張維林　王長(zhǎng)春　胡海濤　楊玲

（浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，浙江金華321004；第一作者：wlzhangwhu@163.com；*通訊作者：yangl@zjnu.cn）

大田越冬水稻種子的篩選鑒定

張維林王長(zhǎng)春胡海濤楊玲*

（浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，浙江金華321004；第一作者：wlzhangwhu@163.com；*通訊作者：yangl@zjnu.cn）

連續(xù)陰雨與早春低溫是影響我國(guó)南方水稻生產(chǎn)的主要不利氣候因素，常導(dǎo)致水稻爛芽和爛種。本研究通過在自然條件下篩選大田中越冬后而能夠在翌年發(fā)芽成長(zhǎng)為植株的方式，以期獲得成苗率高、爛芽爛種率低的種質(zhì)資源。結(jié)果表明，172份種質(zhì)在自然條件下經(jīng)歷冬季后，絕大部分種質(zhì)的種子腐爛，僅Kasalath和日本晴種子在大田越冬后能發(fā)芽生長(zhǎng)。這兩種常規(guī)水稻種子大田越冬特性的發(fā)掘，將為培育降低爛芽爛種率的優(yōu)良品種提供寶貴種質(zhì)資源。

水稻；越冬；種子；發(fā)芽；種質(zhì)

水稻是我國(guó)重要的糧食作物。水稻種植過程中，種子成本是農(nóng)民種植水稻的主要支出之一。我國(guó)南方稻作區(qū)早春育苗過程中出現(xiàn)的爛芽和爛種對(duì)當(dāng)?shù)厮旧a(chǎn)具有較大危害［1］。為了補(bǔ)種，農(nóng)民必須重新購(gòu)買種子，從而增加購(gòu)種成本；同時(shí)，重新購(gòu)種也將延遲播種時(shí)間，致使原本可以播種兩茬而現(xiàn)在只能播種一茬，不僅減少農(nóng)民的糧食收成，還造成土地資源的浪費(fèi)。

水稻在一般儲(chǔ)藏條件下第2年就開始陳化變質(zhì)，種子活力下降，發(fā)芽率變差，給生產(chǎn)帶來影響［2］，國(guó)家需要耗費(fèi)大量的人力、物力和財(cái)力來提高水稻種子的儲(chǔ)藏條件。因此，篩選鑒定易儲(chǔ)藏且不易爛芽、爛種的水稻是確保我國(guó)糧食生產(chǎn)安全的重要措施。目前，對(duì)水稻種質(zhì)資源的耐儲(chǔ)藏特性進(jìn)行了大量研究，并篩選和選育出了一批耐儲(chǔ)藏種質(zhì)［3-7］。但已發(fā)掘的這些耐儲(chǔ)藏水稻種質(zhì)的耐儲(chǔ)藏特性并不是很好，而且很難在育種上應(yīng)用［8］。原因在于這些耐儲(chǔ)藏水稻種質(zhì)通常是采取自主開發(fā)的植物脂質(zhì)氧化酶同工酶快速檢測(cè)專利技術(shù)［9］、自然和人工老化試驗(yàn)［10-11］、利用雜交、回交、組織培養(yǎng)、離子束誘變［7，12］等技術(shù)鑒定或育成，并沒有模擬水稻儲(chǔ)藏的自然氣候條件，比如低溫、霜凍及雨水等。本研究中，通過將待測(cè)水稻撒播在大田中，讓其在自然條件下過冬，在翌年5月下旬選擇已經(jīng)發(fā)芽長(zhǎng)成為植株的水稻種子作為儲(chǔ)藏便捷且不易爛芽和爛種的水稻種質(zhì)。通過選擇大田越冬后沒有腐爛并且能夠發(fā)芽的水稻種子，可為選育發(fā)芽率高且不易爛芽和爛種的水稻種子提供寶貴的種質(zhì)資源。

