王麗星，謝寶貴，黃志偉

（1．福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，福建 福州 350002；2．福建農(nóng)林大學(xué)菌物研究中心，福建 福州 350002）

白靈菇菌株P(guān)l.n0006的生物學(xué)特性研究

王麗星1，謝寶貴2，黃志偉1

（1．福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，福建 福州 350002；2．福建農(nóng)林大學(xué)菌物研究中心，福建 福州 350002）

研究白靈菇菌株P(guān)l.n0006的生物學(xué)特性，探索其在固體發(fā)酵條件下的最佳生長(zhǎng)條件，為其栽培技術(shù)研究奠定基礎(chǔ)。采用不同的固體培養(yǎng)基，研究培養(yǎng)基的組成、含水量、酸堿度及光照對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明：白靈菇菌絲在添加麥皮或稻草粉的木屑培養(yǎng)基中都能較好地生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中添加1%～5%的石灰可促進(jìn)菌絲生長(zhǎng)，而添加1%～5%的過(guò)磷酸鈣反而會(huì)抑制菌絲生長(zhǎng)，菌絲在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的最佳pH值為8～11；在黑暗條件下培養(yǎng)，菌絲的生長(zhǎng)速度顯著比光照條件下快。

白靈菇；生物學(xué)特性；菌絲體；固體培養(yǎng)；生長(zhǎng)條件

白靈菇（Pleurotus nebrodensis）屬于擔(dān)子菌亞綱，層菌綱，傘菌目，側(cè)耳科，側(cè)耳屬，又名白阿魏蘑，可稱之為刺芹側(cè)耳的另一個(gè)變種。白靈菇是一種藥、食兩用的大型真菌，蓋厚柄粗，菇體肥大，顏色潔白，肉嫩鮮美，并有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[1]。白靈菇含有豐富的蛋白質(zhì)、碳水化合物、粗纖維、維生素C、多糖和礦物元素，具有清熱解毒、治療胃病、傷寒、降血壓防止動(dòng)脈硬化、防治骨質(zhì)疏松、增強(qiáng)人體免疫力等功效[2]。盛偉等[3]研究發(fā)現(xiàn)，白靈菇有很強(qiáng)的清除羥基自由基和超氧自由基的能力，并且有較強(qiáng)的還原力和清除NO的能力，可以開(kāi)發(fā)成為抗衰老保健食品輔料或功能因子。

對(duì)于白靈菇的生長(zhǎng)培育，優(yōu)質(zhì)的菌種是白靈菇栽培能否成功的關(guān)鍵，而培育優(yōu)質(zhì)白靈菇菌種的關(guān)鍵之一是培養(yǎng)基，培養(yǎng)基雖然有很多種類，但是可以被白靈菇利用的卻不多[4]。王桂芹等[5]研究發(fā)現(xiàn)，以豆秸粉為主料培養(yǎng)白靈菇，其生物學(xué)效率高，因?yàn)榘嘴`菇對(duì)碳源的要求高一些，而豆秸粉里含有一定量的稻草粉，說(shuō)明白靈菇的培養(yǎng)基中要求有一定量的木質(zhì)素。張浩洋等[6]研究表明，白靈菇菌絲可在pH值為4～11的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，最適pH為6～8。張瑞穎等[7]研究發(fā)現(xiàn)，白靈菇的培養(yǎng)過(guò)程給予一定的散射光（400～600Lux），可使白靈菇的子實(shí)體更加潔白。培養(yǎng)料的最適含水量為60～62%，若含水量過(guò)低，不能滿足菌絲生長(zhǎng)和子實(shí)體的生長(zhǎng)發(fā)育；若含水量過(guò)高，則發(fā)菌中后期吃料慢。

為了深入研究白靈菇菌株P(guān)l.n0006的人工栽培技術(shù)，文章對(duì)該菌株的生物學(xué)特性進(jìn)行研究，現(xiàn)將研究結(jié)果總結(jié)如下。

表1 12個(gè)配方培養(yǎng)基的組成

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株

白靈菇菌株P(guān)l.n0006為福建農(nóng)林大學(xué)菌物研究中心提供。

1.1.2 供試培養(yǎng)基配方

1.1.2.1 不同固體培養(yǎng)基配方對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響

采用不同的主料和輔料，按表1分別配制出12種固體培養(yǎng)基配方。在配制培養(yǎng)基之前，先將麥皮、玉米粉、木屑和稻草粉置于105℃下烘干2～3h，并防止返潮（下同）；然后將各種配方培養(yǎng)基的含水量均控制為60%。

