馬浩偉，董存柱，趙 灝

（海南大學(xué)環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院，海南 ?？?570228）

山蒟提取物對斜紋夜蛾和香蕉花薊馬的毒性研究

馬浩偉，董存柱，趙 灝

（海南大學(xué)環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院，海南 ?？?570228）

為了豐富防治斜紋夜蛾和香蕉花薊馬的植物源農(nóng)藥，研究了山蒟提取物對斜紋夜蛾4種蟲態(tài)和香蕉花薊馬2種蟲態(tài)的殺蟲活性。結(jié)果表明：山蒟提取物和魚藤酮對斜紋夜蛾卵的LC50值分別為1.87、1.82 mg/mL，對3齡幼蟲的LC50值分別為0.48、0.96 mg/mL，對成蟲的LC50值分別為0.44、0.43 mg/mL。山蒟提取物和魚藤酮對香蕉花薊馬若蟲的LC50值分別為1.34、0.88 mg/mL，對成蟲的LC50值分別為0.42、0.41 mg/mL，而對斜紋夜蛾蛹沒有明顯的作用。由此可知，山蒟提取物對斜紋夜蛾卵、3齡幼蟲、成蟲及香蕉花薊馬若蟲、成蟲的毒殺作用比較顯著，具備開發(fā)為植物源農(nóng)藥的潛在價值。

山蒟；斜紋夜蛾；香蕉花薊馬；毒性

斜紋夜蛾［Spodoptera litura（Fabricus）］屬鱗翅目（Lepidoptera）夜蛾科（Noctuidae），是一種暴食性、雜食性、世界性分布的害蟲，可為害多種作物［1］，對十字花科蔬菜、水生蔬菜及甘薯、棉花、大豆、煙草等作物的危害尤為嚴(yán)重［2］。

香蕉花薊馬［Thrips hawaiiensis（Morgan）］屬纓翅目鋸尾亞目薊馬科［3］，是香蕉的主要害蟲之一［4］，在中國海南、廣東、廣西、云南、臺灣、福建等?。▍^(qū)）均有發(fā)生，且近年來在海南省香蕉產(chǎn)區(qū)暴發(fā)嚴(yán)重［5］。

山蒟（Piper hancei Maxim）為胡椒科胡椒屬植物，有祛風(fēng)除濕、活血消腫、止咳等功效［6］。2011年，董存柱等［7］研究發(fā)現(xiàn)山蒟甲醇提取物對椰心葉甲［Brontispa longissima （Gestro）］的卵和幼蟲有較好的毒殺作用。2012年，董存柱等［8］研究發(fā)現(xiàn)山蒟甲醇提取物對家蠅（Musca domestica Linaeus）、白蚊伊蚊（Aedes albopictus Skuse）和致倦庫蚊（Culex quinquefasciatus）具有強(qiáng)烈的殺蟲活性。鑒于山蒟在活性篩選中的殺蟲活性較好，而且殺蟲成分含量高，整株可作為植物源生物農(nóng)藥開發(fā)利用，研究就山蒟提取物對斜紋夜蛾、薊馬的毒殺作用進(jìn)行了研究，并以傳統(tǒng)植物源殺蟲劑魚藤酮作為對照藥劑，希望發(fā)現(xiàn)對斜紋夜蛾和薊馬有較好防治效果的植物源農(nóng)藥。以期為斜紋夜蛾及香蕉花薊馬防治提供新的方法。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1供試?yán)ハx斜紋夜蛾由海南大學(xué)環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院化保實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)提供，試驗(yàn)時選取一日齡健康完整的蟲卵，大小一致，健康活潑的3齡幼蟲，同一批健康的蛹和羽化不久的健康的成蟲。香蕉花薊馬在海南大學(xué)儋州校區(qū)農(nóng)學(xué)院基地香蕉種植地采集，試驗(yàn)時取健康活潑的若蟲和成蟲。

