劉　志　趙春清　李　威　張　彬　高立學(xué)　閆　威　劉　松　張　濤河北省保定市第二醫(yī)院普外科，河北保定　071000

Ki-67、Bmi-1蛋白在結(jié)腸癌患者中的表達(dá)及預(yù)后分析

劉志趙春清李威張彬高立學(xué)閆威劉松張濤
河北省保定市第二醫(yī)院普外科，河北保定071000

目的 探討Ki-67、Bmi-1在結(jié)腸癌及癌旁正常組織中的表達(dá)意義、相互關(guān)系及評估預(yù)后的價值。方法 選取2009年1月～2012年12月保定市第二醫(yī)院收治的結(jié)腸癌患者60例為觀察組，同時選擇其癌旁正常組織20例為對照組。采用免疫組織化學(xué)法檢測兩組結(jié)腸癌組織中Ki-67、Bmi-1的表達(dá)情況，并分析其與結(jié)腸癌臨床病理特點、預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示，觀察組Ki-67、Bmi-1表達(dá)明顯高于對照組（P＜0.05），觀察組Ki-67和Bmi-1的表達(dá)均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度、TNM分期相關(guān)（P＜0.05），而與年齡、性別、腫瘤大小無關(guān)（P＞0.05），觀察組患者結(jié)腸癌組織中Ki-67、Bmi-1表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.572，P＜0.05），Ki-67、Bmi-1表達(dá)陽性者3年生存率與表達(dá)陰性者比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （P＞0.05）。結(jié)論 Ki-67、Bmi-1表達(dá)與結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，目前還不能確定是否與與結(jié)腸癌不良預(yù)后有關(guān)。

Ki-67；Bmi-1；結(jié)腸癌；免疫組化

［Abstract］Objective To investigate the expression，relationship and the prognostic value of Ki-67 and Bmi-1 in colon cancer and adjacent normal tissues.Methods Sixty patients with colon cancer from January 2009 to December 2012 in the Second Hospital of Baoding City were selected as observation group，at the same time 20 cases of the adjacent normal tissues were collected as the control group.Expression of Ki-67 and Bmi-1 in colon tissues of two groups were detected by immunohistochemical staining，and the relationship between the expression of Ki-67，Bmi-1 and clinical pathological characteristics，prognosis were analyzed.Results Immunohistochemical detection showed that，expressions of Ki-67 and Bmi-1 in the observation group were significantly higher than those of the control group（P＜0.05），expressions of Ki-67 and Bmi-1 in the observation group were related with lymphnode metastasis，diferentiation，and TNM staging（P＜0.05），while the expression of the two genes had nothing to do with age，the gender，size（P＞0.05）.The expression of Ki-67 was positively correlated with Bmi-1 in the colon cancer tissues of the observation group（r=0.572，P＜0.05）.3 years survival rate between patients with Ki-67 and Bmi-1 positive expression and negative expression had no statistically significant difference（P＞0.05）.Conclusion The expression of Bmi-1 and Ki-67 is related to the occurrence and development of colon cancer，but can not sure that is related to the poor prognosis of colon cancer.

［Key words］Ki-67；Bmi-1；Colon cancer；Immunohistochemisty

Ki-67是應(yīng)用最為廣泛的增生細(xì)胞標(biāo)志物之一，反映細(xì)胞分裂和增殖活性，其在腫瘤組織中的表達(dá)高低與腫瘤的增殖密切相關(guān)［1-2］。Bmi-1是多梳基因家族（Polycomb group genes，PcG）的重要成員之一，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化與衰老，并且維持多種正常干細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞的自我更新和增殖［3］。本研究通過免疫組化技術(shù)檢測Ki-67、Bmi-1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)，研究兩者的相關(guān)性及其與結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，以期為結(jié)腸癌的臨床診療與預(yù)后判斷提供有價值的參考指標(biāo)。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2009年1月～2012年12月保定市第二醫(yī)院收治并經(jīng)病理證實的結(jié)腸癌患者60例，均為腺癌，同時選擇其癌旁正常組織20例（距癌灶＞10 cm）。所有患者術(shù)前均未行放療、化療及生物靶向治療等，全部患者術(shù)后標(biāo)本均經(jīng)病理證實。其中男36例，女24例；年齡25～78歲，中位年齡59歲；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性29例，陰性31例；高中分化32例，低分化28例；腫瘤直徑≥5 cm 28例，＜5 cm 32例；按美國癌癥聯(lián)合會（AJCC）制訂的TNM病理分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ～Ⅱ期30例，Ⅲ～Ⅳ期30例。所有病例均進(jìn)行電話隨訪，死亡時間以月為計量單位，隨訪至2015年12月31日，隨訪時間1～36個月，無失訪病例。

1.2試劑

Bmi-1兔抗人單克隆抗體購自美國AB-GENT公司，Ki-67兔抗人單克隆抗體，即用型S-P免疫組化染色試劑盒均為Santa cruz公司產(chǎn)品（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司），用已知陽性標(biāo)本作為陽性對照，以PBS代替一抗為陰性對照。

1.3方法

所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，連續(xù)制成4 μm厚切片若干張，均進(jìn)行SP法免疫組化染色，實驗步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4免疫結(jié)果的判定

Ki-67定位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒沉著，每張切片觀察5個高倍鏡視野，每個視野計數(shù)100個腫瘤細(xì)胞，共計500個細(xì)胞，陽性細(xì)胞所占比例≥10%為陽性，＜10%為陰性。Bmi-1陽性染色為棕黃褐色顆粒，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。采用雙評分法判定結(jié)果：①5個高倍鏡視野（400倍），按陽性細(xì)胞百分率（A值）評分：＜25%為1分，25%～50%為2分，＞50%為3分；②按染色強(qiáng)度（B值）評分：不著色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。結(jié)果判定：A+ B＞2分為陽性，≤2分為陰性。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，相關(guān)性檢驗采用Spearman檢驗，生存率計算采用Kaplan-Meier法，檢驗采用Log-Rank法；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1Ki-67、Bmi-1在結(jié)腸癌及癌旁組織中的表達(dá)

