易細(xì)芹,張泓,凌希,吳金峰,艾坤,鄧石峰

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電針對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸IL-1b及nAchRa7mRNA的影響

易細(xì)芹,張泓,凌希,吳金峰,艾坤,鄧石峰

(湖南中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院,長沙 410208)

目的 對(duì)比觀察電針潰瘍性結(jié)腸炎大鼠上巨虛、足三里、下巨虛、陽陵泉等穴后對(duì)結(jié)腸組織白介素-1b(IL-1b)及煙堿型乙酰膽堿受體a7信使核糖核酸(nAchRa7mRNA)表達(dá)的影響,探討大腸下合穴上巨虛治療對(duì)應(yīng)腑病是否存在相對(duì)特異性。方法 將70只健康SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、上巨虛組、足三里組、下巨虛組、陽陵泉組及承筋組,每組10只,雌雄各半。除空白組外均采用2-4-6三硝基苯磺酸/乙醇溶液灌腸誘導(dǎo)建立大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型,造模成功并治療10 d后,肉眼觀察大鼠結(jié)腸黏膜潰瘍及炎癥情況,ELISA法檢測(cè)大鼠結(jié)腸組織中IL-1b含量,RT-PCR檢測(cè)nAchRa7mRNA的表達(dá)。結(jié)果 與模型組比,各穴位組結(jié)腸損傷有不同程度好轉(zhuǎn),組織IL-1b含量明顯偏低而nAChRa7mRNA表達(dá)均較高(＜0.05,＜0.01),且上巨虛組、足三里組結(jié)腸潰瘍?cè)u(píng)分亦較低(＜0.05,＜0.01);與上巨虛組比,其他4個(gè)穴位組結(jié)腸nAChRa7mRNA表達(dá)均較低(＜0.01),而下巨虛組、陽陵泉組、承筋組結(jié)腸潰瘍及炎癥損傷較嚴(yán)重,結(jié)腸潰瘍?cè)u(píng)分及IL-1b含量均偏高(＜0.05,＜0.01)。結(jié)論 電針治療潰瘍性結(jié)腸炎的機(jī)制可能是通過影響IL-1b、nAchRa7mRNA等調(diào)節(jié)異常的免疫功能,改善結(jié)腸黏膜損傷等來實(shí)現(xiàn)的;上巨虛治療潰瘍性結(jié)腸炎的總體效應(yīng)優(yōu)于足三里、下巨虛、陽陵泉及承筋穴,說明上巨虛穴與對(duì)應(yīng)大腸腑之間存在一定的相對(duì)特異性。

電針;穴,下合;結(jié)腸炎,潰瘍性;大鼠;IL-1b;nAchRa7mRNA;合治內(nèi)府

以經(jīng)典理論為基礎(chǔ)探討腧穴的特異性正在興起,“合治內(nèi)府”之“合”穴的特異性即成為研究的熱點(diǎn)之一。下合穴是六腑下合于足三陽經(jīng)的特定穴,《靈樞·本輸》:“六腑皆出足之三陽”,結(jié)合“手三陽無腑證”的認(rèn)識(shí),“合治內(nèi)府”之“合”應(yīng)為腑之下合穴而非經(jīng)之合穴。我們前期也觀察到上巨虛、下巨虛穴治療相應(yīng)腑病的效應(yīng)分別優(yōu)于曲池與小海穴[1-2],為證實(shí)“合治內(nèi)府”之“合”的內(nèi)涵提供了部分實(shí)驗(yàn)依據(jù)。近年來大量研究證實(shí)針灸下合穴治療對(duì)應(yīng)內(nèi)腑病變有著良好的療效[3-5]。與消化系統(tǒng)生理病理相關(guān)內(nèi)腑的下合穴基本上位處同一神經(jīng)節(jié)段,且上巨虛、足三里、下巨虛均隸屬于足陽明胃經(jīng),其與對(duì)應(yīng)內(nèi)腑之間是否存在相對(duì)特異性?古典醫(yī)籍均無明確記載,現(xiàn)代臨床與實(shí)驗(yàn)也鮮有報(bào)道。針對(duì)上述問題,我們以潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)大鼠為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?通過電針刺激胃、腸、膽腑下合穴等,對(duì)比觀察不同穴組對(duì)UC大鼠結(jié)腸潰瘍及炎癥評(píng)分、組織白介素-1b(Interleukin-1b,IL-1b)及煙堿型乙酰膽堿受體a7信使核糖核酸(neuronal acetylcholine receptorsa7mRNA,nAchRa7mRNA)表達(dá)的影響,探討大腸下合穴上巨虛治療大腸腑病UC是否存在相對(duì)特異性,為臨床運(yùn)用下合穴治療大腸腑病提供部分實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物分組