1.1.2試驗(yàn)藥品準(zhǔn)確稱取用甲醇浸泡、抽濾、濃縮得到山蒟提取物200 mg，丙酮定容至20 mg/mL，置于0℃冰箱保存。對照藥劑魚藤酮（純度＞98%，Aladdin試劑公司），準(zhǔn)確稱取200 mg，用丙酮定容至20 mg/mL，置于0℃冰箱保存。這兩種藥劑均在實(shí)驗(yàn)時梯度稀釋到所需濃度。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1對斜紋夜蛾卵的毒殺作用采用浸卵法［9］，取定容好的山蒟提取物20 mL，梯度稀釋到10、5、2.5、1.25、0.625 mg/mL；用細(xì)毛筆將1日齡卵挑出，并用0.5%聚乙烯醇將卵粘到準(zhǔn)備好的木薯葉上，每個葉片不少于150粒；待聚乙烯醇干燥后將葉片放入5個不同濃度的溶液中浸5 s，取出置濾紙上，待丙酮揮發(fā)后放入墊有濕濾紙的培養(yǎng)皿中，放入培養(yǎng)箱讓其自然發(fā)育；相同方法以5個同等濃度的魚藤酮為藥物對照，以丙酮為空白對照，每個處理重復(fù)3次；每天清除掉已孵化的幼蟲，待不再有幼蟲出現(xiàn)，檢查未出卵粒數(shù)。

1.2.2對斜紋夜蛾3齡幼蟲的毒殺作用采用浸漬法［10］，取定容好的山蒟提取物20 mL，梯度稀釋到10、5、2.5、1.25、0.625 mg/mL備用；將供試3齡幼蟲分別浸漬在5個不同的濃度藥液中，10 s后取出，自然晾干，放入培養(yǎng)皿，將新鮮木薯葉剪成小片放入培養(yǎng)皿；每皿移入30頭浸過藥的斜紋夜蛾幼蟲；用相同方法以5個同等濃度的魚藤酮為藥效對照，以丙酮為空白對照，每個處理重復(fù)3次，皿上加蓋；將培養(yǎng)皿置于避光處飼養(yǎng)12 、24 、36 h后記錄死亡個數(shù)。

1.2.3對斜紋夜蛾蛹的毒殺作用采用浸漬法［11］，取定容好的山蒟提取物20 mL，梯度稀釋到10、5、2.5、1.25、0.625 mg/mL備用，將同一批斜紋夜蛾蛹放入5個不同濃度藥液中浸泡10 s后取出，自然晾干；后將浸過同濃度藥的蛹30個放入塑料盒中，塑料盒底部有濾紙片保濕；相同方法以5個同等濃度的魚藤酮為藥物對照，以丙酮為空白對照，每個處理重復(fù)3次，每天清除掉已羽化的成蟲，待不再有成蟲出現(xiàn)后，檢查未羽化個數(shù)。

1.2.4對斜紋夜蛾成蟲的毒殺作用采用點(diǎn)滴法［12］，取定容好山蒟提取物20 mL，梯度稀釋到10、5、2.5、1.25、0.625 mg/mL備用；成蟲經(jīng)適量的乙醚麻醉后，用1.0 μL微量進(jìn)樣器在成蟲胸部背板上點(diǎn)1.0 μL不同濃度藥液，然后將30頭點(diǎn)過藥的成蟲放入養(yǎng)蟲塑料盒內(nèi)，養(yǎng)蟲盒底部有干燥濾紙片，再放入有蜂蜜水的棉團(tuán)供成蟲吸食，自然培養(yǎng)；用相同方法以5個同等濃度的魚藤酮為藥物對照，以丙酮為空白對照，每個處理重復(fù)3次，分別在12、24和36 h后記錄成蟲死亡數(shù)。

