王斌

（西北農(nóng)林科技大學(xué)，陜西楊凌712100）

葡萄原花青素運動補劑對運動員免疫力的調(diào)節(jié)研究

王斌

（西北農(nóng)林科技大學(xué)，陜西楊凌712100）

制備含原花青素的運動補劑，并選擇20名男女各半的速滑運動員進行功能性分析。所有的運動員均服用原花青素運動補劑，并通過為期10周共5個階段的訓(xùn)練，我們分析各個階段運動員血液中免疫相關(guān)指標(biāo)均出現(xiàn)變化，實驗結(jié)果證明所有男、女運動員的體液免疫和細(xì)胞免疫水平均較訓(xùn)練開始前明顯增強（P＜0.05），并未出現(xiàn)由于大強度訓(xùn)練而導(dǎo)致的免疫水平下降問題。通過安全性分析，證明含原花青素的運動補劑具有調(diào)節(jié)免疫水平的功效，并具有一定的安全性。

原花青素；葡萄；體液免疫；細(xì)胞免疫

原花青素（Procyanidins，簡稱PC）是一大類自然界中代表性的植物聚多酚類混合物，從葡萄、番荔枝、銀杏、松樹皮、山楂等植物中均可以提?。?］。人類最早從葡萄中提取到較高純度原花青素，對其成分進行研究，表明原花青素主要由兒茶素沒食子酸、表兒茶素和兒茶素單體組成［2］，同時近年來的研究發(fā)現(xiàn)，以咖啡酸為主的有機酸也是原花青素的主要成分，它們通過協(xié)同聚合的方法有機的聚合在一起，共同發(fā)揮多種生物活性功能［3］。大量研究發(fā)現(xiàn)葡萄原花青素在調(diào)節(jié)免疫力、抗心血管疾病、清除自由基、抗氧化活性、保護神經(jīng)（元）、抗腫瘤、抗疲勞、抗衰老等方面表現(xiàn)出極佳功效［4］。多年的運動訓(xùn)練經(jīng)驗表明，只有通過大強度的訓(xùn)練才能對運動員機體產(chǎn)生足夠的刺激，達到提高運動比賽成績的目的［5］。然而，常年累月的進行大強度訓(xùn)練，必然對運動員的身體產(chǎn)生一定影響，將會導(dǎo)致運動員發(fā)生免疫力水平下降［6］。那么要保持運動員競技能力持續(xù)提高，使運動員身體狀態(tài)與運動訓(xùn)練強度保持一致。因此，除通過平衡膳食維持營養(yǎng)和能量的攝入外，運動員還需要使用運動補劑對機體進行調(diào)節(jié)［7］。在本研究中，我們通過對運動員使用含原花青素運動補劑，并采用科學(xué)的方式指導(dǎo)運動員進行大強度訓(xùn)練，探討含原花青素運動補劑對男女運動員訓(xùn)練后體液免疫和細(xì)胞免疫水平的影響。

1　材料與方法

1.1材料

取新鮮葡萄進行整粒脫水干燥，再進脫脂處理。

1.2主要試劑及儀器

離心機（Allegra X-15R）：美國貝克曼；旋轉(zhuǎn)干燥儀（K221A）：上海索譜儀器；高效液相色譜（1200）：安捷倫；流式細(xì)胞儀（CantoⅡ）：美國BD；酶標(biāo)儀（Elx800）：美國寶特。

流式細(xì)胞儀分析所用試劑：購買自美國BD公司；人類血清IgA、IgG、IgM間接ELISA檢測設(shè)計和乙醇等試劑：均為分析純。

1.3葡萄原花青素的提取與純化

首先將葡萄籽進行脫脂處理，按照料液比1∶10（g/mL）加入70%乙醇混合后進行提取。具體的提取步驟如下：1）室溫提取過程，每次作用45 min，之后進行離心（5 000 r/min）30 min，收集上清液，此步驟重復(fù)3次，將提取液混合后進行下一步實驗；2）提取液進行初步濃縮，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的方式濃縮總體積至100 mL；3）提取液初步純化，采用大孔樹脂進行純化，之后采用50%濃度乙醇洗脫處理；4）純化結(jié)束后進行兩步法濃縮，首先使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的方式進行將提取液體積控制在50 mL左右，再采用冷凍干燥的方法得到葡萄原花青素干粉；5）采用高效液相色譜對所得產(chǎn)物進行分析，結(jié)果表明純化產(chǎn)物中葡萄原花青素的含量達到99.5%以上。

