張鈺　魏勝林　謝立群

摘要：通過對拙政園楓楊（Pterocarya stenoptera）中空的樹干中真菌的分離，得到可以在楓楊木上寄生的4個菌株，初步鑒定其種類為2個青霉菌（Penicillium spp.）、1個木霉菌（Trichoderma sp.）、1個曲霉菌（Aspergillus sp.）。使用代森錳鋅、福美雙、甲基托布津、多菌靈和烯唑醇5種不同類型的殺菌劑進行抑菌試驗。結(jié)果表明，代森錳鋅的抑制作用最強，福美雙次之；甲基托布津和多菌靈對這4種木腐菌的生長均有一定的影響；烯唑醇的抑制作用隨菌類的不同而不同，以對曲霉菌的抑制作用最為明顯，而對于其他3個菌株的抑菌效果相對弱些。

關鍵詞：楓楊（Pterocarya stenoptera）； 木腐真菌； 殺菌劑

中圖分類號：S432.4+4 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）08-2002-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.08.022

Abstract： Four fungal strains were isolated from in the hollow trunks of Pterocarya stenoptera in Humble Administrator's Garden. These strains， which confirmed its parasitism in the tree， were identified as Trichoderma sp.， Aspergillus sp. and 2 Penicillium sp.. Mancozeb， thiram， mildothane， carbendazim and diniconazole 5 types of fungicides were used fungistasis test on these fungi. The results showed that the mancozeb had the strongest fungistasis action， and thiram secondly. Mildothane and carbendazim had certain effects on the growth of these four fungi. However， fungistasis effect of diniconazole varies with fungi species， aspergillus was the most obvious， and the other 3 strains were relatively weak.

Key words： Pterocarya stenoptera； wood rotting fungi； fungicides

在蘇州園林中，古樹名木是世界遺產(chǎn)的重要組成部分，同時也是蘇州園林的有機組成部分，保護工作大多集中在這些樹木的景觀作用、歷史人文價值的保護與傳承等，或集中在對古樹名木的常規(guī)保護，古樹由于生長年代久遠，生長環(huán)境異化，樹干存在著不同程度被腐蝕的情況。據(jù)初步統(tǒng)計，蘇州各個園林中，楓楊（Pterocarya stenoptera）、榔榆、銀杏、圓柏、黑松等10余個樹種存在著樹干腐蝕中空，成為開放和半敞開式，或呈上下貫通的圓筒式洞穴，嚴重削弱樹勢，降低了枝干的支撐能力和負載能力，甚至直接威脅樹體生存[1]，其中以拙政園中的楓楊情況最為嚴重。拙政園現(xiàn)有古楓楊樹7株，樹齡100～160 a，存在的主要問題是樹干木質(zhì)部位被侵蝕與腐爛，導致樹干中空或樹干的殘損。

木材腐朽是古樹名木保護和古建筑、木橋梁保護中的難題[2]，引起活立木腐朽的主要原因是菌類的寄生，也有其他原因致死后被菌類腐生[3，4]。一般認為，活立木腐朽是由多種真菌、細菌或其他微生物在一定條件下綜合引發(fā)的。本試驗通過對腐朽的楓楊活立木上的真菌進行分離并初步鑒定，以及殺菌劑的抑菌試驗，為有效防治楓楊病害提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑

70%代森錳鋅可濕性粉劑，四川國光農(nóng)化股份有限公司生產(chǎn)；酰烯·福美雙可濕性粉劑、4.5%酰烯嗎啉、30.5%福美雙，天津市綠亨化工有限公司生產(chǎn)；70%甲基托布津可濕性粉劑，新沂市科大農(nóng)藥生產(chǎn)；80%多菌靈可濕性粉劑，邢臺佰斯特華工科技有限公司生產(chǎn)；12.5%烯唑醇可濕性粉劑，江蘇劍牌農(nóng)藥化工有限公司生產(chǎn)。

1.2 真菌的分離和鑒定

在蘇州拙政園選已腐朽空洞的楓楊，在無菌條件下取無污染部分，剪下2～5 mm大小的木塊，置于PDA平板上，每個平板上放5塊，置于26 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～5 d，并通過平板劃線法對所得到的菌進行純化，得若干個不同的菌株。

將上述菌株分別接種至滅菌的楓楊枝段（直徑3 cm，長8 cm）上，觀察菌類生長情況，并從枝段上分離真菌。得到與原接種的生長形態(tài)、菌落特點完全一致的菌株4個。