SPF級(jí)SD大鼠70只,雌雄各半,體重(230±15)g,飼養(yǎng)溫度20～25℃,濕度50%～70%,由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供(湖南省動(dòng)物質(zhì)量合格證編號(hào)為43004700003928)。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)10 d,隨機(jī)分為7組,即空白組、模型組、上巨虛組、足三里組、下巨虛組、陽陵泉組、承筋組,每組10只,雌雄各半。

1.2 主要試劑與儀器

5% 2-4-6三硝基苯磺酸(Sigma公司),無水乙醇(上海國藥生物),烏來糖(上海山浦化工公司),大鼠IL-1b酶聯(lián)免疫分析試劑盒(武漢華美生物工程有限公司),逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Fermentas公司),Tris、EDTA、E.B.SYBGREEN PCR Mix和DEPC(Sigma公司),Trizol (Invitrogen公司),DL2000 DNA Marker、dNTP及Taq酶(Genstar公司),引物(上海生物工程)等;全套動(dòng)物手術(shù)器械、CBV-1500A型無菌工作臺(tái)(上海瑞仰凈化裝備有限公司),毫針(規(guī)格0.30 mm×25 mm,蘇州醫(yī)療用品廠有限公司),SDZ-V型電針治療儀(蘇州醫(yī)療用品廠有限公司),5810R型高速冷凍離心機(jī)(Eppendorf公司),熒光定量PCR儀和熒光PCR板恒溫水浴箱(Thermo公司)等。

1.3 模型制備

參考文獻(xiàn)[6]并改良后進(jìn)行造模,造模前大鼠禁食不禁水24 h,以25%烏拉坦腹腔注射麻醉(0.5 mL/ 100 g),采用大鼠灌胃針頭輕輕從肛門沿腸腔插入8 cm,用注射器注入含30 mg三硝基苯磺酸(即2.5% TNBS0.6 mL)的50%乙醇溶液0.85 mL,快速捏緊肛門(防止藥物溢出),5 min后仰臥歸籠。待其清醒后常規(guī)飼養(yǎng)。造模后觀察大鼠是否出現(xiàn)懶動(dòng)、拱背、厭食、大便次數(shù)增多、便軟或稀、大便末端有黏液等表現(xiàn),出現(xiàn)1項(xiàng)記1分,無則記0分,并累計(jì)總分,2分及以上為造模成功。

實(shí)驗(yàn)過程中對(duì)動(dòng)物的處置符合2009年Ethical issues in animal experimentation相關(guān)動(dòng)物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)的條例[7]。