1　材料與方法

1.1供試材料

參試水稻種質(zhì)總計(jì)172份，其中秈稻、粳稻及野生稻各92份、78份和2份，自然條件下保存。

1.2大田撒播

在12月上旬，清除大田表面的雜草，翻土、平整并起壟。用白色的面粉將地壟劃分成50 cm×50 cm的地塊。搭建離大田地面約2 m的防鳥網(wǎng)。每份待測(cè)水稻選取當(dāng)年收獲的無霉變及病變種子100粒，均勻撒播在50 cm×50 cm的地塊內(nèi)，后用細(xì)土覆蓋。每份待測(cè)水稻品種3次重復(fù)。播種40 d后，水稻尚未出芽之時(shí)，噴灑除草劑，做好大田防雜草工作。

1.3出苗數(shù)統(tǒng)計(jì)

2014年3月中旬，浙江金華最高氣溫為28℃，少數(shù)水稻種質(zhì)的種子開始發(fā)芽，此時(shí)噴灑出芽后類型的除草劑，盡量不要人工除草，以避免泥土松動(dòng)而影響水稻發(fā)芽和出苗數(shù)統(tǒng)計(jì)。4月上旬，做好防蟲及施肥等田間管理，并開始記錄各地塊內(nèi)的水稻苗數(shù)。5月下旬，等各地塊內(nèi)的水稻苗數(shù)不再發(fā)生變化，此時(shí)再統(tǒng)計(jì)各地塊內(nèi)的水稻苗數(shù)。

1.4低溫儲(chǔ)藏條件下的出苗數(shù)觀察

取能夠越冬的水稻種子及1份不能越冬的水稻種子，用0.75%的HgCl2無菌處理后，播于1/2 MS固體培養(yǎng)基上，置于4℃的恒溫冰箱中，放置一段時(shí)間后，移入28℃、16 h光照/8 h黑暗培養(yǎng)箱。統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)箱中水稻的出苗數(shù)。

圖1　播于1/2 MS培養(yǎng)基中的水稻種子經(jīng)歷低溫后的發(fā)芽實(shí)驗(yàn)

1.5儲(chǔ)藏時(shí)間對(duì)出苗數(shù)的影響

選取不同年份自然條件下儲(chǔ)藏的能夠越冬的水稻種子及1份不能越冬的水稻種子，按照改進(jìn)的紙上發(fā)芽法［13］觀察水稻的出苗數(shù)。在23 cm×31 cm白色面包盒內(nèi)，放置1張比面包盒稍小的海綿，海綿上平鋪韌性較好的吸水紙，用水潤(rùn)濕吸水紙并使海綿邊沿的吸水紙浸沒于面包盒內(nèi)與海綿齊平的水。將不同年份自然條件下儲(chǔ)藏的水稻種子均勻撒播在吸水紙上；面包盒覆蓋保鮮膜。將面包盒置于28℃、16 h光照/8 h黑暗培養(yǎng)箱。一段時(shí)間后，統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)箱中水稻的出苗數(shù)。

1.6低溫與高溫交替條件下出苗數(shù)觀察

連續(xù)15 d，在同一時(shí)間點(diǎn)，選取當(dāng)年收獲的能夠越冬的水稻種子及多份不能越冬的水稻種子，用0.75%的HgCl2無菌處理后，播于1/2 MS固體培養(yǎng)基上，置于28℃、16 h光照/8 h黑暗培養(yǎng)箱。第16天時(shí)，將水稻從28℃的培養(yǎng)箱中移入4℃冰箱中，放置1 d后再置于28℃的培養(yǎng)箱中1 d。在28℃的培養(yǎng)箱中放置1 d后，移入4℃冰箱中。水稻在4℃冰箱和28℃的光照培養(yǎng)箱之間反復(fù)轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移期間觀察水稻的存活情況。

