg-10

表1　 菌株wswshg-10生理生化特性Table 1　Physiological and biochemical characteristics of strain wswhg-10

2.2.216S rDNA序列分析

應(yīng)用細(xì)菌16S rDNA通用引物擴(kuò)增得到1 400 bp DNA片段，測序后在NCBI數(shù)據(jù)庫中作Blast比對，與芽孢桿菌屬10株模式菌株同源性為99%，系統(tǒng)進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)與B.methylotrophicus CBMB205T在同一分支（見圖3），說明與B.methylotrophicus親緣關(guān)系最近。

2.2.3gyrB基因序列分析

從基因組DNA中PCR擴(kuò)增得到1 200 bp DNA片段，測序后在NCBI數(shù)據(jù)庫中作Blast比對，與B. subtilis、B.methylotrophicus和B.amyloliquefaciens同源性較高為99%，系統(tǒng)進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)與B.methylo?trophicus YJ11-1-4在同一分支（見圖4），說明與B. methylotrophicus親緣關(guān)系最近。

16S rDNA序列分析已廣泛應(yīng)用在屬水平菌株鑒定，gyrB基因能將同屬近似種菌株有效區(qū)分，兩者結(jié)合可確保菌株鑒定有效性。經(jīng)形態(tài)、生理生化和分子鑒定，菌株wswshg-10鑒定為甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌B.methylotrophicus。

圖3　基于16S rDNA基因序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.3　Phylogenetic tree based on 16S rDNA gene sequence

圖4　基于gyrB基因序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.4　Phylogenetic tree based on gyrB gene sequence

2.3菌株特性

利用特異檢測培養(yǎng)基定性分析菌株wswhg-10分泌嗜鐵素、幾丁質(zhì)酶、纖維素酶、蛋白酶和吲哚乙酸能力。菌株wswhg-10在含有膠體幾丁質(zhì)、蛋白和纖維素培養(yǎng)基上形成透明圈，說明該菌株生長過程中分泌幾丁質(zhì)酶、蛋白酶和纖維素酶（見圖5B、C、D）。在CAS-平板上菌落周圍變橙色，培養(yǎng)5 d的菌液加入Salkowski比色液后變成粉紅色，說明菌株產(chǎn)生嗜鐵素和吲哚乙酸（見圖5A、E）。采用硫酸銨分級沉淀方法從無菌發(fā)酵液中收集4個沉淀，以Fusarium oxysporum為指示菌檢測沉淀抑菌活性，結(jié)果見圖5F，沉淀Ⅰ（30%硫酸銨沉淀）無抑菌活性，沉淀Ⅱ（30%～50%硫酸銨）、沉淀Ⅲ（50%～70%硫酸銨）和沉淀Ⅳ（70%～90%硫酸銨）均有抑菌活性，沉淀Ⅲ抑菌活性較大，說明該菌株可產(chǎn)生多種抗菌蛋白。

2.4抑菌活性

2.4.1對煙草角斑病菌抑菌活性

將生防菌wswhg-10與病原細(xì)菌共培養(yǎng)5 d，在生防菌周圍有明顯抑菌圈，抑菌圈直徑3.8 cm（見圖6），結(jié)果說明菌株wswshg-10對煙草角斑病菌具有較強(qiáng)抑制作用。

圖5　菌株wswshg-10特性Fig.5　Characteristics of strain wswshg-10

圖6　菌株wswshg-10對煙草角斑病菌抑菌活性Fig.6　Inhibition activity of strain wswshg-10 to Pseudomonas syringae from tobacco

2.4.2對病原真菌抑菌活性

菌株wswshg-10對病原真菌抑菌效果見圖7。菌株wswshg-10能抑制8種病原真菌生長，對S. sclerotiorum、F.moniliforme、U.oryzae、F.oxysporum、F.graminearum和B.cinerea抑菌率較高，分別為85.8%、86.9%、86.5%、89.2%、87.6%和84.7%，對R.solani和Pythium spp.抑菌率略低，分別為74.3%和80.2%。