1.4 治療方法

穴位選取根據(jù)《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[8]的方法并結(jié)合擬人比照法量取。上巨虛位于大鼠后肢上后三里穴下約5 mm處,直刺7 mm;足三里位于大鼠后膝關(guān)節(jié)外下方當(dāng)腓骨小頭下約5 mm處,直刺5 mm;下巨虛位于大鼠膝關(guān)節(jié)外側(cè)脛骨外上髁下約15 mm,直刺5 mm;陽陵泉位于大鼠距后三里上外側(cè)5 mm,直刺7 mm;承筋位于大鼠后肢小腿后面,腓腸肌肌腹中央,直刺7 mm。空白組不做任何處理,模型組每天只捆綁不針刺30 min;穴位組每天捆綁并行電針治療。使用SDZ-V型華佗牌電針治療儀,參數(shù)為疏密波(10/50 Hz),左正右負(fù),強(qiáng)度1～3 mA,以肢體出現(xiàn)震顫為度,留針30 min,每天1次,治療10 d。

1.5 樣本的采集與處理

治療結(jié)束后各組大鼠用25%烏拉坦按0.5 mL/ 100 g的劑量行腹腔麻醉,立即開腹從肛門向上剖取8 cm結(jié)腸組織,并沿腸系膜縱軸方向剪開腸腔,迅速用冰生理鹽水沖洗后,于10倍放大鏡下行肉眼下潰瘍及炎癥評(píng)分,再從腸近端至遠(yuǎn)端取一份約100 mg結(jié)腸組織,迅速置于﹣70℃低溫冰箱保存,待做ELISA法檢測(cè)IL-1b含量,另取出一塊約150 mg左右的結(jié)腸組織于液氮中保存待做nAchRa7mRNA的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)。

1.6 檢測(cè)指標(biāo)

1.6.1 結(jié)腸組織肉眼潰瘍及炎癥評(píng)分

參照朱峰等[9]評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),0分為無損傷;1分為黏膜充血、水腫,但未出現(xiàn)潰瘍;2分為黏膜充血、水腫、輕度糜爛,無潰瘍;3分為黏膜充血、水腫、中度糜爛,有單個(gè)潰瘍;4分為黏膜充血、水腫、高度糜爛,有多處潰瘍;5分為黏膜充血、水腫、重度糜爛,有＞1 cm潰瘍。

1.6.2 結(jié)腸組織IL-1b的檢測(cè)

組織IL-1b含量檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法,具體按照試劑盒步驟操作,取約0.1 g組織加入1 mL PBS液研磨勻漿;于4℃,5000×,離心5 min后取上清,上清液于﹣20℃反復(fù)凍融3次;用蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。建立標(biāo)準(zhǔn)曲線后加樣,每孔中加入上清100mL,封板置37℃恒溫箱中120 min;洗板5次后每孔加入第一抗體工作液50mL,旋渦振蕩器上混勻后封板置37℃恒溫60 min;洗板5次后每孔加入酶標(biāo)抗體工作液100mL,混勻后封板置37℃恒溫箱60 min;洗板5次每孔加入底物液100mL,混勻后封板37℃置恒溫箱反應(yīng)10 min;每孔加入終止液50mL,混勻,立即在450 nm波長下測(cè)定吸光度值,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中IL-1b的含量。樣品實(shí)際濃度=標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算值/相對(duì)蛋白定量。

1.6.3 結(jié)腸組織nAchRa7mRNA的檢測(cè)

組織中nAchRa7mRNA采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè),具體步驟如下。按Trizol試劑的使用操作步驟提取組織總RNA,進(jìn)行RNA的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)總RNA的純度。以b-肌動(dòng)蛋白(b-actin)基因?yàn)閮?nèi)參,在NCBI上搜索目的基因的序列,運(yùn)用Primer5軟件設(shè)計(jì),由南京金斯瑞合成引物,設(shè)計(jì)nAchRa7的引物序列,擴(kuò)增引物見表1。