2　結(jié)果與分析

2.1越冬水稻種子鑒定

金華屬亞熱帶濕潤(rùn)季風(fēng)氣候，春早而暖，冬濕而寒。2013年12月10日至2014年3月31日期間，0℃以下低溫主要集中在12月下旬、1月和2月中下旬；降雪止于3月初；3月21日出現(xiàn)3月極低溫3℃。因此，在自然條件下的晚冬早春，水稻大田里僅有離地2 m的防鳥網(wǎng)遮蓋的水稻種子不僅遭受霜凍、低溫及雨雪等不利天氣因素的影響，還會(huì)在3月下旬遭受“倒春寒”的危害，使得部分已經(jīng)發(fā)芽的水稻受到低溫的侵害。2014年5月下旬，172份水稻種質(zhì)中，絕大部分種質(zhì)的種子發(fā)生腐爛，只有少數(shù)水稻種子有1～10棵秧苗出現(xiàn)，粳稻日本晴和秈稻Kasalath的出苗率分別為45.7%和50.3%。2014年4月中旬，金華最高氣溫為30.0℃；2014年4月下旬，金華最高氣溫為31.0℃；2014年5月最高氣溫為34.0℃，平均最高氣溫為27.3℃，最低氣溫為12.0℃，平均最低氣溫為18.9℃，未出現(xiàn)“五月寒”極端氣候；2014年4月上旬至5月下旬，陰晴雨相間，雨水充沛。因此，5月下旬沒有出苗的水稻種子不會(huì)是水稻種子發(fā)芽生長(zhǎng)所需的適宜溫度和濕度未滿足及種子休眠等因素所造成。成活的水稻苗移栽于其他大田中，成熟時(shí)收割、晾曬。2014年冬季，撒播收獲的水稻種子。2015年5月下旬，日本晴和Kasalath的出苗率分別為65.3%和75.7%。

2.2低溫條件下的存活苗數(shù)

在2013年12月10日至2014年3月31日期間以及在2014年12月10日至2015年3月31日期間，金華市10℃以下低溫集中在當(dāng)年12月與翌年2月之間。在2013年12月10日至2014年2月28日期間，最低溫度為-3℃。在2014年12月10日至2015年2月28日期間，最低溫度為-2℃。為了探討日本晴和Kasalath是否具有耐低溫的能力，筆者部分模擬大田中水稻種子處于泥土包圍下會(huì)有一定水分浸潤(rùn)的環(huán)境，將2014年及2015年夏季收獲的9311、日本晴和Kasalath水稻種子分別播于1/2 MS固體培養(yǎng)基上，置于4℃冰箱中放置45 d后移入28℃、16 h光照/8 h黑暗培養(yǎng)箱。結(jié)果表明，2015年夏季收獲的9311、日本晴和Kasalath水稻種子在28℃、16 h光照/8 h黑暗培養(yǎng)箱都能發(fā)芽生長(zhǎng)成植株（圖1 a），這些結(jié)果表明，當(dāng)年收獲的9311、日本晴和Kasalath水稻種子經(jīng)歷低溫后能夠在28℃條件下發(fā)芽生長(zhǎng)。能在大田中越冬的特性與種子是否是當(dāng)年收獲無關(guān)。2014年夏季收獲的9311在28℃、16 h光照/8 h黑暗培養(yǎng)箱中不能發(fā)芽，日本晴僅有幾顆種子露芽但沒能生長(zhǎng)，而Kasalath水稻種子大多數(shù)能夠發(fā)芽生長(zhǎng)成植株，其出苗率為83.3%（圖1 b）。這些結(jié)果表明，儲(chǔ)藏時(shí)間和低溫對(duì)日本晴和9311水稻種子大田越冬有較大的影響，而單一低溫并非是影響水稻種子大田越冬的決定因素。

2.3儲(chǔ)藏時(shí)間對(duì)出苗率的影響

為了探討儲(chǔ)藏時(shí)間對(duì)水稻種子出苗率的影響，筆者收集了自2012年以來在自然條件下保存的9311、日本晴和Kasalath水稻種子并進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)。結(jié)果表明，2012年收獲的9311、日本晴和Kasalath沒有發(fā)芽；2013年收獲的日本晴和Kasalath水稻種子有少部分能夠發(fā)芽生長(zhǎng)，其出苗率分別為18.3%和25.7%，9311的出苗率僅為5.3%；2014年收獲的9311、日本晴和Kasalath水稻種子的出苗率分別為49.7%、85.3%和90.3%；2015年9月收獲的9311、日本晴和Kasalath水稻種子的出苗率分別為94.3%、87.7%和94.3%。日本晴、Kasalath及9311在儲(chǔ)藏2年內(nèi)均能發(fā)芽生長(zhǎng)，但儲(chǔ)藏時(shí)間在3年以上時(shí)其出苗率顯著下降。這些結(jié)果表明，日本晴、Kasalath和9311并不具有耐長(zhǎng)期儲(chǔ)藏的特性，在以前的文獻(xiàn)中也并未有日本晴和Kasalath具有耐長(zhǎng)期儲(chǔ)藏特性的報(bào)道。因此，日本晴和Kasalath具有的大田越冬特性與耐儲(chǔ)藏并不相關(guān)。