對以上4個菌株的培養(yǎng)物在Leica 2000顯微鏡下觀察，根據(jù)培養(yǎng)物菌落的性狀、孢子、特別是產(chǎn)孢特點進行初步鑒定[5，6]。

1.3 抑菌試驗

將70%代森錳鋅可濕性粉劑、30.5%福美雙可濕性粉劑、70%甲基托布津可濕性粉劑、80%多菌靈可濕性粉劑、12.5%烯唑醇可濕性粉劑5種殺菌劑分別稀釋配制成500、1 000、2 000、4 000、8 000倍的藥劑溶液。

使用紙碟附著法[7]，將滅過菌的6 mm濾紙圓片浸在70%乙醇中20～30 min，待乙醇揮發(fā)后，使用滅菌鑷子將濾紙圓片放入待測的孢子懸浮液中，靜置5 min，在無菌條件下干燥，然后將帶菌的濾紙圓片分別放入稀釋500、1 000、2 000、4 000、8 000倍的5種殺菌劑溶液中，浸泡10 min，用滅菌鑷子夾取濾紙片，放入培養(yǎng)皿中凝固的培養(yǎng)基上，每個培養(yǎng)基上均勻放置4個濾紙片，加以標記。4種菌，每種殺菌劑1個對照，試驗共設25個處理，每個處理重復3次。

將培養(yǎng)基放入溫度25 ℃、濕度70%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d，每天觀察菌的生長狀況，測量菌落的直徑，并計算菌絲的生長速度。

菌絲生長速度V（mm/d）=R/D，其中R為菌落的直徑；D為培養(yǎng)的天數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 真菌的分離及初步鑒定

根據(jù)分離物的培養(yǎng)性狀、菌落形態(tài)及顯微鏡觀察，1號菌菌落生長迅速，白色，呈圓形擴展，后可擴展至培養(yǎng)皿平板，菌落中央產(chǎn)生孢子層后即變成綠色，菌落周圍新生長的菌絲為白色，隨著時間的推移，整個菌落可覆蓋綠色的孢子層，分生孢子梗垂直對稱分枝，分生孢子圓形，初步鑒定為半知菌門絲孢綱木霉屬（Trichoderma sp.）；2、4號菌株菌落圓形，分生孢子梗長而直立，頂端具分枝后呈帚狀，梗有隔膜，分生孢子為圓形或略呈橢圓形，不同的是2號菌株孢子層綠色，4號菌株孢子層灰綠色，初步鑒定2、4號菌株屬于半知菌門絲孢綱青霉屬（Penicillium spp.）；3號菌株菌絲體白色，孢子層初期淡褐色，后轉(zhuǎn)褐色，分生孢子圓形，分生孢子梗頂端膨大呈圓球形囊頂，初步鑒定該菌株為半知菌門，絲孢綱曲霉屬（Aspergillus sp.）。見圖1、圖2。

2.2 殺菌劑對菌株生長的影響

2.2.1 對1號菌株生長的影響 殺菌劑對1號菌株生長速度的影響見圖3。從圖3可以看出，代森錳鋅和福美雙對于1號菌的生長有顯著的抑制作用，隨著殺菌劑稀釋倍數(shù)的增加，對菌絲生長的抑制作用相應減弱。代森錳鋅在4 000倍稀釋液、福美雙在2 000倍稀釋液時，基本可以完全抑制1號菌的生長，代森錳鋅在8 000倍稀釋液時，1號菌平均生長速度為1.033 mm/d，其抑制作用也較為明顯，且在同種稀釋倍數(shù)下，對于1號菌的殺菌抑菌效果比其他幾種殺菌劑相對較好。因此，對于1號菌來說，代森錳鋅的抑菌效果最好，福美雙次之，然后是多菌靈，甲基托布津和烯唑醇的抑制作用最弱。

2.2.2 對2號菌株生長的影響 殺菌劑對2號菌生長速度的影響見圖4。由圖4可以看出，代森錳鋅和福美雙對2號菌有明顯的抑制作用，且基本與殺菌劑的稀釋倍數(shù)呈負相關，即殺菌劑的稀釋倍數(shù)越大，對2號菌的抑制作用越小。代森錳鋅在2 000倍稀釋液、福美雙在500倍稀釋液的情況下，2號菌3 d內(nèi)均未見生長；而福美雙在1 000倍稀釋液和2 000倍稀釋液的情況下，2號菌的生長速度分別為3.017 mm/d和4.200 mm/d，具較強的抑制作用；多菌靈在500倍稀釋液時，2號菌的生長速度為6.342 mm/d，在1 000倍稀釋液和2 000倍稀釋液時，則生長速度分別為6.454 mm/d和9.904 mm/d，抑制作用較福美雙弱。因此，對于2號菌來說，以代森錳鋅的抑制作用最大，福美雙次之，然后是多菌靈，其他兩種殺菌劑的抑制作用相對較弱。