1.1.2.2 培養(yǎng)基含水量對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響

配方I：木屑76%、麥皮20%、過(guò)磷酸鈣2%、葡萄糖1%、石膏1%；

配方II：木屑76%、稻草粉20%、過(guò)磷酸鈣2%、葡萄糖1%、石膏1%。

2種培養(yǎng)基分別設(shè)置6個(gè)含水量水平，即50%、55%、60%、65%、70%、75%。

1.1.2.3 培養(yǎng)基酸堿度對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響

PDA斜面培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200g、葡萄糖20 g、瓊脂20g、水1000mL，PDA培養(yǎng)基配制好后用1mol·L-1HCl或1mol·L-1NaOH調(diào)整pH至4、5、6、7、8、9、10、11。

木屑培養(yǎng)基配方：以木屑78%、麥皮（或稻草粉）20%、葡萄糖1%、石膏1%為基礎(chǔ)，分別在木屑麥皮培養(yǎng)基（I）和木屑稻草粉培養(yǎng)基（II）中添加過(guò)磷酸鈣或石灰，各設(shè)5個(gè)劑量，即1%、2%、3%、4%、5%，相應(yīng)減少配方中木屑的用量，使培養(yǎng)料總和為100%，以不添加過(guò)磷酸鈣和石灰的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為對(duì)照。

培養(yǎng)基的含水量均為65%。

1.1.2.4 光照對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響

馬鈴薯200g，葡萄糖20g，KH2PO4 1g，MgSO4·7H2O 0.5g，瓊脂20g，水1000 mL。

1.2 方法

1.2.1 不同固體培養(yǎng)基配方對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響

按15g培養(yǎng)料（干重）/試管計(jì)算，每個(gè)配方約需250g/4培養(yǎng)料（干重）。依表1所述配方計(jì)算，并稱取培養(yǎng)基各組分，按配方分別先將除過(guò)磷酸鈣、葡萄糖和石膏以外的各組分混合。再分別取自來(lái)水375mL/4/配方，加到過(guò)磷酸鈣、葡萄糖和石膏的混合物中，溶解后，倒入木屑等的混合物中，并充分混合均勻。然后分裝于25×200mm試管中，并用口徑較小的試管壓實(shí)培養(yǎng)料，塞上棉花塞，在126℃下滅菌45min。用接種針挑取白靈菇菌塊，接種到各試管的培養(yǎng)基上，并使有菌絲的一面朝上，然后置于溫度為28℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待菌絲長(zhǎng)入料中約1cm時(shí)，畫(huà)起始線，并注明畫(huà)線日期。然后繼續(xù)培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)至接近試管底時(shí)畫(huà)終止線，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)速度（mm·d-1）并評(píng)估菌絲長(zhǎng)勢(shì)，然后用軟件SAS System For Windows Release 6.12 對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析與顯著性測(cè)驗(yàn)（下同）。

1.2.2 培養(yǎng)基含水量對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響

參照1.2.1所示方法準(zhǔn)備好不同含水量的培養(yǎng)基，每個(gè)處理4個(gè)重復(fù)，高壓滅菌，接種，培養(yǎng)，記錄菌絲的生長(zhǎng)情況。

1.2.3 培養(yǎng)基酸堿度對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響

不同pH值的PDA培養(yǎng)基分裝于18×180mm試管中，每個(gè)處理4個(gè)重復(fù)，在121℃下高壓滅菌30min后，制作斜面培養(yǎng)基。配制木屑培養(yǎng)基時(shí)，先將過(guò)磷酸鈣或石灰、葡萄糖和石膏加入水中制成混懸液，再與其它干料混合物充分混合均勻，配制成不同酸堿度的培養(yǎng)基，然后參照1.2.1所示方法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓滅菌，接種，培養(yǎng)，記錄菌絲的生長(zhǎng)情況。

1.2.4 光照對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響

先配制平板的固體培養(yǎng)基，將白靈菇菌種接種于培養(yǎng)皿的中間位置，然后分成2組，每組4個(gè)重復(fù)，一組置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（光照強(qiáng)度為2780 Lux），一組置于暗培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度均為25℃。當(dāng)菌落直徑為2 cm以上時(shí)，參照1.2.1所示方法記錄菌絲的生長(zhǎng)情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 培養(yǎng)基配方對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響

從圖1可以看出：在不同配方培養(yǎng)基中，白靈菇菌絲生長(zhǎng)速度的差異達(dá)極顯著水平，其中：以木屑、棉子殼和麥皮為主料的培養(yǎng)基（9號(hào)配方）中，白靈菇菌絲的生長(zhǎng)速度最快；以棉子殼、稻草粉和玉米粉為主料的培養(yǎng)基（7號(hào)配方）中，菌絲的生長(zhǎng)速度最慢。

