焦　艷　謝世靜　吳　爽　于　娜

(滄州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，滄州，061001)

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酒制川麥冬的特征成分變化及含量測定

焦艷謝世靜吳爽于娜

(滄州醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，滄州，061001)

目的：研究川麥冬酒制前后化學(xué)成分的變化，建立酒制川麥冬中甲基麥冬黃烷酮A的含量測定方法。方法：取川麥冬生品和酒制品，用水提取，將提取液進(jìn)行高效液相色譜分析，Waters Symmetry C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱；流動(dòng)相：乙腈-0.2%磷酸水梯度洗脫；檢測波長：296 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL。比較川麥冬生品和酒制品的色譜圖。結(jié)果：以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積的積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得甲基麥冬黃烷酮A的回歸方程為Y=15828ρ+42675，r=0.9998，線性范圍為4.25～42.5 μg/mL。甲基麥冬黃烷酮A峰面積的RSD值為0.85%。表明該測定方法精密度良好。測得甲基麥冬黃烷酮A含量的RSD值為0.67%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。甲基麥冬黃烷酮A的平均回收率為97.31%(RSD1.54%)。加樣回收率在95%～105%范圍內(nèi)，符合要求。川麥冬經(jīng)酒制后甲基麥冬黃烷酮A、甲基麥冬黃烷酮B的含量明顯提高。酒制品川麥冬化學(xué)成分發(fā)生了明顯的量和質(zhì)的變化。結(jié)論：川麥冬酒制品藥性的顯著變化正是其化學(xué)成分整體變化所導(dǎo)致的，有效成分整體增加，為麥冬的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供理論依據(jù)。

川麥冬；HPLC；化學(xué)成分；甲基麥冬黃烷酮A

麥冬為百合科植物麥冬(Ophiopogonjaponicus(Thunb.)Ker-Gawl.)的干燥塊根[1]。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，歷代本草都有記載，亦是歷版《中國藥典》收載的品種。根據(jù)產(chǎn)地命名，產(chǎn)于浙江的麥冬為杭麥冬(浙麥冬)，產(chǎn)于四川的麥冬為川麥冬。傳統(tǒng)炮制方法中包括炒制、朱砂拌、酒制等，其中酒制可以降低藥物寒性，提高滋補(bǔ)效果[2-3]?！侗静輳男隆分杏涊d：“入滋補(bǔ)藥，酒潤制其寒”，民間多制麥冬酒作保健之用，臨床上也有相關(guān)使用。具有養(yǎng)陰生津，潤肺清心之功效，臨床上常用于肺燥干咳，虛勞咳嗽，津傷口渴，心煩失眠，內(nèi)熱消渴，腸燥便秘等病癥[4-6]。麥冬藥材主要含甾體皂苷類、高異黃酮類和糖類化合物[7-9]。本研究以川麥冬為例，采用高效液相色譜法來分析研究酒制后整體化學(xué)組分的變化，建立藥材指標(biāo)性成分甲基麥冬黃烷酮A的含量測定方法，從而為中藥炮制品的臨床應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

1　資料與方法

1.1一般資料FA-2004型電子分析天平，Waters 2489型高效液相色譜系統(tǒng)(美國Waters公司)，配置四元梯度泵，UV/Visible檢測器；Waters Symmetry C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱；BS124S型電子分析天平；微量進(jìn)樣器；KH-3200DB型超聲波清洗儀。甲基麥冬黃烷酮A、甲基麥冬黃烷酮B、6-醛基異麥冬黃烷酮A對(duì)照品(供含量測定用，批號(hào)110245-201105)，均購于中國藥品生物制品檢定所；乙腈為色譜純(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)；所用藥材生品川麥冬購于滄州同仁堂藥店，經(jīng)過我系于永軍老師鑒定為正品，其中酒制品川麥冬是其按照新版中藥炮制標(biāo)準(zhǔn)制備得到。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈(A)-0.2%磷酸水(B)為溶劑系統(tǒng)，梯度洗脫。見表1。柱溫30 ℃，流速1.0 mL/min，檢測波長為296 nm。進(jìn)樣量20 μL。

表1　液相梯度洗脫條件

1.2.2溶液的制備

1.2.2.1供試品溶液的制備取生品川麥冬粉末，采用水提法進(jìn)行提取，浸膏進(jìn)行低溫干燥，得到的粉末(過三號(hào)篩)約5.0 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，期間振搖數(shù)次，微孔濾膜濾過，制得供試品溶液1；取酒制川麥冬粉末，采用水提法進(jìn)行提取，浸膏進(jìn)行低溫干燥，得到的粉末(過三號(hào)篩)約5.0 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，期間振搖數(shù)次，微孔濾膜濾過，制得供試品溶液2。將上述1、2號(hào)樣品依次注入高效液相色譜儀，得色譜圖1和色譜圖2。