表1 nAChRa7和b-actin內(nèi)參基因引物序列

按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明以組織總mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄cDNA,采用隨機(jī)引物,按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒的操作說明在普通PCR儀上進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,合成第一條cDNA鏈,總的反應(yīng)體積是20mL,再以1mL逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)產(chǎn)物為模板,采用SYBR法,按照熒光實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒的說明,冰上配置30mL的PCR反應(yīng)體系。RT-PCR反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性10 min,95℃變性10 s, 59℃退火/延伸50 s。擴(kuò)增40個(gè)循環(huán),并于60～95℃采集熔解曲線,根據(jù)PCR產(chǎn)物熔解曲線的平均熔解溫度確定產(chǎn)物的純度。如果產(chǎn)物特異,則熔解曲線無雜峰,平均熔解溫度一致。以b-actin的Ct值校正目的基因Ct值,實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用2﹣ΔΔCt法,計(jì)算目的基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的差異。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)使用SPSS17.0軟件處理,用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,所有資料均進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn),多組計(jì)量資料采用單因素方差分析法。潰瘍?cè)u(píng)分?jǐn)?shù)據(jù)不符合正態(tài)分布,采用秩和檢驗(yàn);組織nAchRa7mRNA數(shù)據(jù)滿足正態(tài)性但不滿足方差齊性,采用’3法;組織IL-1b數(shù)據(jù)滿足正態(tài)性且方差齊性,采用法。以＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

模型組大鼠造模后疑因潰瘍穿孔死亡2只,陽陵泉組治療過程中疑因病情惡化死亡1只,故納入統(tǒng)計(jì)大鼠67只。

2.1 結(jié)腸潰瘍及炎癥組織肉眼圖片及評(píng)分結(jié)果

如圖1所示,空白組大鼠結(jié)腸黏膜正常;模型組大鼠結(jié)腸黏膜充血、水腫、糜爛,有潰瘍;上巨虛組及足三里組黏膜充血、水腫均較輕,無明顯糜爛,未見潰瘍;下巨虛組、陽陵泉組、承筋組結(jié)腸黏膜充血、水腫、糜爛較重,可見潰瘍。圖中箭頭所指為結(jié)腸組織損傷明顯處。

注:A-空白組,B-模型組,C-上巨虛組,D-足三里組,E-下巨虛組,F-陽陵泉組,G-承筋組

圖1 各組大鼠結(jié)腸潰瘍組織肉眼圖片

如表2所示,與空白組比較,余組結(jié)腸潰瘍及炎癥評(píng)分明顯偏高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05,＜0.01);與模型組比較,上巨虛組、足三里組潰瘍?cè)u(píng)分明顯偏低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05,＜0.01),下巨虛組、陽陵泉組、承筋組潰瘍?cè)u(píng)分降低,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05);與上巨虛組比較,下巨虛組、陽陵泉組、承筋組潰瘍?cè)u(píng)分均偏高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05,＜0.01),足三里組與之比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05);與足三里比較,除承筋組評(píng)分較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)外,下巨虛、陽陵泉組與之比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05)。

表2 各組大鼠結(jié)腸組織黏膜潰瘍及炎癥評(píng)分比較(±s,分)

表2 各組大鼠結(jié)腸組織黏膜潰瘍及炎癥評(píng)分比較(±s,分)

組別n潰瘍及炎癥評(píng)分 空白組100.30±0.48 模型組83.25±1.042) 上巨虛組101.20±0.921)4) 足三里組101.90±0.992)3) 下巨虛組102.40±1.072)5) 陽陵泉組92.44±0.882)5) 承筋組103.10±0.122)6)7)

注:與空白組比較1)＜0.05,2)＜0.01;與模型組比較3)＜0.05,4)＜0.01;與上巨虛組比較5)＜0.05,6)＜0.01;與足三里組比較7)＜0.05

2.2 各組大鼠結(jié)腸組織中IL-1b含量比較

如表3所示,與空白組比較,模型組、下巨虛組、陽陵泉組、承筋組結(jié)腸組織IL-1b含量均偏高,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.01),足三里組、上巨虛組IL-1b増高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05);與模型組比較,5個(gè)穴位組結(jié)腸組織IL-1b含量明顯偏低,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.01);與上巨虛組比較,下巨虛組、陽陵泉組、承筋組結(jié)腸組織IL-1b含量明顯偏高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05,＜0.01),足三里組與之比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05);與足三里組比較,下巨虛組、陽陵泉組、承筋組結(jié)腸組織IL-1b含量均偏高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。