圖2　低溫與高溫交替下的存活試驗(yàn)

2.4低溫與高溫交替下的存活結(jié)果

在2013年12月10日至2014年3月31日期間以及在2014年12月10日至2015年3月31日期間，晝夜溫差極大值均為15℃。為了探討晝夜溫度變化是否影響日本晴和Kasalath的大田越冬特性，筆者用低溫與高溫交替模擬晝夜溫度變化。第16天時(shí)，播于1/ 2 MS固體培養(yǎng)基上2 d以內(nèi)的水稻種子在28℃的光照培養(yǎng)箱中還沒有可見的水稻芽，播種超過2 d的水稻種子已經(jīng)出現(xiàn)可見的水稻芽。將在28℃的光照培養(yǎng)箱中發(fā)芽出苗的水稻，移入4℃冰箱中時(shí)，秧苗均會(huì)萎蔫，雖然日本晴和Kasalath比其他水稻苗萎蔫程度小，但最后都會(huì)在低溫與高溫交替下死亡，日本晴和Kasalath只比其他品種稍微延遲幾天死亡（圖2）。將在28℃的光照培養(yǎng)箱中未發(fā)芽出苗的水稻種子，在低溫與高溫交替3次后置于28℃、16 h光照/8 h黑暗培養(yǎng)箱，日本晴和Kasalath均能以70.3%的發(fā)芽率出苗生長(zhǎng)，其他的水稻種子有的全部死亡，有的僅少量成活，這表明水稻種子而不是芽或幼苗是否耐高、低溫是影響水稻種子大田越冬特性的主要因素。

3　討論

自然條件下，在晚冬播于大田的僅有離地2 m的防鳥網(wǎng)遮蓋的水稻種子越冬期間會(huì)遭受霜凍、低溫及雨雪等不利天氣因素危害，172份水稻種質(zhì)的種子在大田越冬后，絕大部分在大田里已經(jīng)腐爛，僅有日本晴和Kasalath種子能夠在大田中越冬。2014年5月份，金華市雨量充沛，最高溫度為34.0℃，平均最高溫度為27.3℃，因此5月下旬還未出苗的水稻種子不是因水稻種子發(fā)芽生長(zhǎng)所需的適宜溫度和濕度未滿足及種子休眠等因素所造成。日本晴和Kasalath種子能夠在大田中越冬的這種特性與耐儲(chǔ)藏特性無關(guān)。在低溫（4℃）條件下，2014年及2015年收獲的日本晴、Kasalath及9311沒有出芽的水稻在4℃及28℃之間交替后，日本晴和Kasalath能夠生長(zhǎng)成水稻植株。這些結(jié)果暗示低溫條件下沒有出芽的水稻種子能夠適應(yīng)自然條件下的晝夜氣溫變化、尤其是3月后“倒春寒”天氣條件下的氣溫變化。在田間，日本晴和Kasalath不是最先觀察到出芽的種質(zhì)，而最先觀察到出芽的水稻種質(zhì)在5月下旬時(shí)基本統(tǒng)計(jì)不到出苗情況。這些結(jié)果表明，在自然條件下，日本晴和Kasalath種子出芽滯后，是種子或水稻芽而不是稻苗具有能夠在大田中越冬的特性，簡(jiǎn)言之，日本晴和Kasalath以種子或休眠芽在自然條件下大田越冬。