1.2.2.2對(duì)照品溶液的制備分別精密稱取對(duì)照品甲基麥冬黃烷酮A、甲基麥冬黃烷酮B、6-醛基異麥冬黃烷酮A適量，加甲醇溶解，分別制成每1 mL含甲基麥冬黃烷酮A0.0425 mg、甲基麥冬黃烷酮B0.0431 mg，6-醛基異麥冬黃烷酮A0.0424 mg的3種對(duì)照品溶液。將對(duì)照品溶液，依照上述色譜條件進(jìn)行高效液相色譜分析，得對(duì)照品色譜圖3、圖4、圖5。

圖1生品川麥冬HPLC圖

圖2　酒制川麥冬HPLC圖

圖3　甲基麥冬黃烷酮A對(duì)照品HPLC圖

圖4　甲基麥冬黃烷酮B對(duì)照品HPLC圖

1.2.3線性關(guān)系精密吸取上述甲基麥冬黃烷酮A對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、10 μL，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定色譜峰面積，以進(jìn)樣濃度為橫座標(biāo)，色譜峰面積的積分值為縱座標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得甲基麥冬黃烷酮A的回歸方程為Y=15828ρ+42675，r=0.9998，線性范圍為4.25～42.5 μg/mL。

圖5　6-醛基異麥冬黃烷酮A對(duì)照品HPLC圖

1.2.4精密度試驗(yàn)精密量取上述對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次20 μL，測定峰面積積分值。結(jié)果測得甲基麥冬黃烷酮A峰面積的RSD值為0.85%。表明該測定方法精密度良好。

1.2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液20 μL，分別于配制后0，2，4，8，16，24 h進(jìn)樣，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。測得甲基麥冬黃烷酮A峰面積的RSD值為0.84%。

1.2.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一種酒制川麥冬樣品，按含量測定項(xiàng)下的方法操作，平行6份，按上述色譜條件測定含量。測得甲基麥冬黃烷酮A含量的RSD值為0.67%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

1.2.7加樣回收率試驗(yàn)及樣品含量測定取已知含量的酒制川麥冬樣品6份，精密測定，精密填加同量的甲基麥冬黃烷酮A對(duì)照品適量，按含量測定方法操作，計(jì)算回收率，結(jié)果甲基麥冬黃烷酮A的平均回收率為97.31%(RSD1.54%)。加樣回收率在95%～105%范圍內(nèi)，符合要求。測定結(jié)果見表2。

2　結(jié)果

2.1線性關(guān)系計(jì)算得甲基麥冬黃烷酮A的回歸方程為Y=15828ρ+42675，r=0.9998，線性范圍為4.25～42.5 μg/mL。

2.2精密度試驗(yàn)結(jié)果測得甲基麥冬黃烷酮A峰面積的RSD值為0.85%。表明該測定方法精密度良好。

2.3穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。測得甲基麥冬黃烷酮A峰面積的RSD值為0.84%。

2.4重復(fù)性試驗(yàn)測得甲基麥冬黃烷酮A含量的RSD值為0.67%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.5加樣回收率試驗(yàn)及樣品含量測定

表2　酒制川麥冬中甲基麥冬黃烷酮A的回收率

注：加入量均為0.0439 mg。

表3　樣品含量測定結(jié)果(mg·g-1)

2.6酒制品川麥冬與生品川麥冬化學(xué)成分的比較分析仔細(xì)對(duì)比圖1生品川麥冬與圖2酒制川麥冬的HPLC圖，結(jié)合紫外線吸收數(shù)據(jù)，最終確認(rèn)，5.448 min與5.439 min，18.140 min與18.135 min，24.922 min與24.947 min，53.656 min與53.644 min分別對(duì)應(yīng)同一物質(zhì)，只是這4種物質(zhì)在圖1中對(duì)應(yīng)吸收峰面積較圖2中明顯減??；38.535 min與38.540 min，47.450 min與47.425 min，56.208 min與56.189 min對(duì)應(yīng)同一物質(zhì)，這3種物質(zhì)在圖1、圖2中峰面積差別不大；同時(shí)，認(rèn)真比對(duì)圖1中各吸收峰的紫外線吸收數(shù)據(jù)，我們發(fā)現(xiàn)，在圖2中出現(xiàn)了12.147 min、30.775 min處的吸收峰。

對(duì)比川麥冬對(duì)照品的HPLC圖(圖3、4、5)，結(jié)合紫外光譜數(shù)據(jù)，可確定色譜圖1中保留時(shí)間為18.140 min，圖2中18.135 min處的吸收峰即為甲基麥冬黃烷酮A的吸收峰；圖1中保留時(shí)間為24.922 min，圖2中24.947 min處的吸收峰即為甲基麥冬黃烷酮B的吸收峰；圖1中保留時(shí)間為38.535 min，圖2中38.540 min處的吸收峰即為6-醛基異麥冬黃烷酮A的吸收峰；圖1的川麥冬經(jīng)酒制后甲基麥冬黃烷酮A、甲基麥冬黃烷酮B的含量明顯提高。

