姜黃　鄭麗華　楊金花

[摘要]目的探討多聚酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè)免疫球蛋白重鏈基因重排在原發(fā)性胃腸道淋巴組織增生性疾病中的良惡性鑒別中的應(yīng)用價(jià)值。方法選取存檔蠟塊45例，采用HE常規(guī)染色及SP免疫組化方法進(jìn)行組織學(xué)分類，運(yùn)用PCR半巢式擴(kuò)增免疫球蛋白重鏈基因重排，2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物。結(jié)果IgH FR3A和IgH FR3A+FR2A在MALT淋巴瘤的陽性檢測(cè)率分別為60.7%（17/28）和75.0%（21/28），在DLBCL中的陽性檢測(cè)率分別為60.0%（9/15）和73.3%（11/15），在MCL中的陽性檢測(cè)率分別為100.0%（1/1）和100.0%（1/1）。IgH FR3A在胃腸道淋巴瘤中的陽性檢測(cè)率為60.0%。IgH FR3A聯(lián)合IgH FR2Ad在胃腸道淋巴瘤中的陽性檢出率為73.3%（33/45）。結(jié)論采用PCR方法檢測(cè)免疫球蛋白重鏈基因重排能夠作為淋巴瘤診斷的有效輔助手段，有助于對(duì)原發(fā)性胃腸道淋巴組織增生性疾病的良惡性做出正確的診斷。

[關(guān)鍵詞]胃腸道淋巴瘤；非霍奇金淋巴瘤；基因重排；多聚酶鏈反應(yīng)；免疫球蛋白重鏈基因

[中圖分類號(hào)]R733

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]2095-0616（2016）03-29-04

淋巴瘤是起源于淋巴組織及淋巴結(jié)的惡性腫瘤，原發(fā)性胃腸道淋巴瘤是結(jié)外淋巴瘤的最好發(fā)部分。原發(fā)性胃腸道淋巴瘤占結(jié)外淋巴瘤的30%～45%。原發(fā)性淋巴瘤由于其臨床表現(xiàn)無特殊性，尤其在早期的惡性淋巴瘤由于其更缺乏特異性，因此臨床較難做出正確診斷，易造成誤診。病理診斷淋巴瘤較為可靠，借助形態(tài)學(xué)和免疫組織化學(xué)能對(duì)大部分淋巴瘤做出明確的診斷，但對(duì)一些疑難病例仍然不能做出正確診斷，未能得到及時(shí)的正確診斷不利于臨床醫(yī)生做出最佳的治療方案和進(jìn)行必要的預(yù)后評(píng)估。近年來，針對(duì)淋巴瘤免疫球蛋白重鏈（immunoglobulin heavy chain，IgH）基因重排檢測(cè)已經(jīng)成為臨床上診斷淋巴瘤的一項(xiàng)必要手段，成為鑒別診斷淋巴瘤的一種新的有力工具，

本研究對(duì)此進(jìn)行初步研究。

1.資料與方法

1.1一般資料

收集2008年10月～2014年10月鄭州人民醫(yī)院收治胃腸道B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤（Bcell non-Hodgkin lymphoma，B-NHL）45例，來自內(nèi)鏡活檢和手術(shù)標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)。男27例，女18例，年齡21-77歲（中位年齡52歲）。陽性對(duì)照為Raii細(xì)胞株，陰性對(duì)照為1例淋巴組織反應(yīng)性增生。

1.2臨床表現(xiàn)

45例胃腸道B-NHL患者中出現(xiàn)腹痛37例（82.2%），腹脹10例（22.2），血便10例（22.2%），發(fā)熱8例（17.8%），腹部包塊7例（15.6%），黑便6例（13.3%），消瘦5例（11.1%），黏液便5例（11.1%），腹瀉2例（4.4%）。45例病變累及胃21例（46.7%），小腸2例（4.4%），回盲部3例（6.7%），結(jié)腸10例（22.2%），直腸3例（6.37%），小腸合并結(jié)腸1例（2.7%）。其中表現(xiàn)為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例（57.8%），未查見淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例（42.3%）。

1.3方法

1.3.1免疫組化所有標(biāo)本經(jīng)中性福爾馬林固定、常規(guī)石蠟包埋、4-5um連續(xù)組織切片，除進(jìn)行常規(guī)HE染色以外，采用免疫組化S-P法進(jìn)行免疫表型標(biāo)記：LCA（2B11，DAKO）、CD3（F7.2.38，DAKO），CD45RO（OPD4，DAKO）、CD20（L26，DAKO）、CDIO（MX002，DAKO）、CDl5（Carb-3，DAKO）、CD30（Ber-2、DAKO）、Bcl-2（SP66，DAKO）、Bcl-6（LN22，DAKO）、CyclinD-1（DCS-6，DAKO）、PAX-5（SP34，DAKO）、kappalight chain（L1C1，DAKO）

和lambda light chain（LAM03+HP6054，DAKO）標(biāo)記輕鏈。依據(jù)不同免疫表型表達(dá)情況并根據(jù)2008年WHO淋巴及造血系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)對(duì)所有病例進(jìn)行分類。

1.3.2組織分型常規(guī)HE制片，結(jié)合免疫組化結(jié)果，所有病例經(jīng)由2位以上病理學(xué)專家共同閱片確診為非霍奇金B(yǎng)細(xì)胞淋巴瘤，其中胃腸道黏膜相關(guān)淋巴瘤（mucosa associated lymphoid tissuelymphoma，MALT）28例，彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma，DLBCL）15例，濾泡性淋巴瘤（follicular lymphoma，F(xiàn)L）1例，套細(xì)胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma，MCL）1例。

1.3.3DNA提取及半巢式PCR反應(yīng)石蠟組織10um連續(xù)切片5張，常規(guī)酚一氯仿法抽提DNA。采用半巢式PCR。一致性v區(qū)引物（FR2A）：5TGGA/GTC CGC/A CAG G/CCT/C T/CCN GG 3一致性V區(qū)引物（FR3A）：5ACA CGG C（C/T）（G/C）TGT ATT ACT GT 3，（J區(qū)引物）LJH：5TGAGGA GAC GGT GAC C 3，（J區(qū)引物）VLJH：5GTG ACC AGG GT（A/G/C/T）CCT TGG CCCCAG 3。進(jìn)行半巢式反應(yīng)，第一輪PCR用引物FR3A（FR2A）+LJH，其產(chǎn)物稀釋100倍作為模板，F(xiàn)R3A（FR2A）+VLJH進(jìn)行第二輪PCR反應(yīng)?？傮w積25uL：10×buffer 2.5uL，MgCl，1.8uL（終濃度1.8mM），dNTP 1.5uL（終濃度10uM），引物各0.2uL終濃度200nM），TaqPlus酶0.2uL（1u），模板DNA 1UL，體積不足部分雙蒸水補(bǔ)足。所有PCR反應(yīng)均在94℃預(yù)變性6min，94℃變性lmin，55℃退火lmin，72℃延伸lmin，40個(gè)循環(huán)，反應(yīng)結(jié)束后在72℃延伸10min，然后4～C放置。產(chǎn)物長(zhǎng)度70-130bp。已知陽性病例做陽性對(duì)照，反應(yīng)性淋巴組織增生做陰性對(duì)照，緩沖液做空白對(duì)照。擴(kuò)增產(chǎn)物行2%瓊脂糖凝膠電泳。所需引物和試劑均購(gòu)自上海生工公司。