1.2.5對香蕉花薊馬若蟲和成蟲的毒殺作用采用濾紙藥膜法［13］，取定容好山蒟提取物20 mL；梯度稀釋到2.5、2.0、1.5、1.0、0.5 mg/mL備用；在直徑6 cm的玻璃培養(yǎng)皿底部，鋪一張同樣直徑的濾紙，用移液槍吸取l mL藥液均勻滴于濾紙上，待丙酮揮發(fā)后，用毛筆將香蕉花薊馬若蟲、成蟲（適量乙醚麻醉）各30頭移入培養(yǎng)皿中，待蟲身沾滿藥液后放入長3 cm的香蕉花苞片（香蕉花薊馬飼料）上，然后用封口膜將培養(yǎng)皿封口，置于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)；24 h后檢查各處理香蕉花薊馬若蟲、成蟲的死亡數(shù)和存活數(shù)（以毛筆尖觸動蟲體，不動者為死亡）；每處理重復(fù)5次，以丙酮為空白對照，以魚藤酮為藥物對照。

1.3數(shù)據(jù)處理

死亡率（%）=（死亡蟲數(shù)/總蟲數(shù)）×100 （ 1）

校正死亡率（%）= ［（處理死亡率-對照死亡率） /（1-對照死亡率）］ ×100 （ 2）

利用Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計算死亡率［14］，求出毒力方程、相關(guān)系數(shù)、LC50和置信區(qū)間。

2 結(jié)果與分析

2.1對斜紋夜蛾卵的毒殺作用

由表1可知，山蒟提取物對斜紋夜蛾卵的毒殺活性與魚藤酮的比較接近，LC50分別為1.87、1.82 mg/ mL，魚藤酮的活性稍好于山蒟。這表明山蒟提取物對斜紋夜蛾卵有較好的毒殺作用。

表1　試驗(yàn)藥劑對斜紋夜蛾卵的毒殺作用

2.2對斜紋夜蛾3齡幼蟲的毒殺作用

2.3對斜紋夜蛾蛹的毒殺作用

試驗(yàn)結(jié)果表明，山蒟提取物對斜紋夜蛾蛹基本沒有毒殺活性。在最高濃度10 mg/mL時，校正未羽化率為1.11%；當(dāng)供試濃度為2.5 mg/mL及以下時，校正未羽化率為0%。山蒟提取物對斜紋夜蛾蛹的毒殺效果與空白對照差異不明顯。對比魚藤酮對斜紋夜蛾蛹的毒殺作用，10、5、2.5、1.25、0.625 mg/mL處理的校正未羽化率依次為12.22%、8.89%、8.89 %、5.56%、由表2可知，山蒟提取物對斜紋夜蛾3齡幼蟲的 毒殺作用與魚藤酮接近。作用12、24 h后，山蒟提取物的毒殺效果略好于魚藤酮；但是作用36 h后，魚藤酮的毒殺效果略好于山蒟提取物；山蒟提取物的LC50為0.45～0.66 mg/mL，而魚藤酮的LC50為0.44～0.69mg/mL。這說明山蒟提取物對斜紋夜蛾3齡幼蟲有非常好毒殺活性并且活性接近傳統(tǒng)植物源農(nóng)藥魚藤酮。2.22%，和空白對照的差異也不明顯。這說明山蒟提取物和魚藤酮對斜紋夜蛾蛹的毒殺活性都很弱，但魚藤酮對斜紋夜蛾蛹的毒殺活性要比山蒟提取物略好。

表2　試驗(yàn)藥劑對斜紋夜蛾3齡幼蟲的毒殺作用

2.4對斜紋夜蛾成蟲的毒殺作用

由表3可知，山蒟提取物對斜紋夜蛾成蟲有非常好的毒殺活性，并且活性接近傳統(tǒng)植物源農(nóng)藥魚藤酮，山蒟提取物的LC50為0.96～1.19 mg/mL，而魚藤酮的LC50為0.43～0.57 mg/mL?？傮w來看，魚藤酮的殺成蟲活性要比山蒟提取物的稍好。

2.5對薊馬若蟲和成蟲的毒殺作用

由表4可知，山蒟提取物對薊馬若蟲和成蟲均有一定的毒殺作用，且其活性與魚藤酮的差別不大；其中，山蒟提取物對薊馬成蟲的LC50為0.88 mg/mL，對薊馬若蟲的LC50為1.34 mg/mL，表明山蒟提取物對薊馬成蟲的毒殺活性大于對薊馬若蟲的活性；這一點(diǎn)與魚藤酮的表現(xiàn)也一致。