2.2 培養(yǎng)基含水量對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響

從圖2可以看出：白靈菇菌絲在麥皮培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)速度均比稻草粉培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)速度快。白靈菇菌絲在2類培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)速度對(duì)于培養(yǎng)基含水量變化的響應(yīng)基本一致，即隨著培養(yǎng)基含水量的增加，菌絲的生長(zhǎng)速度呈加快的趨勢(shì)。

2.3 培養(yǎng)基酸堿度對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響

2.3.1 斜面培養(yǎng)基pH值對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

從圖3可以看出：斜面培養(yǎng)基的pH值為4～8時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速度差異顯著，隨著pH值的上升，菌絲生長(zhǎng)速度顯著上升。當(dāng)斜面培養(yǎng)基的pH值為9～11時(shí)，菌絲的生長(zhǎng)速度沒(méi)有顯著性差異，且生長(zhǎng)良好。

2.3.2 在麥皮草粉培養(yǎng)基中添加酸性或堿性輔料對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響

從圖4可以看出：在木屑麥皮（或稻草粉）培養(yǎng)基中添加1%～5%的過(guò)磷酸鈣均抑制了白靈菇菌絲的生長(zhǎng)，而在木屑麥皮（或稻草粉）培養(yǎng)基中添加1%～5%的石灰均可促進(jìn)白靈菇菌絲的生長(zhǎng)。

2.4 光照對(duì)白靈菇菌絲生長(zhǎng)的影響

從圖5可以看出：在光照和黑暗條件下培養(yǎng)，白靈菇菌絲生長(zhǎng)速度的差異達(dá)到極顯著水平，在黑暗條件下培養(yǎng)可以顯著促進(jìn)白靈菇菌絲的生長(zhǎng)。

3 結(jié)論與討論

本研究結(jié)果表明：白靈菇菌株P(guān)l.n0006在添加麥皮或稻草粉的木屑培養(yǎng)基中都能較好地生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中添加1%～5%的石灰可促進(jìn)菌絲的生長(zhǎng)，而添加1%～5%的過(guò)磷酸鈣反而會(huì)抑制菌絲生長(zhǎng)，菌絲生長(zhǎng)適宜的PDA培養(yǎng)基pH為8～11；在黑暗條件下培養(yǎng)，菌絲的生長(zhǎng)速度顯著比光照條件下快。

長(zhǎng)期以來(lái)白靈菇栽培的主料為棉籽殼，其價(jià)格已經(jīng)日益上漲[8]。馬瑞霞[9]研究表明，用棉籽殼作為主要原料培養(yǎng)出的菌絲長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，出菇快，且子實(shí)體大、菌肉厚，產(chǎn)量高，這是因?yàn)槊拮褮ゎw粒大、結(jié)構(gòu)疏松、透氣性好、營(yíng)養(yǎng)豐富，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)易被白靈菇吸收利用。因此，本研究將麥皮或稻草粉與棉籽殼混合作為培養(yǎng)基主料，不影響白靈菇的菌絲生長(zhǎng)，降低其栽培成本，并使稻草等廢棄物得到有效利用。

從本研究結(jié)果可以看出，光照對(duì)白靈菇菌絲的生長(zhǎng)有顯著影響，這與王文治等[10]的研究結(jié)果一致。因此，為了更好地讓白靈菇菌絲生長(zhǎng)，應(yīng)在暗處培養(yǎng)白靈菇，而到了菇蕾分化階段則需要一定的散射光。

[1] 陳文良.白靈菇的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和開(kāi)發(fā)前景[J].食用菌，1999，(4)：40.

[2] 惠恩舉.白靈菇發(fā)展前景看好[J].特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物，2002，(11)：38.

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[5] 王桂芹，穆寶漢.白靈菇培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)[J].中國(guó)林副特產(chǎn)，2006，(6)：10-12.

[6] 張浩洋，李冬，葛芳，等.白靈菇人工試栽技術(shù)[J].防護(hù)林科技，2010，(4)：121-122.

[7] 張瑞穎，胡清秀，左雪梅，等.白靈菇栽培經(jīng)驗(yàn)及問(wèn)題分析[J].中國(guó)食用菌，2010，29(2)：63-65.

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[10] 王文治，王永左，蔡玉俠.白靈菇生物學(xué)特性及高產(chǎn)栽培技術(shù)[J].天津農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，9(2)：61-62.

10.3969/j.issn.1007-550X.2016.12.001

S646.9

A

1007-550X（2016）12-0038-04

2016-8-25

王麗星（1992—），女，碩士研究生，研究方向：食品生物技術(shù)。

黃志偉（1978—），男，博士，講師，研究方向：食品生物技術(shù)。Email：972842976@qq.com