表3 各組大鼠結(jié)腸組織中IL-1b含量比較(±s,pg/mL)

表3 各組大鼠結(jié)腸組織中IL-1b含量比較(±s,pg/mL)

組別nIL-1b 空白組1055.19±12.88 模型組8115.05±20.401) 上巨虛組1064.12±9.152) 足三里組1066.05±16.372) 下巨虛組1081.60±13.051)2)3)5) 陽陵泉組983.12±19.411)2)4)5) 承筋組1083.68±12.221)2)4)5)

注:與空白組比較1)＜0.01;與模型組比較2)＜0.01;與上巨虛組比較3)＜0.05,4)＜0.01;與足三里組比較5)＜0.05

2.3 各組大鼠結(jié)腸中nAChRa7mRNA表達(dá)比較

如表4所示,與空白組比較,余組結(jié)腸nAChRa7mRNA表達(dá)明顯偏低,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.01);與模型組比較,各穴位組結(jié)腸nAChRa7mRNA表達(dá)均較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05,＜0.01);與上巨虛組比較,其他4個(gè)穴位組結(jié)腸nAChRa7mRNA表達(dá)均較低,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.01);與足三里組比較,陽陵泉組、承筋組結(jié)腸nAChRa7mRNA表達(dá)明顯偏低,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.01),而下巨虛組與之比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05);與下巨虛組比較,陽陵泉組、承筋組結(jié)腸nAChRa7mRNA表達(dá)偏低,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.01);與陽陵泉組比較,承筋組nAChRa7mRNA較低,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.01)。

表4 各組大鼠結(jié)腸組織中nAChRa7mRNA表達(dá)比較(±s)

表4 各組大鼠結(jié)腸組織中nAChRa7mRNA表達(dá)比較(±s)

組別nnAChRa7mRNA 空白組101.06±0.11 模型組80.33±0.031) 上巨虛組100.85±0.041)3) 足三里組100.72±0.061)3)4) 下巨虛組100.65±0.041)3)4) 陽陵泉組90.54±0.051)3)4)5)6) 承筋組100.40±0.041)2)4)5)6)7)

注:與空白組比較1)＜0.01;與模型組比較2)＜0.05,3)＜0.01;與上巨虛組比較4)＜0.01;與足三里組比較5)＜0.01;與下巨虛組比較6)＜001;與陽陵泉組比較7)＜0.01

3 討論

《靈樞·邪氣臟腑病形》提出“合治內(nèi)府”,意指下合穴治療腑病。臨床下合穴治療腑病療效顯著[10-13],基于“合治內(nèi)府”理論研究下合穴臨床應(yīng)用的相對(duì)特異性成為重要命題之一。潰瘍性結(jié)腸炎是臨床常見的消化系統(tǒng)疾病,在我國發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)[14],是典型的大腸腑病。本項(xiàng)目借助UC模型大鼠為研究對(duì)象,通過對(duì)比觀察電針緊密聯(lián)系的與消化系統(tǒng)相關(guān)的不同下合穴對(duì)UC的療效,并以位置相近的非下合穴承筋作為對(duì)照,探討上巨虛治療大腸腑病是否存在相對(duì)特異性,為證實(shí)經(jīng)典理論“合治內(nèi)府”部分內(nèi)涵進(jìn)行有益的嘗試。