目前，對(duì)大田越冬水稻的研究主要集中在越冬再生稻的研究［14］。自1959年嚴(yán)斧［15］發(fā)現(xiàn)水稻露地越冬再生以來，陸續(xù)有關(guān)于晚粳［15］、粳糯［16］、雜交粳稻［17］、秈型雄性不育系［18］、野生稻［19-21］及其與栽培稻雜交后代［22］越冬再生的報(bào)道。研究表明，野生稻及其與栽培稻的雜交后代以地下莖越冬，雜交稻或常規(guī)稻都以休眠芽越冬［14］。然而，目前為止，還沒有關(guān)于水稻種子大田越冬后翌年能夠發(fā)芽生長(zhǎng)的研究報(bào)道。本研究中，日本晴和Kasalath分別為粳稻和秈稻，其種子在霜凍、低溫及雨雪等不利天氣條件下越冬后翌年能夠發(fā)芽生長(zhǎng)。研究結(jié)果表明，日本晴和Kasalath以種子或休眠芽越冬而具有大田越冬的特性，這與再生雜交稻或常規(guī)稻以休眠芽越冬類似［14］。日本晴和Kasalath種子在霜凍、低溫及雨雪等自然條件下越冬后沒有腐爛并且能夠發(fā)芽生長(zhǎng)，將為選育儲(chǔ)藏便捷的水稻品種提供優(yōu)異種質(zhì)資源。

在我國(guó)南方，連續(xù)陰雨與早春低溫等不良?xì)夂蛞蛩匾鸬亩i稻爛芽爛秧，是導(dǎo)致稻谷生產(chǎn)減產(chǎn)的因素之一，每年因低溫?fù)p失的稻谷達(dá)50～100億kg［23］。水稻的耐冷性分為發(fā)芽期耐冷性、芽期耐冷性、幼苗期耐冷性、穗期耐冷性及開花期耐冷性［23］。發(fā)芽期耐冷性又稱為低溫發(fā)芽能力，是直播水稻應(yīng)具備的重要特性［24］。芽期耐冷性是幼芽細(xì)胞維持生活的能力，也就是體現(xiàn)為幼芽誘發(fā)綠苗的能力。芽期耐冷性是雙季稻區(qū)早稻和直播水稻應(yīng)具備的重要特性，若具備良好的芽期耐冷特性，水稻成苗率高，爛種爛芽率低［25］。因此，日本晴和Kasalath水稻具有以種子或休眠芽越冬特性的發(fā)掘，將為培育發(fā)芽率高的優(yōu)良品種提供寶貴種質(zhì)資源，降低因低溫冷害導(dǎo)致的爛芽爛種現(xiàn)象發(fā)生，減少水稻生產(chǎn)損失。

［1］陳大洲，鄧仁根，肖葉青，等.東鄉(xiāng)野生稻苗期耐寒性的遺傳研究［J］.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1997，19（4）：56-59.

［2］吳躍進(jìn)，盧義宣，吳敬德，等.耐儲(chǔ)藏專用型水稻選育及相關(guān)技術(shù)研究［J］.中國(guó)稻米，2004（3）：6-7.

［3］曾大力.水稻耐貯藏種質(zhì)的篩選及遺傳育種研究［D］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2002.

［4］余麗琴，熊玉珍，黎二姝，等.水稻耐貯藏種質(zhì)資源的篩選［J］.江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2008，20（4）：17-19.

［5］吳方喜，朱永生，謝鴻光，等.中國(guó)水稻微核心種質(zhì)的耐儲(chǔ)藏特性初步研究［J］.中國(guó)糧油學(xué)報(bào)，2010（10）：124-128.

［6］江玲，王松鳳，劉喜，等.優(yōu)質(zhì)水稻品種W017的耐貯藏特性［J］.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，30（2）：133-135.

［7］吳躍進(jìn)，吳先山，沈宗海，等.水稻耐儲(chǔ)藏種質(zhì)創(chuàng)新及相關(guān)技術(shù)研究［J］.糧食儲(chǔ)藏，2005，34（1）：17-20.

［8］蔡秋華，吳方喜，朱永生，等.水稻耐儲(chǔ)藏種質(zhì)篩選和遺傳多樣性分析［J］.福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2011，26（4）：562-566.

