白　潔,李培奮,何　靈,高　晨,哈小琴,張全華△

(1.蘭州軍區(qū)總醫(yī)院安寧分院檢驗科，蘭州 730070;蘭州軍區(qū)總醫(yī)院：2.胸外科；3.檢驗科，蘭州 730070)

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·論著·

9項呼吸道病原體血清IgM抗體檢測在呼吸道感染中的臨床價值

白潔1,李培奮1,何靈1,高晨2,哈小琴3,張全華1△

(1.蘭州軍區(qū)總醫(yī)院安寧分院檢驗科，蘭州 730070;蘭州軍區(qū)總醫(yī)院：2.胸外科；3.檢驗科，蘭州 730070)

目的通過檢測695例呼吸道感染者病原體IgM抗體表達(dá)情況，為臨床更好地選擇治療方案提供依據(jù)。方法采用間接免疫熒光法檢測2015年9月至2016年3月來蘭州軍區(qū)總醫(yī)院安寧分院和蘭州軍區(qū)總醫(yī)院呼吸科、小兒科、胸外科門診就診和住院的呼吸道感染患者695例血液中的9項病原體IgM抗體，并分析檢出情況。結(jié)果695例患者中，9項病原體進(jìn)行檢測，單項病原體檢測陽性率33.9%，排在前3位的是肺炎支原體(MP)、乙型流感病毒(IFB)、呼吸道合胞病毒(RSV)，檢出率依次為MP 14.1%，IFB 9.6%，RSV 4.8%，2項病原體混合感染檢出率7.79%；MP、IFB在不同季節(jié)檢出率有明顯區(qū)別，Q熱立克次體檢出率無明顯季節(jié)變化，男、女比例有明顯差異。結(jié)論本地區(qū)呼吸道感染病原體檢出率以MP、IFB、RSV感染為前3位。

呼吸道感染;間接免疫熒光法;非典型病原體

近年來，環(huán)境污染等因素的影響，使呼吸道感染患者呈逐年上升的趨勢。引起呼吸道疾病的病原體種類繁多，其感染引起的癥狀相似，在臨床上難以鑒別，很難進(jìn)行有效的治療。因此，如何對主要呼吸道感染進(jìn)行檢測和監(jiān)控一直是1項重要的研究熱點[1]。本文檢測血清中9項呼吸道常見病原體IgM抗體，為臨床合理治療提供依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料2015年8月至2016年3月來蘭州軍區(qū)總醫(yī)院安寧分院和蘭州軍區(qū)總醫(yī)院呼吸科、小兒科、胸外科門診就診和住院的呼吸道感染患者695例，其中男423例，女272例。臨床初步診斷：急性支氣管炎、支氣管肺炎、大葉性肺炎、支氣管哮喘、發(fā)熱待查等疾病。符合國內(nèi)采用的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。所選病例均不合并自身免疫性疾病、白血病及腫瘤疾病。

1.2儀器與試劑采用CX-22奧林巴斯熒光顯微鏡。9項呼吸道感染病原體可檢測針對9種非典型病原體的IgM抗體，包括嗜肺軍團菌、肺炎支原體、Q熱立克次體、肺炎衣原體、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒。

1.3試驗原理與方法

1.3.1試驗原理間接免疫熒光法是基于待測樣本中的抗體與吸附在載玻片上的抗原發(fā)生的反應(yīng)。樣本中存在的特異性抗體與抗原反應(yīng)，未與抗原結(jié)合的免疫球蛋白在洗滌步驟中除去。在下一步驟中，抗原-抗體復(fù)合物與熒光素標(biāo)記的抗人球蛋白反應(yīng)，用免疫熒光顯微鏡觀察結(jié)果。

1.3.2方法采用甲型流感病毒抗體測定，嚴(yán)格按照說明書操作。步驟如下：無菌采集靜脈血3 mL，注入無抗凝劑干燥管。離心后分離血清，用磷酸鹽緩沖液(PBS)按1∶1的比例稀釋血清，將25 L血請加入25 L PBS溶液中，再加入150 L吸附劑，混勻后，3 000 r/min離心15 min。在載玻片的每1孔中加15 L上清液，在另一張載玻片的每孔中加入15 L不稀釋的陽性對照和不稀釋的陰性對照；然后放入濕盒37 ℃溫育90 min。用 PBS沖洗載玻片并浸泡在PBS中，放在搖床上搖動15 min，再用去離子水沖洗3～5次，自然晾干，每孔加入15 L FITC結(jié)合物，放入濕盒37 ℃溫育30 min；用PBS沖洗載玻片后，浸泡在PBS中放在搖床上搖動15 min，再用去離子水沖洗3～5次，自然晾干，加封閉介質(zhì)封片鏡檢。如果不能立即觀察，可將其避光放置于2～8 ℃環(huán)境中，但不能放置超過24 h。