圖7　菌株wswshg-10對病原真菌抑菌活性Fig.7　Inhibition activity of strain wswshg-10 to pathogenic fungi

2.5菌株適生溫度

菌株wswshg-10在4、10、15、20、25和30℃均能生長，菌株生長速度與溫度呈正相關(guān)（見圖8）。4℃培養(yǎng)，菌株生長較慢，培養(yǎng)期間菌株持續(xù)生長，第3天菌體密度最高。隨溫度升高，菌株生長速度加快，10和15℃培養(yǎng)24 h，菌體密度為4℃的1.65和2.71倍，第3天菌體密度達(dá)最大值。20、25和30℃培養(yǎng)，菌體密度分別在48、36和24 h達(dá)最高值。該菌株在低溫10和15℃好，最適生長溫度為30℃，表明該菌株為耐冷細(xì)菌。

圖8　溫度對菌株生長影響Fig.8　Effect of temperature on the growth of strain wswshg-10

2.6菌株對玉米種子催芽作用

107cfu·mL-1菌液處理玉米種子，玉米種子提前1 d發(fā)芽且發(fā)芽整齊。與對照相比，芽長和根長顯著增加（見表2）。結(jié)果表明該菌株可促進(jìn)玉米種。

表2　菌株wswshg-10對玉米種子發(fā)芽影響Table 2　Effect of strain wswshg-10 on maize seed germination

3　討論與結(jié)論

芽孢桿菌是土壤和植物微生態(tài)優(yōu)勢微生物種群，具有抗逆抗病和促生長功能。目前國內(nèi)外已商品化的芽孢桿菌主要包括枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌和解淀粉芽孢桿菌[16]。甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌（Bacillus methylotrophicus）為Madhaiyan等首次報(bào)道新種，分離自水稻根圍土壤，具有促進(jìn)植物生長功能[15]。在分類方面，Dunlap等認(rèn)為甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌與B.amyloliquefaciens subsp.plantarum親緣關(guān)系最近，B.amyloliquefa?ciens subsp.plantarum的模式菌株FZB42T是甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌變種[16]。

甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌是一類新型生防資源菌，研究者已從土壤、植物體和海洋等不同生境中分離純化出具有生防功能菌株，主要用于防治黃瓜炭疽病、立枯病和枯萎病，番茄灰霉病和青枯病以及香蕉枯萎病等[17-21]。2016年甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌9912獲得國家微生物農(nóng)藥登記，用于防治黃瓜灰霉病[22]。本研究從黑龍江寒地凍土中篩選出一株耐冷甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌wswshg-10。該菌株抑菌譜廣，對煙草角斑病菌、大豆菌核病菌、水稻惡苗病菌、水稻稻曲病菌、黃瓜枯萎病菌、玉米莖基腐病菌、刺五加根腐病菌、番茄灰霉病菌和大豆根腐病菌生長具有較強(qiáng)抑制作用，分泌蛋白酶、幾丁質(zhì)酶、纖維素酶、嗜鐵素、吲哚乙酸、抗菌蛋白等多種活性物質(zhì)。幾丁質(zhì)酶、嗜鐵素和抗菌蛋白均為抗菌相關(guān)物質(zhì)，但抑菌機(jī)制不同，嗜鐵素通過與病原菌爭奪鐵離子，使病菌缺鐵不能生長[23]，幾丁質(zhì)酶通過溶解病菌細(xì)胞壁使菌體消融[24]，抗菌蛋白通過水解病菌細(xì)胞壁、抑制菌絲和孢子萌發(fā)及誘導(dǎo)植物產(chǎn)生系統(tǒng)抗性阻止病菌侵入或抑制病菌生長[25]，菌株wsw?shg-10能分泌抗菌物質(zhì)，表明其抑菌機(jī)制復(fù)雜，多種機(jī)制協(xié)同作用可增強(qiáng)其抑菌活性。吲哚乙酸是植物生長激素，促進(jìn)植物生長[26]，本研究發(fā)現(xiàn)用wsw?shg-10菌液處理玉米種子可促進(jìn)種子萌發(fā)，芽長和根長顯著增加，可能是吲哚乙酸作用。纖維素酶具有降解纖維素能力，在農(nóng)用廢棄物降解方面具有應(yīng)用潛力。蛋白酶在工業(yè)上應(yīng)用廣泛，本研究發(fā)現(xiàn)該菌株可產(chǎn)生低溫纖維素酶和蛋白酶，纖維素酶活力不強(qiáng)，可能與低溫限制有關(guān)，而蛋白酶活力較強(qiáng)，因此應(yīng)深入研究菌株分泌蛋白酶特性。低溫生長是菌株wswshg-10顯著特性，盡管其最適生長溫度為常溫，但在低溫10～15℃生長良好，菌株這一特性能耗，又可增強(qiáng)其在低溫土壤中生長速度，提高生防效果和應(yīng)用穩(wěn)定性，該菌株在低溫菌劑研發(fā)方面具有應(yīng)用前景。