1.4含原花青素運動補劑的制備方法

取原花青素10 mg、淀粉25 mg、磷酸鉀2.1 mg、磷酸二鈉鹽2.2 mg，過篩去除雜質(zhì)后采用粉碎機再次粉碎，取粉末充分?jǐn)嚢杌靹?，倒入壓片模型中進行壓片處理，使用具有標(biāo)識的藥瓶進行分裝密封，瓶內(nèi)需裝有干燥劑。

1.5研究對象與運動補劑補充方案

選擇吉林省男女速滑運動員20人，入選運動員的基本情況見表1。

表1　運動員基本資料Table 1The basic conditions of athletes

所有參與實驗的運動員開始訓(xùn)練后，每日服用含有花青素的運動補劑3次，早中晚各一次，服用至實驗結(jié)束。

1.6訓(xùn)練方案

運動訓(xùn)練方法的設(shè)計參考文獻［8］，并根據(jù)實驗?zāi)康倪M行修改，見表2。

表2　運動訓(xùn)練方案Table 2Exercise training project based on research

1.7測試指標(biāo)

在訓(xùn)練開始后的各個階段第一天對所有運動員進行空腹采血，采用流式細(xì)胞儀分析免疫細(xì)胞水平，同時采用間接ELISA法檢測血清中免疫相關(guān)因子的表達水平。

1.8安全性分析

在實驗進行過程中，進行嚴(yán)密監(jiān)控和記錄，避免任何不良反應(yīng)事件發(fā)生，并準(zhǔn)備緊急手段隨時進行救助。

1.9數(shù)據(jù)統(tǒng)計

實驗數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計軟件處理，計量資料進行采用t檢驗，計數(shù)資料采用x2檢驗，P＜0.05為差異顯著，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1體液免疫水平檢測

服用含花青素運動補劑后，參與實驗的男女運動員血清中體液免疫水平變化如表3、表4所示。

表3　男運動員體液免疫水平變化Table 3Changes of indicators of humoral immunity in male athletes atvarious training phrases g/L

表4　女運動員體液免疫水平變化Table 4Changes of indicators of humoral immunity in female athletes at various training phrases g/L

從結(jié)果可知，參與實驗的男、女運動員在訓(xùn)練過程中服用含有原花青素的運動補劑對體液免疫的3個主要指標(biāo)IgM，IgA，IgG表現(xiàn)逐步增強的趨勢。在準(zhǔn)備階段和第一訓(xùn)練階段體液免疫水平未發(fā)生明顯增強（P＞0.05），隨著訓(xùn)練強度的加大，在訓(xùn)練的第二、第三和訓(xùn)練后休息階段，男、女運動員的體液免疫水平未發(fā)生下降，較準(zhǔn)備階段出現(xiàn)明顯增強（P＜0.05），差異顯著。

2.2細(xì)胞免疫水平檢測

服用含花青素運動補劑后，參與實驗的男女運動員血清中細(xì)胞免疫水平變化如表5、表6所示。

表5　男運動員細(xì)胞免疫水平變化Table 5Changes of indicators of cell-mediated immunity in male athletes at various training phrases109/L

表6　女運動員細(xì)胞免疫水平變化Table 6Changes of indicators of cell-mediated immunity in female athletes at various training phrases109/L

從結(jié)果分析，男、女運動員的白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的變化趨勢類似于體液免疫水平，但存在一些區(qū)別。在準(zhǔn)備階段和第一訓(xùn)練階段男女運動員的細(xì)胞免疫水平未發(fā)生明顯變化，P＞0.05，差異不顯著，而訓(xùn)練的第二階段，訓(xùn)練強度增強后，男女運動員的細(xì)胞免疫水平出現(xiàn)下降，下降趨勢顯著，P＜0.05，差異顯著。當(dāng)進入訓(xùn)練的第三階段后，運動員組別實驗訓(xùn)練強度，細(xì)胞免疫水平也得到明顯提高，當(dāng)進入休息階段后，男，女運動員的細(xì)胞免疫水平較訓(xùn)練準(zhǔn)備階段顯著提高，P＜0.05。