1.4結(jié)果判斷陽性結(jié)果：可以觀察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒的整個包被孔中有1%～5%細(xì)胞的細(xì)胞核出現(xiàn)蘋果綠熒光。軍團菌、衣原體和立克次體中所有菌體出現(xiàn)熒光綠色，支原體出現(xiàn)細(xì)胞外圍熒光綠色。陰性結(jié)果：可以觀察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、軍團菌、衣原體和立克次體，支原體的細(xì)胞呈現(xiàn)紅色。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

2.1895例呼吸道感染者病原體檢測結(jié)果895例呼吸道感染者中，單項病原體檢測陽性率為33.9%，引起呼吸道感染的病原體中排在前3位的是肺炎支原體、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒，檢出率依次為肺炎支原體14.1%，乙型流感病毒9.6%，呼吸道合胞病毒4.8%，副流感病毒3.4%，腺病毒2.1%，嗜肺軍團菌0.3%，Q熱立克次體0.4%。2項病原體混合感染檢出率為7.79%，無3項和4項病原體混合感染，見表1。

2.2不同季節(jié)呼吸道感染檢測結(jié)果比較肺炎支原體、乙型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒在不同季節(jié)檢出率有明顯的區(qū)別，乙型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒3種病毒在冬季發(fā)病率明顯偏高，而肺炎支原體在秋季和春季的發(fā)病率高，見表2。

2.3不同年齡呼吸道感染檢測結(jié)果比較238例呼吸道感染陽性病例中，肺炎支原體的發(fā)病年齡平均20.2歲，多發(fā)生于青年中，與其他病原體的發(fā)病平均年齡間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；乙型流感病毒的發(fā)病平均年齡45.2歲，腺病毒的發(fā)病平均年齡32.1歲，說明乙型流感病毒和腺病毒多發(fā)于中、青年中，在老年人中的發(fā)病率不高；Q熱立克次體發(fā)病的平均年齡為28.2歲，且4例均為男性，說明此病多發(fā)于青壯年男性，其余病毒發(fā)病年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

表1　　9項呼吸道病原體的陽性情況

表2　　不同季節(jié)9項病原體感染分布[n(%)]

3　討　　論

呼吸道感染分為上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染是指自鼻腔到喉部之間急性炎性反應(yīng)的總稱。下呼吸道感染包括急性支氣管炎、慢性支氣管炎、肺炎、支氣管擴張等，由病毒、細(xì)菌、支原體、衣原體等微生物引起[3]。臨床顯示，非典型病原體是最常見的引起呼吸道感染的病原體，包括嗜肺軍團菌、肺炎支原體、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒等。因此，非典型病原體的及時、快速檢測有著重要的意義[4]。非典型呼吸道病原體的實驗室檢測方法多種多樣，主要有細(xì)菌的病原體分離培養(yǎng)及組織細(xì)胞培養(yǎng)法，血清學(xué)和直接檢測法，免疫熒光抗體法，酶免疫測定，核酸擴增法(PCR)。以往檢測呼吸道病原體的金標(biāo)準(zhǔn)是分離培養(yǎng)及組織細(xì)胞培養(yǎng)法，但因其實驗室要求高，且培養(yǎng)時間長，陽性率低等問題很難實現(xiàn)。分子檢測技術(shù)已經(jīng)被作為呼吸道病原體檢測的新標(biāo)準(zhǔn)，但是PCR很難達(dá)到多種病原體的系列檢測。免疫熒光技術(shù)利用抗原抗體反應(yīng)的高敏感性、高特異性和熒光的敏感性，能夠快速而準(zhǔn)確地檢測多種病原體，且實驗室條件不需太高，很多實驗室都能完成，耗時短，陽性率高，特別適合混合感染。本文采用間接免疫熒光法聯(lián)合檢測9項呼吸道病原體的IgM，具有特異性強、敏感性高等特點，靈敏度≥93.8%，特異性≥96.3%。僅1份標(biāo)本就能檢測9項呼吸道病原體，可在短時間內(nèi)完成檢測，既可確定致病因素又可發(fā)現(xiàn)多種病原體的混合感染，便于臨床醫(yī)生對患者進(jìn)行針對性治療。