在生理生化特性方面，菌株wswshg-10與其模式菌株CBMB205T[15]，菌株wsw?shg-10為陽性，菌株CBMB205T為陰性，與菌株N5、WF-3和LW-61在葡萄糖發(fā)酵、尿素酶和檸檬酸鹽利用特性不同[17,19-20]。為準(zhǔn)確確定菌株種屬地位，本研究采用形態(tài)、生理生化、16S rDNA及gyrB基因序列分析綜合鑒定。16S rDNA基因序列分析廣泛應(yīng)用于屬水平鑒定，gyrB基因分子進(jìn)化速率大于16S rDNA基因，更適合近緣種鑒定[27]。

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Study on isolation and characterization of a psychrotrophic antagonis?tic bacterium from cold area/WANG Yuxia1,2,JIANG Wei1,2,LIU Yushuai1,2,MENG Liqiang1,2,

LI Jing1,2,CAO Xu1,2,HU Jihua1,CHEN Jingyu1,ZHANG Shumei1,2(1.Institute of Microbiology,Heilongjiang Academy of Sciences,Harbin 150010,China;2.Institute of Advanced Technology,Heilongjiang Academy of Sciences,Harbin 150020,China)

A psychrotrophic antagonistic bacterium wswshg-10 was isolated from maize rhizospheric frozen soil in Hegang area,Heilongjiang Province.Based on morphology and biochemistry characterization as well as 16S rDNA andgyrBgene sequence analysis,strain wswshg-10 was identified asBacillus methylotrophicus.The strain exhibited a capability of growth at low temperature ranged from 4 to 15℃and at normal temperature ranged from 20 to 30℃,secreting chitinase,cellulase,protease,siderophore, indoleacetic acid and antifungal proteins.It was able to inhibit pathogen growth such asPseudomonas syringae,Sclerotinia sclerotiorum,Fusarium moniliforme,Ustilaginoidea oryzae,Fusarium oxysporum, Fusarium graminearum,Rhizoctonia solani,Botrytis cinereaandPythiumspp.,the rate of inhibition was74.3%-89.2%.Soaking seed revealed that the strain could promote maize seed germination and seedling growth.Stain wswshg-10 had multifaceted beneficial characteristics.It may be an ideal plant growth promoting and biocontrol agent for its integrated use in agriculture.

cold area;psychrotrophic bioncontrol strain;identification;characterization

Q939.96

A

1005-9369（2016）08-0031-08

2016-05-13

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（30301780）；黑龍江省院所科技合作項(xiàng)目（YS16C15）；黑龍江省科學(xué)院基金項(xiàng)目（KY15CZSM08）

王玉霞（1973-），女，高級工程師，碩士，研究方向?yàn)橹参锊『ι锓乐?。E-mail:wangyuxia218@sohu.com

張淑梅，研究員，博士，研究方向?yàn)槲⑸镛r(nóng)藥研發(fā)。E-mail:shumeizhang@yahoo.com