2.3安全性分析

在實驗進行的過程中，所有參與實驗的運動員均未發(fā)生任何不良反應(yīng)。

3　結(jié)論與討論

大量的藥理、毒理、臨床以及藥物動力學(xué)研究表明，葡萄原花青素具有優(yōu)秀的生物活性和無副作用的特點，已經(jīng)成為風(fēng)靡世界的保健佳品［9］。目前，我國已經(jīng)開始大力發(fā)展葡萄原花青素的應(yīng)用研究，將我國傳統(tǒng)中醫(yī)理論與科學(xué)的保健理論相結(jié)合，多種以葡萄原花青素為主的保健制品已經(jīng)上市［10］。然而，葡萄原花青素在運動補劑領(lǐng)域的研究進展緩慢，由于葡萄原花青素的提取、制備工藝已經(jīng)成熟，為開展葡萄原花青素的運動補劑開發(fā)奠定基礎(chǔ)。本研究通過大孔樹脂純化葡萄原花青素提取液，達到純度超過99.5%的原花青素提取物，以此為基礎(chǔ)制備含有原花青素的運動補劑。在科學(xué)合理的訓(xùn)練計劃中，選取20名男女速滑運動員進行實驗。通過分析實驗結(jié)果，我們證明服用含有原花青素的運動補劑后，所有參與實驗的男女運動員均出現(xiàn)體液免疫和細(xì)胞免疫水平增高的趨勢，同時在實驗的過程中，未發(fā)生任何的不良反應(yīng)事件。因此，我們認(rèn)為含原花青素的運動補劑對調(diào)節(jié)大強度訓(xùn)練中運動員的免疫水平具有一定作用，并具有安全性高的特點。

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［3］張曉暉，曾繁典，孫智達，等.原花青素B2對LPS誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的保護作用［J］.中國藥理學(xué)通報，2015（11）：1510-1515

［4］官清，張珩，石曉琳，等.原花青素藥用研究進展［J］.臨床合理用藥雜志，2012，5（4）：174-175

［5］王棣，劉澤光，王俊瓔，等.競走運動員服用運動補劑對免疫水平的影響［J］.陜西師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2011，39（2）：99-103

［6］林文弢，鄭體斌.中藥補劑與運動能力［J］.廣州體育學(xué)院學(xué)報，2001，21（4）：35-37

［7］頓耀山，石月，彭曉廬，等.中藥運動營養(yǎng)補劑作用機制的研究進展［J］.食品科學(xué)，2013，34（15）：415-423

［8］梁林花，王麗娜，范秀彬，等.王霏全運周期訓(xùn)練計劃解讀［J］.冰雪運動，2009，31（3）：8-12

［9］楊玉紅，張慧霞.葡萄原花青素的生物學(xué)活性的簡介［J］.生物學(xué)通報，2008，43（9）：16-18

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Research on the Regulating of Grape Procyanidine Sports Supplement on Athlete Immunity

WANG Bin
（Northwest A&F University，Yangling 712100，Shaanxi，China）

Procyanidine was preparation into sprots supplements，and 20 speed skater（half male and half female）were taked function analysis in this research.All athletes were take procyanidine sports supplement，and by five stages training of 10 weeks，the blood immune parameter of each athletes were analyzed in each stage. The experimental results proved that the levels of humoral immunity and cell immunity of all the male and female athletes in training end were enhanced obviously than training start（P＜0.05），the immune level of all athlete were not decline due to intensive training.By security analysis，the procyanidine sports supplements had the effect of regulating immunity levels，and have certain security.

procyanidine；grape；humoralimmunity；cellularimmunity

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.20.043

王斌（1976—），男（漢），講師，碩士，研究方向：體育教學(xué)與管理。

2016-06-22