［9］吳躍進(jìn)，吳敬德，張瑛，等.作物脂肪氧化酶同功酶LOX－1.LOX－2.LOX－3的檢測(cè)方法［P］.中國(guó)，ZL00112539.7

［10］Zhang Y,Yu Z L,Lu Y X,et al.Effect of the absence of lipoxygenase isoenzymes on the storage characteristics［J］.J Stored Products Res, 2007,43（1）：87-91.

［11］張瑛.脂肪酶和脂肪氧化酶影響稻谷儲(chǔ)藏的作用機(jī)制研究［J］.北京：中國(guó)科學(xué)院，2007.

［12］宋美，張瑛，吳敬德，等.水稻脂質(zhì)氧化酶同功酶種質(zhì)儲(chǔ)藏特性的研究［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2005，21（2）：65-68.

［13］張維林.水稻抗褐飛虱基因Bph14的精細(xì)定位及水稻蔗糖饑餓敏感突變體sss1的鑒定與分析［D］.武漢：武漢大學(xué)，2010.

［14］嚴(yán)斧.越冬再生水稻的研究現(xiàn)狀與前景［J］.作物研究，2012，26（1）：79-84.

［15］嚴(yán)斧.水稻的越冬性［J］.生物學(xué)通報(bào)，1959，12：551.

［16］沈康，邱家馴，夏長(zhǎng)沛，等.雜交粳稻無性系生產(chǎn)體系的探討［J］.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1980，1：13-25.

［17］蘇予，芮昌祉，華世興.南農(nóng)粳型無性系水稻栽培技術(shù)［J］.農(nóng)業(yè)科技通訊，1988，5：10.

［18］陳雄輝，萬邦惠，梁克勤.光溫敏核不育水稻越冬繁殖的研究［J］.雜交水稻，1996，2：10-12.

［19］陳成斌，李道遠(yuǎn)，黃勇.普通野生稻資源耐冷性研究［J］.廣西農(nóng)學(xué)報(bào)，1994（4）：1-5.

［20］何光存，舒理慧，周一強(qiáng)，等.東鄉(xiāng)野生稻（Oryza rufipogon）在武漢地區(qū)越冬性能的觀察［J］.武漢大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，1996，42（2）：252-254.

［21］陳大洲，鄧仁根.東鄉(xiāng)野生稻抗寒基因的利用與前景展望［J］.江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，1998，10（1）：65-68.

［22］李勤修，彭敘咸，王玉蘭.野生稻及其雜交后代的宿根越冬［J］.四川農(nóng)業(yè)科技，1978（3）：18-20.

［23］趙正武.水稻越冬耐冷性遺傳變異及QTL定位研究［D］.溫江：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006.

［24］Morishita H.Inheritance of low temperature tolerance at young seedling stage［M］.Japan：National Institute of Genetics,1996：411-413.

［25］喬永利，韓龍植，安永平.水稻芽期耐冷性QTL的分子定位［J］.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，38（2）：217-221.

Screening and Identification of Rice Seeds that Live through Winter in the Field

ZHANG Weilin,WANG Changchun,HU haitao,YANG Ling*
（College of Chemistry and Life Sciences,Zhejiang Normal University,Jinhua,Zhejiang 321004,China；1st author：wlzhangwhu@163.com；*Corresponding authors：yangl@zjnu.cn）

Continuous wet weather and low temperature in early spring are the main adverse climatic factors affecting rice production in south China,which often leads to rotten bud and rotten seed.In this study,identification of rice germplasms with high seedling rate and low rate of rotten bud and rotten seed was performed by screening for the rice seeds，that can live through the winter in the field and will sprout in the following year.172 rice germplasms were used as materials in this study.The results showed that the majority of the 172 rice germplasms seed rotten after winter.The seeds of indica rice cultivar Kasalath and japonica rice cultivar Nipponbare were the only two rice germplasms,which seeds can live through the winter in the field and sprout in the following year.The identification of Kasalath and Nipponbare would provide a valuable rice germplasm for breeding elite cultivars with high seedling rate and low rate of rotten bud and rotten seed.

rice；over wintering；seed；bud；rice germplasm

S511.037

B

1006-8082（2016）05-0031-04

2016－06－22

國(guó)家自然科學(xué)基金（31301289）；浙江省科技廳公益性項(xiàng)目（2014C32015）