董 懿，董紅梅

（1.濟(jì)南市機(jī)關(guān)醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東濟(jì)南250001；2.濟(jì)南市第五人民醫(yī)院，山東濟(jì)南250022）

甲狀腺機(jī)能減退和亞臨床甲狀腺機(jī)能減退時(shí)缺血修飾蛋白的變化

董 懿1，董紅梅2

（1.濟(jì)南市機(jī)關(guān)醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東濟(jì)南250001；2.濟(jì)南市第五人民醫(yī)院，山東濟(jì)南250022）

目的 探討甲狀腺功能減退和亞臨床甲狀腺功能減退時(shí)缺血修飾白蛋白（IMA）以及丙二醛（MDA）水平的變化，同時(shí)觀察甲狀腺激素與氧化應(yīng)激之間的關(guān)系。方法 選取35例甲狀腺功能減退和35例亞臨床甲狀腺功能減退患者作為病例組，35例健康人作為正常對(duì)照組，分別檢測(cè)病例組和對(duì)照組的促甲狀腺激素（TSH）、游離三碘甲狀原氨酸（FT3）、游離甲狀腺素（FT4）、IMA、白蛋白（ALB）、IMA/ALB、MDA、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）水平。結(jié)果 與對(duì)照組相比，甲減組和亞臨床甲減組MDA和IMA水平顯著升高（P＜0.05），IMA/ALB也顯著升高（P＜0.05）。甲減組，TSH水平與 MDA（r=0.372，P=0.043），IMA（r=0.409，P=0.025）和 IMA/ALB比值（r= 0.445，P=0.014）呈顯著正相關(guān)；亞臨床甲減組各變量之間沒有顯著相關(guān)性。結(jié)論 由于氧化應(yīng)激的存在，甲減患者抗氧化狀態(tài)降低導(dǎo)致IMA和MDA水平增加。

缺血修飾蛋白； 甲狀腺功能減退； 亞臨床甲狀腺功能減退

氧化應(yīng)激（OS）是由于細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)受損和/或氧自由基生成過多，導(dǎo)致機(jī)體自由基的清除和生成平衡被打亂，最終引起機(jī)體損傷［1］。人血清白蛋白（HSA）的N-末端為天冬氨酸-丙氨酸-組氨酸-賴氨酸，它是過渡金屬（鈷，銅和鎳）主要的結(jié)合位點(diǎn)［2］。當(dāng)各種原因引起缺血時(shí)，局部血液灌注和供氧減少，組織細(xì)胞進(jìn)行無氧代謝，乳酸堆積，使局部微環(huán)境pH值下降，導(dǎo)致Cu2+從循環(huán)蛋白的金屬結(jié)合位點(diǎn)釋放。在還原劑（如維生素C）作用下，Cu2+被轉(zhuǎn)化為Cu+，最終形成具有高度活性的羥自由基（·OH），致使蛋白質(zhì)、核酸損傷和脂質(zhì)過氧化。HSA易受羥自由基損害，使N-末端序列的2～3個(gè)氨基酸發(fā)生改變，從而形成IMA。Torun等［3］研究顯示，IMA水平的升高與體內(nèi)抗氧化水平降低和氧化水平升高有關(guān)。

甲狀腺激素在機(jī)體內(nèi)的氧化應(yīng)激和抗氧化系統(tǒng)起著重要作用，甲狀腺機(jī)能減退（簡(jiǎn)稱甲減）時(shí)，TSH水平升高導(dǎo)致體內(nèi)產(chǎn)生大量的自由基和過氧化物。盡管IMA是心肌缺血［4-5］的敏感指標(biāo)，但幾項(xiàng)研究已證明［6-9］，IMA水平在腎臟，肝臟，外周動(dòng)脈疾病和肺栓塞時(shí)也有不同程度升高。目前，有研究表明［1，10］，甲減時(shí)氧化損傷導(dǎo)致脂質(zhì)和蛋白增加。有關(guān)甲減和亞臨床甲減OS的研究尚存在爭(zhēng)議［11］。本研究討論甲減和亞臨床甲減時(shí)IMA水平的變化。

材料和方法

1 一般材料

選取濟(jì)南市機(jī)關(guān)醫(yī)院內(nèi)分泌科診治的35例（男性10例，女性25例）甲減患者和35例（男性2例，女性33例）亞臨床甲減組患者作為病例組，35例（男性10例和女性25例）健康人作為正常對(duì)照組。甲減診斷標(biāo)準(zhǔn)為TSH升高，F(xiàn)T3、FT4低于正常參考范圍下限；亞臨床甲減診斷標(biāo)準(zhǔn)為TSH升高，F(xiàn)T3、FT4在正常參考范圍內(nèi)。濟(jì)南市機(jī)關(guān)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室確定甲功參考值范圍為：TSH 0.37～4.94m IU/L；FT33.10～6.80pmol/L；FT412～22pmol/L。入組患者均是首次診斷為甲減和亞臨床甲減；吸煙，酗酒，懷孕，絕經(jīng)后婦女，應(yīng)用維生素或降脂藥，糖尿病，高血壓，肝、腎疾病，炎性疾病，急性和慢性疾病以及其他內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病均被排除。本研究經(jīng)過倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

