王亞南+廖莉婭+鄭曉琴

【摘要】 目的 討論12種腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)（C-12）在腫瘤篩查的應(yīng)用。方法 采用C-12型多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)試劑盒檢測(cè)1950例健康體檢者及336例住院患者血清中12種腫瘤標(biāo)志物的水平， 結(jié)合臨床情況， 分析比較檢出陽(yáng)性率和臨床腫瘤診斷符合率。結(jié)果 健康體檢者C-12檢測(cè)指標(biāo)陽(yáng)性率5.13%低于住院患者26.49%（P<0.05）；陽(yáng)性健康體檢者腫瘤檢出率56.52%與陽(yáng)性住院患者79.78%比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；蛋白芯片檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性者與臨床診斷腫瘤者其符合率達(dá)71.85%。結(jié)論 多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)是腫瘤高危人群篩查的重要手段， 可用于臨床腫瘤的輔助診斷、預(yù)后及療效觀察。

【關(guān)鍵詞】 多腫瘤標(biāo)志物；蛋白芯片；腫瘤；篩查

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.25.001

【Abstract】 Objective To discuss application of multi-tumor marker protein chip detection system （C-12） in tumor screening. Methods C-12 multi-tumor marker protein chip detection kit was applied to detect 12 serum tumor markers levels in 1950 healthy people and 336 hospitalized patients. Analysis was made in accordance with their clinical situation on positive rate and clinical tumor diagnostic accordance rate. Results Healthy people had lower C-12 indexes positive rate as 5.13% than 26.49% in hospitalized patients （P<0.05）. The difference of tumor detection rate between 56.52% in positive healthy people and 79.78% in positive hospitalized patients had statistical significance （P<0.05）. Coincidence rate was 71.85% between positive cases in protein chip detection and cases with tumor by clinical diagnosis. Conclusion As an important screening method for tumor high risk group， multi-tumor marker protein chip detection system can be applied in assistant clinical tumor diagnosis， prognosis and curative effective observation.

【Key words】 Multi-tumor marker； Protein chip； Tumor； Screening

腫瘤的發(fā)病率逐年提高， 且發(fā)病年齡有年輕化趨勢(shì)， 早期診斷相對(duì)困難， 嚴(yán)重危害人類健康， 腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)和診斷至關(guān)重要[1]。由于未能及早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療， 大多數(shù)患者在確診為腫瘤時(shí)， 往往到了中晚期， 此時(shí)不僅病情嚴(yán)重、癥狀復(fù)雜、痛苦較大、體質(zhì)下降、生存質(zhì)量低下， 而且臨床治愈率較低， 因而早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是提高患者生存率的關(guān)鍵[2]。C-12型多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片系統(tǒng)是一種以雙抗體夾心法為基礎(chǔ)的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法， 12種腫瘤標(biāo)志物的抗體被包被在固相基質(zhì)上， 捕捉被檢測(cè)血清樣本中對(duì)應(yīng)的腫瘤標(biāo)志物， 結(jié)合第二抗體， 然后催化化學(xué)反應(yīng)進(jìn)而產(chǎn)生光信號(hào)， 最后用專門的芯片閱讀儀讀取光信號(hào)， 對(duì)腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行定量檢測(cè)。多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)具備高通量、高準(zhǔn)確性、快速且微型化的特點(diǎn)， 目前被廣泛應(yīng)用[3]。本文討論C-12型多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)在腫瘤篩查的應(yīng)用， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 檢測(cè)對(duì)象為中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院2015年1～10月的2286例受試者， 其中健康體檢者1950例， 住院患者336例， 男1209例， 女1077例。

1. 2 儀器與試劑 試劑采用上海銘源數(shù)康生物芯片有限公司生產(chǎn)的C-12型多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片試劑盒， 包括C-12蛋白芯片集成板1塊， 濃縮洗滌液1瓶， 反應(yīng)液1瓶， 標(biāo)準(zhǔn)品系列（標(biāo)準(zhǔn)品0、標(biāo)準(zhǔn)品4各1瓶， 凍干品）， 定量質(zhì)控品1瓶， 復(fù)溶劑1瓶， 檢測(cè)液A和檢測(cè)液B各1瓶。檢測(cè)儀器HD-2001A生物芯片閱讀儀、生物芯片圖像分析系統(tǒng)軟件均由上海銘源數(shù)康生物芯片有限公司提供。

1. 3 檢測(cè)方法

1. 3. 1 標(biāo)本采集 所有受試者均于清晨空腹采集靜脈血2 ml， 不抗凝。離心后取血清保存于4℃冰箱待測(cè)， 7 d內(nèi)完成檢測(cè)， 除外溶血、脂血和黃疸標(biāo)本。