輔料黃酒中含有的一些物質(zhì)也有色譜峰出現(xiàn)，可能會(huì)影響到結(jié)界的判斷，因此在上述數(shù)據(jù)分析中均已除去了其對(duì)應(yīng)的色譜峰影響。

3　討論

麥冬藥材中，甲基麥冬黃烷酮A雖然含量不高，但是其具有許多重要的藥理活性[10]，是麥冬質(zhì)量控制的重要指標(biāo)之一，研究其含量測定方法，有助于完善麥冬藥材及制劑的質(zhì)量控制方法，有一定的應(yīng)用價(jià)值[11-13]。在對(duì)供試品溶液進(jìn)行色譜條件摸索時(shí)，在190～400 nm進(jìn)行全波長掃描，其中296 nm波長下檢測色譜峰效果最好，因此選296 nm為檢測波長。本實(shí)驗(yàn)比較了甲醇-0.03%磷酸水溶液、乙腈-水、乙腈-0.2%磷酸水溶液3種不同的梯度洗脫溶劑系統(tǒng)，以乙腈-0.2%磷酸水溶液梯度洗脫溶劑系統(tǒng)所得圖譜的峰形較好、分離度良好，所以選用乙腈-0.2%磷酸水溶液梯度洗脫溶劑系統(tǒng)為本實(shí)驗(yàn)的流動(dòng)相系統(tǒng)。

通過上述數(shù)據(jù)分析，清楚了川麥冬經(jīng)炮制后內(nèi)部化學(xué)成分的顯著變化，酒制川麥冬樣品中有4種物質(zhì)的含量顯著增加，有2種新成分產(chǎn)生。樣品中各成分含量的增加，可能是酒制過程使有效成分溶解度變大，導(dǎo)致溶出量增多。但對(duì)于其他成分的具體變化情況，還有待于進(jìn)一步的研究。

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(2016-01-08收稿責(zé)任編輯：張文婷)

Composition Changes in Sichuan Dwarf Lilyturf Tuber After Being Made by Wine and Determination of the Contents

Jiao Yan,Xie Shijing,Wu Shuang,Yu Na

(Cangzhou Medical College in Hebei Province,Cangzhou 061001,China)

Objective:To study the overall change of chemical composition in Sichuan Dwarf Lilyturf Tuber after being made by wine so as to establish a method for determination of the content of methy lophiopogonanone A in wine made Sichuan Radix.Methods:Fresh Sichuan Dwarf Lilyturf Tuber and wine made Sichuan Dwarf Lilyturf Tuber were take to made liquid extraction by water.After that,the extraction was analyzed by HPLC,Waters Symmetry C18column(4.6 mm× 250 mm,5 μm); the acetonitrile-0.2%Phosphoric acid water was used as the mobile phase; the column temperature was 30 ℃; the detection wavelength was set at 296 nm; Flow rate:1.0 mL·min-1; injection volume:20 μL.Results:The standard curve was drafted with sample concentration as abscissa,and chromatographic peak area value of the vertical axis.The regression equation of methyl Radix flavanones A was calculated as Y=15828ρ+ 42675,r=0.9998,with the linear range of 4.25～42.5 μg·mL-1.RSDof Methyl Radix flavanones A peak area was 0.85%,which showed that the methods had good precision.Reproducibility experiment showed theRSDof Methy lophiopogonanone A content was 0.67%,which showed good reproducibility.The average recovery of methyl Methy lophiopogonanone A was 97.31% (RSD1.54%),with the range of 95%～105%.It met the requirement.Comparative analysis of the chemical composition showed that the content of Methy lophiopogonanone A and B in Sichuan Dwarf Lilyturf Tuber improved significantly after being made by wine.Chemical composition of the wine made Sichuan Dwarf Lilyturf Tuber undergone significant changes in the quantity and quality.Conclusion:Wine made Sichuan Dwarf Lilyturf Tuber showed significant changes in the chemical composition because its overall changes of chemical composition and increase in active ingredients,which provides a theoretical basis for quality evaluation of Sichuan Dwarf Lilyturf Tuber.

Sichuan Dwarf Lilyturf Tuber; HPLC; Chemical composition; Methy lophiopogonanone A

2012年度滄州市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展指導(dǎo)計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：1213145ZD)

焦艷(1983.11—)，女，研究生，講師，教師，研究方向：藥物化學(xué)及藥物分析檢驗(yàn)技術(shù)，E-mail：jykycg@126.com

R284.1

A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.09.062