2 方法

所有患者禁食8～10小時(shí)，清晨靜脈采血，采用電化學(xué)發(fā)光法（羅氏）檢測(cè)甲狀腺功能，包括TSH、FT3、FT4。血清 TG、TC、HDL、LDL水平的測(cè)定采用日本Olympus全自動(dòng)生化分析儀以及北京百奧泰康生物技術(shù)有限公司提供的檢測(cè)試劑。血清MDA測(cè)量采用硫代巴比妥酸法，操作過程按說明書進(jìn)行，單位用μmol/L表示。IMA采用白蛋白-鈷離子結(jié)合試驗(yàn)測(cè)定，試劑盒由北京百奧康生物科技有限公司提供，操作過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，配套Olympus全自動(dòng)生化分析儀，參照文獻(xiàn)報(bào)道［12］的參考值范圍，單位用吸光度（ABSU）表示。由于白蛋白對(duì)IMA的影響［13］，IMA水平以IMA/白蛋白（［ABSU /白蛋白（g/L）］×1000）進(jìn)行校正［14］。白蛋白的檢測(cè)采用溴甲酚綠法，操作過程按說明書進(jìn)行。IMA批內(nèi)變異系數(shù)（CV）和批間CV分別為1.8%和1.5%；MDA批內(nèi)CV和批間CV分別為3.7%和5.6%。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

全部數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（SD）表示。三組間統(tǒng)計(jì)學(xué)差異采用單因素方差（ANOVA）分析。甲減和亞臨床甲減兩組間IMA與各個(gè)參數(shù)的相關(guān)性采用Spearman's相關(guān)分析。全部數(shù)據(jù)以P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。采用SPSS 10.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

結(jié) 果

1 甲減組、亞臨床甲減組和對(duì)照組一般生化特征

甲減組、亞臨床甲減組和對(duì)照組一般生化特征詳見表1。

表1 甲減組、亞臨床甲減組和對(duì)照組一般生化特征

與亞臨床甲減組和對(duì)照組相比，甲減組FT3和FT4水平顯著降低，TSH顯著升高。與對(duì)照組相比，亞臨床甲減組TSH升高，F(xiàn)T3和FT4水平?jīng)]有顯著差異。與對(duì)照組相比，甲減組血脂中TC，TG和LDL升高，HDL水平顯著降低；亞臨床甲減組中僅LDL升高，而HDL降低。這些研究結(jié)果顯示，甲減組比亞臨床甲減組變化更加顯著。與對(duì)照組相比，甲減組和亞臨床甲減組患者IMA/ALB比例、血清MDA和IMA水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；甲減組各指標(biāo)的變化顯著高于亞臨床甲減組。

2 甲狀腺激素和氧化應(yīng)激的關(guān)系

甲減組，TSH與MDA，IMA和IMA/ALB呈正相關(guān)。IMA與 FT4呈負(fù)相關(guān)。然而，亞臨床甲減組各變量之間沒有顯著相關(guān)性，詳見表2。

表2 甲減組和亞臨床甲減組IMA與各參數(shù)之間的關(guān)系

討 論

甲狀腺激素調(diào)節(jié)生物體的氧化代謝，對(duì)自由基的產(chǎn)生具有重要的作用［15］。OS的機(jī)制是多方面的，甲減時(shí)氧化和抗氧化之間的平衡被打亂，TSH水平短期內(nèi)急劇升高能夠促進(jìn)炎癥和OS的發(fā)生，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)TSH能夠誘導(dǎo)炎性細(xì)胞因子如白介素-6（IL-6）和腫瘤壞死因子α（TNF-α）分泌到體外［16］，而TSH在體內(nèi)誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)尚不明確。有研究表明［17-18］，OS的增加主要由于線粒體氧利用率和甲狀腺激素抗氧化的改變，氧化清除率降低，導(dǎo)致血脂異常和TSH水平升高［1］。

