李　黎

（1.黑龍江省科學(xué)院自然與生態(tài)研究所濕地與生態(tài)保育國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱150040）

東北龍膽組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)研究

李黎

（1.黑龍江省科學(xué)院自然與生態(tài)研究所濕地與生態(tài)保育國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱150040）

以東北龍膽的莖尖、莖段作為外植體，對(duì)其組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)進(jìn)行研究，結(jié)果表明：誘導(dǎo)不定芽分化的最佳培養(yǎng)基是MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L，分化率可達(dá)96.7%，最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.3 mg/L，生根率可達(dá)97.5%，組培苗最適合的移栽基質(zhì)為珍珠巖，移栽成活率可達(dá)90.0%。

東北龍膽；組織培養(yǎng)；激素；培養(yǎng)基

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

東北龍膽（Gentiana manshurica Kitag），為龍膽科多年生草本植物，以根及根莖入藥［1，2］，植株高25-60cm，花藍(lán)紫色，花期8-9月份［3］。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1外植體消毒

將東北龍膽的莖尖、莖段放入清水中，加入少量洗衣粉浸泡攪拌2-3min，然后放入流水沖洗4-6h，在無(wú)菌條件下用75%酒精殺菌60s，再轉(zhuǎn)入0.1%HgCl2中滅菌，滅菌時(shí)間分別為8、10、12min，然后用無(wú)菌水沖洗6-7次，接種于MS培養(yǎng)基上，一周后統(tǒng)計(jì)污染率（污染率=外植體污染數(shù)/外植體接種數(shù)×100%）。

1.2.2不定芽誘導(dǎo)

在MS培養(yǎng)基上調(diào)節(jié)6-BA和NAA的濃度，采用2因素3水平的正交設(shè)計(jì)，研究6-BA和NAA的9種不同組合，對(duì)不定芽分化的影響。每次接種30瓶，每瓶1株，每一處理設(shè)3次重復(fù)，其中6-BA含量為1.0、2.0、3.0mg/L共3個(gè)水平，NAA含量為0.1、0.2、0.3 mg/L共3個(gè)水平，共計(jì)9個(gè)處理。調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值在5.8-6.2之間，30d后統(tǒng)計(jì)分化率（分化率=外植體分化數(shù)/外植體成活數(shù)×100%）。

1.2.3根的誘導(dǎo)

將分化產(chǎn)生高約2.0-2.5cm的不定芽，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)。試驗(yàn)方案如下：以MS和1/2MS為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的IBA（0.1、0.2、0.3 mg/ L）和NAA（0.1、0.2、0.3 mg/L），共計(jì)10個(gè)處理，生根培養(yǎng)30d后，組培苗生根數(shù)趨于穩(wěn)定后統(tǒng)計(jì)生根率（生根率=生根株數(shù)/成活株數(shù)×100%）和平均根長(zhǎng)。

1.2.4移栽基質(zhì)篩選

過(guò)渡移栽是組織培養(yǎng)過(guò)程中比較重要的環(huán)節(jié)，基質(zhì)的選擇尤為關(guān)鍵，基質(zhì)的選擇直接影響到組培苗的成活率，將組培苗移栽到珍珠巖，河沙，草炭以及混合基質(zhì)上，對(duì)過(guò)渡移栽基質(zhì)進(jìn)行篩選試驗(yàn)。

1.2.5培養(yǎng)條件：白天溫度（23±2）℃，夜間不低于15℃，光照時(shí)間為12-14h/d，光照強(qiáng)度為2000Lx。

表1　消毒時(shí)間滅菌效果的影響

2　結(jié)果與分析

2.1滅菌劑對(duì)東北龍膽外植體滅菌效果的影響

材料的滅菌是植物組織培養(yǎng)的首要環(huán)節(jié)，既要將外植體表面微生物徹底殺死，又要盡可能減少對(duì)外植體組織和細(xì)胞的傷害。從表l可以看出，隨著滅菌時(shí)間的延長(zhǎng)，外植體的污染率呈現(xiàn)出由高到低的趨勢(shì)。在0.1%的HgCl2中滅菌10min時(shí)污染率為10%，雖然隨著滅菌時(shí)間的延長(zhǎng)，污染率會(huì)逐漸降低，但死亡率也會(huì)隨之上升，因此根據(jù)污染率和死亡率兩個(gè)因素考慮，東北龍膽最佳的滅菌方法：75%酒精殺菌60s后再用0.1%HgCl2滅菌10min。