針灸療法有雙向良性調(diào)整作用,可以調(diào)節(jié)免疫功能,并能有效抗擊炎癥反應(yīng)[15]。腸道黏摸本身是一個(gè)重要的免疫器官,在免疫屏障和抗黏膜損傷等方面起著重要的作用。當(dāng)UC發(fā)生時(shí),結(jié)腸腸道黏膜被破壞,表現(xiàn)為結(jié)腸充血、水腫、有炎性滲出物,結(jié)腸重量、組織損傷評(píng)分及過氧化物酶活性均顯著增加[16]。研究[17]發(fā)現(xiàn)電針可顯著改善UC大鼠造模后導(dǎo)致的形態(tài)學(xué)上細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化。免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)異常是UC發(fā)病的中心環(huán)節(jié),而細(xì)胞因子在免疫調(diào)節(jié)過程中起關(guān)鍵作用。IL-1b可激活補(bǔ)體、吞噬細(xì)胞及殺傷細(xì)胞的活性,增強(qiáng)體液免疫和細(xì)胞免疫介導(dǎo)組織損傷過程。白細(xì)胞介素(IL-1b、IL-6、IL-8)與UC患者臨床癥狀、活動(dòng)度、內(nèi)鏡表現(xiàn)及組織學(xué)分級(jí)明顯相關(guān),且能夠有效反映患者病情變化[18],當(dāng)發(fā)生腸道炎癥時(shí),IL-1b比其他炎癥因子有更明顯的優(yōu)勢(shì),IL-1Ra(IL-1受體拮抗劑)/IL-1比例與炎癥程度呈顯著負(fù)相關(guān)。nAchRa7具有調(diào)節(jié)神經(jīng)元興奮性的功能,可使神經(jīng)元處于一種合適的生理狀態(tài)[19]。研究[20]認(rèn)為ACh、a7nAChR激動(dòng)劑劑量能夠發(fā)揮阻止LPS產(chǎn)生炎性因子但不會(huì)阻礙抗炎因子IL-10產(chǎn)生,其機(jī)制在于借助nAChR介導(dǎo)有效地阻礙蛋白合成。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明,nAChRa7亞基是該機(jī)制中最為核心的因素[21]。UC屬于炎癥性腸病,免疫系統(tǒng)異常反應(yīng)對(duì)UC發(fā)病起著關(guān)鍵性的作用[22],而nAChRa7介導(dǎo)的一系列神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)作用在UC治療中占據(jù)著舉足輕重的地位。研究[23]顯示a7nAChR激動(dòng)劑八角楓堿可明顯抑制三硝基苯磺酸誘導(dǎo)的結(jié)腸炎炎癥反應(yīng)。研究[24-26]表明,尼古丁(a7nAChR激動(dòng)劑)有鎮(zhèn)痛、降低IL-1和IL-8水平、減輕腸道炎癥反應(yīng)及不適癥狀的功能。另有研究發(fā)現(xiàn)抑制ACh的分解亦可降低a7nAChR介導(dǎo)的炎癥細(xì)胞因子釋放,改善葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎[27]。

本實(shí)驗(yàn)中,肉眼觀察UC模型組大鼠結(jié)腸組織可見黏膜充血、水腫、糜爛,有潰瘍,且結(jié)腸潰瘍及炎癥評(píng)分和組織IL-1b含量明顯高于空白組,nAChRa7mRNA表達(dá)則較低,說明在外來抗原刺激下,大鼠腸黏膜免疫系統(tǒng)被激活,黏膜自身免疫性炎癥損傷增加,提示造模成功。電針治療后,各穴位組與模型組比較大鼠結(jié)腸潰瘍及炎癥肉眼觀察均有不同程度的改善,潰瘍及炎癥評(píng)分和IL-1b含量均較低,nAChRa7mRNA表達(dá)均偏高,說明電針穴位可調(diào)節(jié)異常的免疫功能,降低免疫細(xì)胞對(duì)炎癥的反應(yīng)性,從而減輕炎癥。進(jìn)一步比較可知,上巨虛組上述效果均明顯優(yōu)于下巨虛組、陽陵泉組及承筋組,且結(jié)腸nAChRa7mRNA表達(dá)高于足三里組,提示上巨虛治療UC具有一定的相對(duì)特異性。另足三里組療效優(yōu)于承筋組,部分療效較下巨虛組和陽陵泉組明顯,提示電針足三里對(duì)UC的療效相對(duì)較好,這與胃、大腸功能上下相承一致,以往的研究[28-29]也有相關(guān)報(bào)道。