本研究中，與正常對(duì)照組相比，甲減組和亞臨床甲減組血清 MDA和IMA水平升高；甲減組 TSH水平與MDA和IMA濃度呈正相關(guān)，而亞臨床甲減組TSH與MDA和IMA無顯著相關(guān)性，這可能是由于氧化損傷導(dǎo)致自由基產(chǎn)生增加，白蛋白的N-末端區(qū)域經(jīng)歷構(gòu)象變化與鈷結(jié)合能力降低，導(dǎo)致IMA水平增加［19］。另一方面可能為TSH使游離脂肪酸從脂肪組織中釋放，引起循環(huán)中游離脂肪酸（FFA）水平增加［20］。FFA主要結(jié)合白蛋白，最近有研究發(fā)現(xiàn)FFA可能導(dǎo)致HSA的構(gòu)象變化，這可能會(huì)降低鈷-白蛋白的結(jié)合［21］，而亞臨床甲減組中甲狀腺激素水平變化較小，與甲減組相比差異較小。因此，甲減的程度直接影響OS而導(dǎo)致IMA水平的變化。

MDA是自由基的作用下脂質(zhì)過氧反應(yīng)的產(chǎn)物，能夠反映體內(nèi)脂質(zhì)過氧化程度，從而間接反映體內(nèi)自由基的水平。最近有研究表明［1，22-24］，甲減時(shí)TSH的升高與脂質(zhì)過氧化反應(yīng)直接相關(guān)，脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增加使自由基的產(chǎn)生增多，因此，血脂異常和肥胖時(shí) IMA水平增加。本研究中，甲減組和亞臨床甲減組患者的血脂水平均升高，但血脂水平或BMI與IMA沒有相關(guān)性，IMA和MDA之間也沒有任何相關(guān)性?？紤]為IMA水平的變化與脂質(zhì)過氧化反應(yīng)不相關(guān)，因此，IMA可以被認(rèn)為是一種獨(dú)立的風(fēng)險(xiǎn)因子。

眾所周知，ALB對(duì)IMA水平可能產(chǎn)生影響。當(dāng)ALB水平降低時(shí)，鈷與蛋白質(zhì)的結(jié)合也減少，反之亦然［13］。有研究表明［25］，IMA與ALB呈負(fù)相關(guān)。本研究中，我們沒有觀察到ALB與IMA呈負(fù)相關(guān)，但兩組患者ALB水平均顯著減少，IMA/ALB均顯著升高。因此，IMA水平的增加是由于OS的存在，并不是由于血清白蛋白濃度變化所致，因?yàn)镮MA和IMA/ ALB變化趨勢(shì)相同。

綜上所述，甲減和亞臨床甲減時(shí)OS導(dǎo)致IMA水平增加，因此，IMA可作為甲減和亞臨床甲減OS的標(biāo)志物。此外，OS也具有增加心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)，因此，甲減時(shí)還應(yīng)注重心血管系統(tǒng)的變化。通過檢測(cè)氧化應(yīng)激指標(biāo)的變化可以了解甲減和亞臨床甲減患者體內(nèi)的氧化狀態(tài)，有望為早期抗氧化治療提供依據(jù)。

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（李 凌編輯）

Ischem ia-modified Album in Levels in Hypothyroidism and Subclinical Hypothyroidism

DONG Yi，DONG Hong-mei
（Clinical Laboratory of Ji'nan Municipal Organs Hospital，Ji'nan 250001，China）

Objective To study the serum levels of ischemia modified albumin（IMA）and malondialdehyde（MDA）in hypothyroidism and subclinical hypothyroidism.The relationship between thyroid hormone and oxidative stresswas further explored.M ethods Atotal of 35 patientsw ith hypothyroidism and 35 patientsw ith subclinical hypothyroidism were collected in the study；thirty five healthy volunteerswere included as control group.Thyroid stimulating hormone（TSH），free triiodothyronine（FT3），free thyroxine（FT4），IMA，albumin（ALB），IMA/albumin，MDA，triglyceride（TG），total cholesterol（TC），high density lipoprotein（HDL），low density lipoprotein（LDL）were tested in all subjects.Results The serum levels of IMA and MDA between hypothyroidism group and subclinical hypothyroidism group were higher than that of control group（P＜0.05）；IMA/albumin was also significantly increased（P＜0.05）.In the hypothyroidism，The relationship of TSH/MDA，TSH/IMA and IMA/albumin showed significant positive correlations（r= 0.372，P=0.043；r=0.409，P=0.025；and r=0.445，P=0.014 respectively）.However，there were no significant correlation between variables in subclinical hypothyroidism group.Conclusion Serum levels of IMA and MDA were increased in patientsw ith hypothyroidism，whichmight be related to increased oxidative stress.

Ischemia-modified albumin； Hypothyroidism； Subclinical hypothyroidism

10.11748/bjm y.issn.1006-1703.2016.05.019

2016-04-07；

2016-04-20