2.2.3 對3號菌株生長的影響 殺菌劑對3號菌生長速度的影響見圖5。由圖5可以看出，代森錳鋅、福美雙和烯唑醇對3號菌的生長均有較強的抑制作用，代森錳鋅在2 000倍稀釋液、福美雙在500倍稀釋液時，未見菌絲生長；福美雙在1 000倍稀釋液時，菌絲生長速度為0.483 mm/d，抑制作用較強；烯唑醇對3號菌的抑制作用也較為明顯，在不大于500倍稀釋液時，菌絲體沒有生長，在其他濃度時菌絲的生長速度也比較小；甲基托布津和多菌靈對3號菌的抑制作用較弱。

2.2.4 對4號菌株生長的影響 殺菌劑對4號菌生長速度的影響見圖6。由圖6可以看出，代森錳鋅和福美雙對4號菌生長有明顯的抑制作用，殺菌劑稀釋倍數(shù)越大，這兩種殺菌劑的抑制作用越不明顯。代森錳鋅在2 000倍稀釋液時，未見菌絲生長，在4 000倍稀釋液和8 000倍稀釋液時，菌絲生長速度分別為1.096 mm/d和1.675 mm/d，表明有較強的抑制作用；福美雙在供試濃度范圍內(nèi)，菌絲生長速度均較小，與對照組14.404 mm/d的生長速度差別十分明顯；多菌靈、烯唑醇和甲基托布津的抑制作用則較弱。

3 小結(jié)與討論

本研究從楓楊腐朽木中分離得到4個菌株，結(jié)合顯微形態(tài)觀察，初步鑒定所得菌株分別屬于半知菌門的木霉屬、青霉屬和曲霉屬3個屬。

試驗表明，試驗所用5個不同類型的殺菌劑中，代森錳鋅對4種菌的抑制作用最強，特別是在2 000倍稀釋液時，4種菌均未見生長，甚至在8 000倍稀釋液時，對1號菌和4號菌的抑菌效果仍非常明顯；福美雙對4種菌有較強的抑制作用，在1 000倍稀釋液時，抑制作用較為明顯，在2 000倍稀釋液以下，1號菌均沒有生長，在500倍稀釋液以下，對2號菌和3號菌，抑制作用也比較明顯，對4號菌有一定的抑制作用；甲基托布津和多菌靈對于4種木腐菌的生長均有一定的影響，但是抑菌效果較代森錳鋅和福美雙弱，且在各濃度之間的差異不明顯；烯唑醇對3號曲霉菌的抑制作用最為明顯，在500倍稀釋液時，3號菌沒有生長，而對其他3個菌株的抑菌效果相對弱些。

不同殺菌劑對4個菌株的影響不同，可能與5種殺菌劑的化學結(jié)構(gòu)與殺菌機理不同有關。代森錳鋅、福美雙和甲基托布津?qū)儆诹虼被姿狨ヮ?，多菌靈屬于苯并咪唑類，烯唑醇屬于三唑類化學藥劑；代森錳鋅和福美雙的作用方式是多位點聯(lián)合活性，甲基托布津和多菌靈的作用方式是抑制有絲分裂和細胞分裂，烯唑醇的作用方式是抑制膜中固醇的生物合成[8]。筆者認為，可能與試驗樣本相關，在蘇州園林古樹名木的防腐、防病蟲中，甲基托布津和多菌靈，使用最多，以至于樹木上存在的菌類對這類殺菌劑較為適應，而對其他殺菌劑敏感。因此，在實踐中，殺菌劑的交替使用顯得十分重要。

引起楓楊腐朽的主要原因除了多種真菌[9，10]寄生外，還可能有細菌或其他微生物及原生動物，甚至有昆蟲活動的參與，關于細菌的種類和作用也缺乏研究。根據(jù)在拙政園的長期定點觀察，推測木材在腐朽的不同階段，優(yōu)勢菌類有所差別，而半知菌類真菌的寄生生長，可能為其他真菌的寄生起著促進作用。相關問題還有待于進一步的研究。

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