Ki-67的表達(dá)主要定位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒，見圖1。Ki-67在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)率高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），Bmi-1的表達(dá)主要定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒，見圖2。Bmi-1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)率高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1　Ki-67、Bmi-1在結(jié)腸癌和癌旁正常組織中的表達(dá)［n（%）］

圖1　Ki-67在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)（SP，400×）

圖2　Bmi-1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)（SP，400×）

2.2Ki-67、Bmi-1表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系

Ki-67、Bmi-1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)均與年齡、性別、腫瘤大小無關(guān)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度、TNM分期相關(guān)，且隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，組織分化程度減低，TNM分期增加，Ki-67、和Bmi-1的表達(dá)逐漸增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2　Ki-67、Bmi-1蛋白表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系［n（%）］

2.3ki-67、Bmi-1的表達(dá)在結(jié)腸癌中的相關(guān)性

本研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67與Bmi-1均陽性表達(dá)者37例，均陰性表達(dá)者12例，Spearman相關(guān)分析顯示，上述兩者呈正相關(guān)（r=0.572，P＜0.01）。見表3。

表3　結(jié)腸癌組織中VEGF的蛋白表達(dá)與Bmi-1的相關(guān)性

2.4Ki-67、Bmi-1表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

本組研究中60例結(jié)腸癌患者3年生存率為65.00%（39例），Ki-67表達(dá)陽性者（生存率為62.22%）與陰性者（生存率為73.33%）之間3年生存率經(jīng)Log-Rank法檢驗差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），Log-Rank法檢驗比較Bmi-1表達(dá)陽性者（生存率為60.00%）與陰性者（生存率為75.00%）的3年生存率，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見圖3～4。

圖3　Ki-67陽性者與陰性者生存率

圖4　Bmi-1陽性者與陰性者生存率

3　討論

Ki-67是一種核蛋白，可作為細(xì)胞增殖的標(biāo)志物，在細(xì)胞增殖的各期（G1、S、G2和M期）中均有表達(dá)，但在細(xì)胞靜止G0期不表達(dá)，大量的研究表明Ki-67的表達(dá)與腫瘤臨床病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，對于判斷腫瘤的性質(zhì)及侵襲力及評估腫瘤預(yù)后也十分重要［4-7］。本研究發(fā)現(xiàn)Ki-67在結(jié)腸癌組織中表達(dá)明顯升高，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度低、TNM分期晚者其表達(dá)明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），這與既往研究結(jié)果一致［8］。在前列腺癌及乳腺癌中，Ki-67被認(rèn)為是一個獨立的預(yù)后因子［2，9-10］，而在結(jié)直腸癌中Ki-67的預(yù)后價值仍存在爭議，Allegra等［11］研究認(rèn)為在結(jié)直腸癌中Ki-67表達(dá)與良好的預(yù)后相關(guān)，但Chen等［12］研究認(rèn)為在結(jié)直腸癌中Ki-67高表達(dá)的患者預(yù)后較差。本研究隨訪3年發(fā)現(xiàn)Ki-67陽性組生存率與Ki-67陰性組生存率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），由此認(rèn)為Ki-67目前還不能作為預(yù)測結(jié)直腸癌預(yù)后的參考因子。

Bmi-1可能通過多種機(jī)制介導(dǎo)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，部分學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)Bmi-1可增強(qiáng)鼻咽癌細(xì)胞的運(yùn)動和侵襲力，乳腺癌中Bmi-1的表達(dá)和病理分型、臨床分期及不良預(yù)后密切相關(guān)，胃癌中Bmi-1的表達(dá)與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后相關(guān)［13-17］。本研究發(fā)現(xiàn)Bmi-1的表達(dá)在結(jié)腸癌組織中明顯升高，且隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，組織分化程度減低，TNM分期增加，Bmi-1的表達(dá)逐漸增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），由此可以推測Bmi-1在結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移、惡化中具有重要作用，研究研究發(fā)現(xiàn)，高表達(dá)Bmi-1的大腸癌、鼻咽癌患者預(yù)后較差，并認(rèn)為Bmi-1是判斷不良預(yù)后的參考指標(biāo)［18-20］，但本研究發(fā)現(xiàn) Bmi-1陽性組患者3年生存率與Bmi-1陰性組患者3年生存率無明顯差異（P＞0.05），不支持上述觀點，由此不能認(rèn)為Bmi-1表達(dá)陽性組患者預(yù)后更差。

惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個復(fù)雜的過程，涉及到細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移［21］，是多種因素共同作用的結(jié)果，本研究結(jié)果經(jīng)Spearman相關(guān)分析顯示Ki-67表達(dá)水平與Bmi-1的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)（r=0.572，P＜0.01），提示在結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展、惡化的過程中二者可能具有協(xié)同作用，但本研究僅是蛋白水平進(jìn)行分析，Ki-67及Bmi-1基因?qū)W及分子水平相互影響機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

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Expression and prognosis analysis of Ki-67 and Bmi-1 in colon cancer

LIU ZhiZHAO ChunqingLI WeiZHANG BinGAO LixueYAN WeiLIU SongZHANG Tao
Department of General Surgery，the Second Hospital of Baoding City，Hebei Province，Baoding071000，China

R735.3

A

1673-7210（2016）08（b）-0122-04

2016-05-10本文編輯：任念）