表3　試驗(yàn)藥劑對斜紋夜蛾成蟲的毒殺作用

表4　試驗(yàn)藥劑對薊馬若蟲和成蟲的毒殺作用

3 結(jié)論與討論

山蒟提取物對斜紋夜蛾卵、幼蟲、成蟲及香蕉花薊馬的若蟲、成蟲都有較好的毒殺作用，其LC50值均小于2 mg/mL，而對斜紋夜蛾蛹則沒有明顯的效果；其毒殺作用與對照藥劑魚藤酮接近，有的甚至優(yōu)于魚藤酮的效果，如魚藤酮對斜紋夜蛾幼蟲的LC50值為0.96 mg/mL，而山蒟提取物對斜紋夜蛾幼蟲的LC50值則達(dá)到了0.48 mg/mL，效果明顯好于魚藤酮?？紤]到山蒟是粗提取，魚藤酮是純凈物，說明山蒟中含有的某種或幾種化學(xué)物質(zhì)對斜紋夜蛾和香蕉花薊馬的毒殺作用優(yōu)于魚藤酮，山蒟的生物活性應(yīng)該高于魚藤酮，具有開發(fā)為新型高效、低毒植物源農(nóng)藥的潛在價值。

試驗(yàn)中，山蒟提取物對斜紋夜蛾和香蕉花薊馬的生物活性測定尚屬初探，為今后防治斜紋夜蛾和香蕉花薊馬的植物源殺蟲劑的研制提供了一定的指導(dǎo)。而對于山蒟中活性成分的分離、純化、結(jié)構(gòu)鑒定及作用機(jī)理等方面的研究還有待進(jìn)一步深入。

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［2］ 秦厚國，葉正襄，黃水金，等. 不同寄主植物與斜紋夜蛾喜食程度、生長發(fā)育及存活率的關(guān)系研究［J］. 中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報，2004，12（2）：45-47.

［3］ Murai T. Development and reproductive capacity of Thrips hawaiiensis（Thysanoptera： Thripidae） and its potential as a major pest［J］. Bulletin of entomological research，2001，91（3）：193-198.

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（責(zé)任編輯：成 平）

Toxicity of Piper hancei Extract on Spodoptera litura and Thrips hawaiiensis

MA Hao-wei，DONG Cun-zhu，ZHAO Hao
（College of Environment and Plant Protection， Hainan University， Haikou 570228， PRC）

In order to enrich the plant pesticides of controlling Spodoptera litura and thrips hawaiiensis， the insecticidal activity of piper hancei extract on four insect states of Spodoptera litura and two insect states of thrips hawaiiensis was studied. The results showed that the LC50values of extract from piper hancei and rotenone on eggs of Spodoptera litura were 1.87， 1.82 mg/mL， the LC50values of third instar larva were 0.48， 0.96 mg/mL， the adult LC50values were 0.44， 0.43 mg/mL. The LC50values of extract from Piper hancei and rotenone on nymph of Thrips hawaiiensis were 1.34， 0.88 mg/mL， the LC50values of the adults were 0.42 and 0.41 mg/mL， respectively. There was no significant effect on pupa of Spodoptera litura. From this we can know， the Piper hancei extract has significant toxic effect on eggs， third instar larva and adult of Spodoptera litura， nymph and adult of Thrips hawaiiensis， it has the potential value of the development for the plant pesticides.

Piper hancei； Spodoptera litura； Thrips hawaiiensis； toxicity

S482.3+9

A

1006-060X（2016）08-0072-03

10.16498/j.cnki.hnnykx.2016.08.021

2016-05-24

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31360447）；2015年海南大學(xué)研究生實(shí)踐創(chuàng)新項(xiàng)目

馬浩偉（1990-），男，河南開封市人，碩士研究生，研究方向?yàn)樘烊辉崔r(nóng)藥。

董存柱