1. 3. 2 實(shí)驗(yàn)步驟 采用C-12蛋白芯片試劑盒， 嚴(yán)格按照操作說(shuō)明書將試劑配套標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品復(fù)溶， 取標(biāo)準(zhǔn)品按比例稀釋并進(jìn)行標(biāo)記。用200 μl的加樣槍依次吸取校準(zhǔn)品0、校準(zhǔn)品1、校準(zhǔn)品2、校準(zhǔn)品3、校準(zhǔn)品4、定量質(zhì)控品、待測(cè)樣品各100 μl加入芯片各反應(yīng)孔內(nèi)， 避免產(chǎn)生氣泡， 每吸取一個(gè)樣本應(yīng)更換一個(gè)槍頭；將已加樣完成的芯片， 平放固定于恒溫?fù)u床內(nèi)， 設(shè)定恒溫?fù)u床運(yùn)行參數(shù)為37℃、25 r/min， 溫育振蕩30 min；棄去芯片反應(yīng)孔內(nèi)的液體， 并用洗滌液沖洗1次， 將芯片放入洗盒中加入洗滌液， 并將洗盒直立固定于恒溫?fù)u床內(nèi)， 設(shè)定恒溫?fù)u床運(yùn)行參數(shù)為37℃、25 r/min， 溫育振蕩8 min， 棄去洗盒內(nèi)洗滌液， 共洗滌4次；在芯片各反應(yīng)孔內(nèi)加入100 μl反應(yīng)液， 避免產(chǎn)生氣泡；第2次溫育與溫育第1次方法相同；棄去芯片反應(yīng)孔內(nèi)液體， 并用洗滌液進(jìn)行沖洗1次， 剝離蛋白芯片集成塊的上部將蛋白芯片集成塊下部放入洗盒中加入洗滌液， 并將洗盒直立固定于恒溫?fù)u床內(nèi)， 設(shè)定恒溫?fù)u床運(yùn)行參數(shù)為37℃、25 r/min， 溫育震蕩8 min， 棄去洗盒內(nèi)洗滌液， 共洗滌4次；將檢測(cè)液A和檢測(cè)液B混合15 min后制成混合液， 將洗滌完成的蛋白芯片集成塊拍干， 并在每個(gè)芯片的膜表面加入20 μl檢測(cè)液A和檢測(cè)液B的混合液靜置1.5 min；將加有檢測(cè)液A和B混合液蛋白芯片集成塊下部放入生物芯片閱讀儀， 軟件將自動(dòng)讀取圖像（時(shí)間60 s）、作標(biāo)準(zhǔn)曲線、分析各被測(cè)樣本的測(cè)試結(jié)果并打印數(shù)據(jù)報(bào)表。全部樣本均應(yīng)用同一方法在同一實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。

1. 4 結(jié)果判斷 凡有1項(xiàng)及1項(xiàng)以上指標(biāo)超出試劑盒提供正常參考范圍即定性為“結(jié)果陽(yáng)性”， 以人次計(jì)算， 同時(shí)記錄其檢測(cè)數(shù)值。

1. 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 1950例健康體檢者中， 不同程度超出參考值范圍的有100例， 各腫瘤標(biāo)志物的陽(yáng)性率以糖類抗原（CA）199、甲胎蛋白（AFP）、CA125、CA724較高， 神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）、癌胚抗原（CEA）、CA242、鐵蛋白（Ferritin）、人絨毛膜促性腺激素（β-HCG）、游離型前列腺特異性抗原（Free-PSA）、前列腺特異性抗原（PSA）、CA153陽(yáng)性檢出率都較低。見(jiàn)表1。

2. 2 1950例健康體檢者中100例檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性， 336例住院患者中89例檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性， 住院患者檢測(cè)陽(yáng)性率顯著高于健康體檢者（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2. 3 100例陽(yáng)性健康體檢者后期隨訪調(diào)查難度較大， 不能完全統(tǒng)計(jì)， 故需要排除部分不在本院進(jìn)行后續(xù)檢查治療以及可能去其他醫(yī)院求醫(yī)的例數(shù)， 來(lái)本院進(jìn)行后續(xù)檢查治療的共有46例， 46例陽(yáng)性體檢者中經(jīng)病理學(xué)、影像學(xué)等被確診為腫瘤的為26例， 89例陽(yáng)性住院患者經(jīng)病理學(xué)、影像學(xué)等被確診為腫瘤的為71例， 住院患者陽(yáng)性與健康體檢者腫瘤檢出率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。蛋白芯片檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性者與臨床診斷腫瘤者其符合率達(dá)71.85%（97/135）。

2. 4 住院患者和健康體檢者被確診為惡性腫瘤的多以2項(xiàng)指標(biāo)及2項(xiàng)指標(biāo)以上同時(shí)升高為主， 未確診為腫瘤的例數(shù)多以單項(xiàng)指標(biāo)升高為主， 住院患者和健康體檢者C-12檢測(cè)指標(biāo)陽(yáng)性情況分析見(jiàn)表4。