綜上所述,電針與消化系統(tǒng)相關(guān)的下合穴等均可對(duì)UC模型大鼠產(chǎn)生不同程度的治療作用,其機(jī)制應(yīng)是通過影響IL-1b、a7nAchRmRNA等調(diào)節(jié)異常的免疫功能,改善腸道黏膜損傷等來實(shí)現(xiàn)的;上巨虛治療UC的總體效應(yīng)優(yōu)于足三里、下巨虛、陽陵泉及承筋穴,說明上巨虛穴與對(duì)應(yīng)大腸腑之間存在一定的相對(duì)特異性。

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Effect of Electroacupuncture on Colonic IL-1band nAchRa7mRNA in Ulcerative Colitis Rats

YI Xi-qin, ZHANG Hong, LING Xi, WU Jin-feng, AI Kun, DENG Shi-feng.

Hunan University of Traditional Chinese Medicine School of Acupuncture and Massage, Changsha 410208,China

Objective To compare the effects of electroacupuncture at points Shangjuxu(ST37), Zusanli(ST36), Xiajuxu(ST39) and Yanglingquan(GB34) on colonic expressions of interleukin-1b(IL-1b) and nicotinic acetylcholine receptora7 mRNA (nAchRa7mRNA) in ulcerative colitis rats and investigate if large intestine lower He-Sea point Shangjuxu has relative specificity to fu organ diseases. Method Seventy healthy SD rats were randomized into blank, model, Shangjuxu, Zusanli, Xiajuxu, Yanglingquan and Chengjin groups, 10 rats, half male and half female, each. A rat model of ulcerative colitis was made by induction of 2-4-6 three nitrobenzene sulfonic acid/ethanol solution enema in every group except the blank group. After successful model making and ten days of treatment, rat colonic mucosal ulcers and inflammation were observed macroscopically, colonic IL-1bcontent was measured by ELISA and the expression of nAchRa7mRNA was determined by RT-PCR. Result Compared with the model group, colonic lesions were reduced in varying degrees, colonic IL-1bcontent was significantly lower and the expression of nAchRa7mRNA was higher in every acupoint group (＜0.05,＜0.01); the colonic ulcer score was lower in the Shangjuxu and Zusanli groups (＜0.05,＜0.01). Compared with the Shangjuxu group, colonic expression of nAchRa7mRNA was lower in the other four acupoint groups (＜0.01); colonic mucosal ulcers and inflammatory lesions were more severe and the colonic ulcer score and the IL-1bcontent were higher in the Xiajuxu, Yanglingquan and Chengjin groups (＜0.05,＜0.01). Conclusion The mechanism of electroacupuncture treatment for ulcerative colitis may be that it regulates abnormal immunologic function by modulating IL-1band nAchRa7mRNA and reduces mucosal lesions. The overall therapeutic effect of Shangjuxu is better than those of Zusanli, Xiajuxu, Yanglingquan and Chengjin, indicating that Shangjuxu has relative specificity to fu organ large intestine.

Electroacupuncture; Point, lower He-Sea; Colitis, ulcerative; Rats; IL-1b; nAchRa7mRNA; Lower He-Sea point for fu organ diseases

1005-0957(2016)10-1251-05

R2-03

A

10.13460/j.issn.1005-0957.2016.10.1251

2016-02-20

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81173327/H2718)

易細(xì)芹(1989 - ),女,助教,碩士,Email:995010568@qq.com

張泓(1963 - ),男,教授,博士,Email:zh5381271@sina.com