2.2激素配比對(duì)不定芽分化的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明，不定芽的分化與6-BA和NAA兩種激素的配比密切相關(guān)。從表2的方差分析結(jié)果顯示，東北龍膽在處理4和處理5的培養(yǎng)基中長(zhǎng)勢(shì)良好，東北龍膽在處理4上即：MS+6-BA2.0mg/L+ NAA0.1mg/L分化率可達(dá)96.7%，與其它處理間差異極顯著（P＜0.01）。因此培養(yǎng)基MS附加激素由濃度為2.0mg/L的6-BA和濃度為0.1mg/L的NAA組合是誘導(dǎo)不定芽分化的最佳激素組合。

2.3不同培養(yǎng)基對(duì)生根的影響

從表3可以看出，在NAA和IBA濃度相同情況下，在MS培養(yǎng)基中生根效果不理想，生根率低，在1/2MS培養(yǎng)基中生根率高，說(shuō)明作為東北龍膽的生根培養(yǎng)基1/2 MS培養(yǎng)基的培養(yǎng)效果優(yōu)于MS培養(yǎng)基。NAA與IBA兩種激素對(duì)組培苗的生根均有促進(jìn)作用，兩種激素附加到1/2MS培養(yǎng)基中，組培苗在1/2MS+IBA0.3mg/L培養(yǎng)基中生根率最高，可達(dá)97.5%，且根的粗細(xì)長(zhǎng)短比較適中，成活率高，所以東北龍膽的最佳生根培養(yǎng)基為：1/2MS+IBA0.3mg/L。

表2　激素配比對(duì)不定芽分化的影響及方差分析

表3　不同培養(yǎng)基對(duì)生根的影響

表4　不同栽培基質(zhì)對(duì)組培苗成活率的影響

2.4移栽基質(zhì)的選擇

將生根苗分別栽入珍珠巖，草炭，河沙以及不同比例的混合基質(zhì)，30d后對(duì)成活率、植株生長(zhǎng)情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表4。從表4可以看出，在7種移栽基質(zhì)中，1號(hào)基質(zhì)扎根效果最好，成活率可達(dá)90%，植株長(zhǎng)勢(shì)好，主要是珍珠巖的透氣性好，河沙和草炭的透氣性較差，易造成植株腐爛，導(dǎo)致成活率降低。

3　小結(jié)

3.1東北龍膽的組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)以莖尖、莖段作為外植體，滅菌方法為75%酒精殺60s+0.1%HgCl2滅菌10min。

3.2東北龍膽不定芽分化的最佳培養(yǎng)基及激素配比為：MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L，分化率可達(dá)96.7%。

3.3東北龍膽組培苗的最佳生根培養(yǎng)基為：1/2MS+ IBA0.3mg/L，生根率可達(dá)97.5%，組培苗移栽馴化的適宜基質(zhì)為珍珠巖，移栽成活率可達(dá)90%。

［1］孫天國(guó)，沙偉.東北龍膽莖段組織培養(yǎng)的研究［J］.北方園藝，2010（5）：148-150.

［2］孫閻，王臣，劉鳴遠(yuǎn).東北龍膽花芽分化研究［J］.哈爾濱師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào)，2007，23（3）：100-103.

［3］翟瑞龍，朱勇.龍膽屬植物園藝學(xué)研究進(jìn)展［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009（37）26：12506-12508.

（2016-06-13收稿M編輯）

The study of propagation techniques by tissue culture of Gentiana manshuica Kitagawa

LI Li
（Institute of Natural Resources and Ecology，HAS.National and Provincial Joint Engineering Laboratory ofWetlands and Ecological Conservation，Harbin 150040，China）

The study of propagation techniques by tissue culture of stem tips and stem segements of Gentiana manshuica Kitagawa were used as explants.The results showed that the best medium of induction on adventitious bud was MS+6-BA2.0mg/L+ NAA0.1mg/L，and the ratio of differentiation was 96.7%，the best medium of rooting was 1/2MS+IBA0.3 mg/L，and the ratio of rooting was 97.5%.The best matrix of transp lanting of the tissue culture seedling was the perlite，and the ratio of transplanted survival was 90.0%.

Gentianamanshuica Kitagawa；Tissue culture；Hormone；Medium

S603.8

A

1003-7853（2016）04-0088-02

李黎（1976-），女，高級(jí)工程師，碩士，研究方向：主要從事園林植物育種及組織培養(yǎng)方面的研究。