3 討論

惡性腫瘤是危害人類健康的重大原因之一， 但腫瘤中、早期無(wú)特異性癥狀， 故常常漏診， 大多數(shù)患者在確診為腫瘤時(shí)， 往往處于腫瘤晚期， 已喪失手術(shù)治療的最佳機(jī)會(huì)， 同時(shí)缺乏有效的治療手段[4]。因此， 腫瘤的早發(fā)現(xiàn)對(duì)腫瘤的預(yù)防和治療至為關(guān)鍵。理想中的腫瘤標(biāo)志物應(yīng)具有以下特點(diǎn)：①較高敏感性， 可以在早期就發(fā)現(xiàn)腫瘤微小病變；②高特異性， 可根據(jù)腫瘤標(biāo)志物的類型不同進(jìn)行腫瘤定位和鑒別診斷；③濃度與腫瘤大小相關(guān)， 與病情程度相關(guān)性高；④濃度變化可直觀反映腫瘤的治療效果， 預(yù)后判斷；⑤易于檢測(cè)。然而， 目前尚未有任何一種腫瘤標(biāo)志物可以完全滿足以上的條件， 且單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)特異性低， 靈敏度低， 因此在臨床實(shí)踐中， 常將多項(xiàng)相關(guān)的標(biāo)志物組成聯(lián)合標(biāo)志物， 來(lái)進(jìn)一步提高輔助診斷臨床腫瘤的準(zhǔn)確率[5]。

本材料采用的C-12蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)通過(guò)同時(shí)定量檢測(cè)被檢者血清中的12種腫瘤標(biāo)志物的含量， 聯(lián)合受試者的臨床狀況， 分析對(duì)比檢出陽(yáng)性率和臨床腫瘤診斷符合率， 結(jié)果表明12種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)有助于早期腫瘤篩查。C-12具有高信息量、高通量、低成本等特點(diǎn)， 且檢測(cè)方法簡(jiǎn)便快速， 創(chuàng)傷性小， 成本較化學(xué)發(fā)光低得多， 體現(xiàn)了明顯的優(yōu)越性， 可廣泛應(yīng)用于健康體檢人群和腫瘤高危人群的早期篩查[6]。需注意的是腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果增高并不等于肯定得了癌癥， 而結(jié)果正常也不能完全排除癌癥， 必要時(shí)需要定期復(fù)查和隨訪。一旦出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果， 應(yīng)及時(shí)進(jìn)行影像學(xué)等相關(guān)輔助診斷檢測(cè)， 必要時(shí)進(jìn)行病理學(xué)活檢來(lái)確診， 并定期復(fù)查和隨訪， 以達(dá)到早發(fā)現(xiàn)， 早診斷， 早治療， 提高腫瘤生存率的目的[7]。

因?yàn)镃-12蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)同時(shí)檢測(cè)12項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物的含量， 會(huì)受到實(shí)驗(yàn)室條件、個(gè)人體質(zhì)和疾病狀態(tài)等多方面因素的影響， 而要獲得對(duì)腫瘤診斷可信度高的檢測(cè)結(jié)果， 就需要盡量去除自身疾病狀態(tài)以外的影響因素。隨年齡的增長(zhǎng)， 部分腫瘤標(biāo)志物也會(huì)相應(yīng)發(fā)生改變， 主要是CA242、CEA、PSA、Free-PSA；飲酒則會(huì)對(duì)AFP結(jié)果有影響；吸煙與CA199指標(biāo)升高有關(guān)， 是其獨(dú)立危險(xiǎn)因素。另外， 類風(fēng)濕因子、異噬性抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠IgG的抗體、標(biāo)本溶血等因素也會(huì)影響腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)結(jié)果。

腫瘤標(biāo)志物是反映腫瘤存在的化學(xué)類物質(zhì)。許多腫瘤標(biāo)志物并非腫瘤組織特異表達(dá)， 正常組織及良性疾病中亦有表達(dá)；此外一種腫瘤可分泌多種腫瘤標(biāo)志物， 而不同的腫瘤或同種腫瘤的不同組織類型也可分泌相同的腫瘤標(biāo)志物， 且在不同的腫瘤患者體內(nèi)， 腫瘤標(biāo)志物的質(zhì)和量變化也較大， 所以目前為止腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)尚不能替代組織病理學(xué)和影像學(xué)等臨床檢查作為腫瘤疾病判斷的金指標(biāo)[8]。對(duì)于陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果， 應(yīng)定期復(fù)查， 動(dòng)態(tài)觀察， 特別是檢測(cè)值略高于參考值者， 不要做出過(guò)度反應(yīng)， 以免造成不必要的經(jīng)濟(jì)和思想負(fù)擔(dān)[9]。對(duì)于腫瘤標(biāo)志物陰性者， 也不完全代表不會(huì)發(fā)生腫瘤， 出現(xiàn)臨床癥狀后， 應(yīng)及時(shí)通過(guò)其他醫(yī)學(xué)手段進(jìn)行檢查[10]。12種腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性者與臨床腫瘤診斷符合率較高， 該方法可用于臨床腫瘤的早期篩查與復(fù)發(fā)檢查， 尤其是腫瘤高危人群的防癌普查具有重要意義。

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[收稿日期：2016-06-21]