本研究顯示，呼吸道感染患者血清中9項病原體的IgM抗體總檢出率為34.7%，單項病原體檢出率為26.2%，混合感染檢出率為8.5%，低于國內(nèi)其他學(xué)者報道的水平，這可能與蘭州地區(qū)的氣候環(huán)境、實驗室檢測方法不同有關(guān)[5]。在引起呼吸道感染的病原體中，排在前3位的是肺炎支原體、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒，說明支原體感染仍然是引起呼吸道感染的首要原因，這與林傳俊等[6]的報道一致。支原體是1種缺乏細(xì)胞壁的微生物，可在呼吸道黏膜上皮潛伏，主要通過呼吸道飛沫傳播。本地區(qū)呼吸道感染患者中病毒感染19.9%，占病原體檢出率的57.3%，引起呼吸道疾病的病毒主要是乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒感染。乙型流感病毒主要侵襲呼吸道上皮細(xì)胞，引起細(xì)胞產(chǎn)生空泡，造成黏膜充血，水腫和分泌物增加，從而產(chǎn)生鼻塞、流涕、咽喉疼痛、干咳以及其他上呼吸道感染癥狀，當(dāng)病毒蔓延至下呼吸道，則可能引起毛細(xì)支氣管炎和間質(zhì)性肺炎。呼吸道合胞病毒是1種RNA病毒，屬于副黏液病毒，是嬰幼兒下呼吸道感染(包括毛細(xì)支氣管炎和肺炎)最重要的病因之一，成人主要表現(xiàn)為上呼吸道感染，一般多見于冬、春季。研究顯示，肺炎支原體、乙型流感病毒在不同的季節(jié)里檢出率有明顯區(qū)別，乙型流感病毒在冬季發(fā)病率明顯偏高，而肺炎支原體在秋、春季節(jié)多發(fā)，其余病原體檢出率未見明顯季節(jié)差異。主要原因可能是冬季蘭州氣溫低，天氣干燥，人體的抵抗力下降，從而使呼吸道防御功能降低，導(dǎo)致流感病毒長驅(qū)直入并迅速繁殖，引起呼吸道疾病。另外，Q熱立克次體發(fā)病率較低，僅0.4%，且無明顯季節(jié)變化，但男、女比例有明顯差異。本文檢測出4例Q熱立克次體感染者均為青年男性，因此，臨床對于青年男性不明原因的發(fā)熱、頭痛、乏力等應(yīng)考慮Q熱立克次體感染。

綜上所述，各種常見呼吸道疾病大多數(shù)是由不同種類非典型病原體感染引起的，必須重視呼吸道疾病非典型病原體感染的診斷和治療，才能有效防治呼吸道疾病，避免盲目治療和混合感染的發(fā)生。因此，呼吸道9項聯(lián)合檢測試劑IgM對呼吸道感染病原體的篩查有十分重要的臨床價值。

[1]董玉琳.呼吸道病原體九項聯(lián)檢在小兒急性呼吸道疾病中的應(yīng)用[J]．中外醫(yī)療，2012，31(33)：170-172．

[2]陸再英，鐘南山．內(nèi)科學(xué)[M]．7版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：11-13．

[3]李素芬，陳賢華．2 465例呼吸道感染患者肺炎支原體IgM抗體檢測分析[J]．廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2014，31(4)：629-630．

[4]尤蘭華，陳杭薇，王會敏．呼吸道非典型病原體檢測技術(shù)的應(yīng)用與評價[J]．中國醫(yī)藥導(dǎo)刊，2012，14(1)：35-37．

[5]楊俊玲，趙鳳蓮，張煥英．406例呼吸道感染患者血清呼吸道病毒IgM抗體檢測結(jié)果分析[J]．臨床內(nèi)科雜志，2010，27(3)：196-197．

[6]林傳俊，左芳，汪宏良．1 503例9種呼吸道感染病原體檢測結(jié)果分析[J]．國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(10)：1254-1255．

The value of IgM antibody with 9 respiratory pathogen in serum to respiratory tract infection

BAIJie1,LIPeifen1,HELing1,GAOChen2,HAXiaoqin3,ZHANGQuanhua1△

(1.DepartmentofLaboratory,AnningBranchHospital;LanzhouGeneralHospitalofPeople′sLiberationArmy，Lanzhou730070,China;2.DepartmentofThoracicSurgery,LanzhouGeneralHospitalofPeople′sLiberationArmy;3.DepartmentofLaboratory,LanzhouGeneralHospitalofPeople′sLiberationArmy,Lanzhou730070,China)

ObjectiveThis study was provided the evidence of infection respiratory tract clinical treatment through examining 695 cases of pathogen.MethodsUsing indirect immunofluorescence(IFA) IgM antibody with 9 respiratory pathogen in serum of 695 patients from August 2015 to March 2016 with respiratory tract infection from espiratory,pediatrician,thoracic surgery clinics were detected in this paper in order to provide the basis for clinical treatment.ResultsThe results showed that single pathogen detection positive rate was 33.9% in 695 cases,The top three of positive rate were MP(14.1%),IFB(9.6%),RSV(4.8%);the positive rate of two mixed infection was 7.79%;The postive rate of MP,IFB have obvious difference in seasons,but which of Coxiella burneti was no obvious seasonal difference;there was an obvious difference between the sex ratio.ConclusionMP,IFB,RSV infection were given priority to detection rate in our region.

respiratory tract infection;indirect immunofluorescence method;atypical pathogens

白潔，女，主管技師，主要從事臨床免疫學(xué)與檢驗的相關(guān)研究?！?/p>

,E-mail:13919935618@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.18.026

A

1673-4130(2016)18-2573-03

2016-04-11

2016-06-17)