季玲玲

[摘 要]高效液相色譜儀的精密性高，因此在日常維護過程中需格外注意，稍有不慎，將會產(chǎn)生嚴重的影響。本文列舉安捷倫高效液相色譜儀這一實例，分別從儀器開機維護、期間核查、運行環(huán)境、關(guān)機維護、柱前柱后維護等諸多環(huán)節(jié)入手展開研究。

[關(guān)鍵詞]安捷倫 高效液相色譜儀 日常維護 期間核查

中圖分類號：TS206.2 文獻標識碼：A 文章編號：1009-914X（2016）21-0088-01

引言

高效液相色譜儀（HPLC）的靈敏度高、分辨率高、色譜柱支持反復(fù)利用、運行效率高、速度快、流出組收集難度低，是當前我國實驗室內(nèi)使用范圍較廣的一種分析型儀器。如今，在大氣環(huán)境分析、無機分析、生物醫(yī)藥研究、食品檢測等領(lǐng)域，高效液相色譜儀都得到了應(yīng)用。

安捷倫高效液相色譜儀的出現(xiàn)，使HPLC的壓力上限得到了提升，四元泵、等度泵、二元泵系統(tǒng)的壓力上限均可達到600bar，其最高流速多達5mL/min。其中，四元泵系統(tǒng)與等度泵系統(tǒng)的壓力上限在達到200 bar時，其流速為10mL/min，檢測速率為80 Hz，靈敏度為原先的十倍，大大提高了安捷倫的通用性，促使安捷倫的分離速度上升了一個臺階。

1 安捷倫高效液相色譜儀的環(huán)境要求

為了保持儀器的正常運行，延長儀器的使用壽命，環(huán)境必須保持干凈、電壓穩(wěn)定、遠離水源。我們應(yīng)避免在溫度和濕度的急劇變化，一般溫度保持在1530℃，濕度30% - 80%。高效液相色譜法是最常用的有機溶劑，如甲醇，有揮發(fā)性并且有毒性，并應(yīng)配備通風設(shè)備。

2 安捷倫高效液相色譜儀的開機維護

首先，檢查檢測過程中用到的色譜柱與流動相的準確性，緊接著將儀器的穩(wěn)壓電源打開，然后打開柱箱與輸液泵，待色譜柱的最大保護柱壓設(shè)置好后開始排氣，保證流路過程中沒有氣泡產(chǎn)生。若有氣泡存在，氣泡內(nèi)的氧氣會對儀器組件發(fā)生氧化作用，導(dǎo)致機器的性能指標受到影響。其次，在控制流速的過程中，應(yīng)遵循由慢到快的過程，如此可對色譜柱起到更佳的保護效果。再者，要認真觀察柱壓和流速是否可以合理與平穩(wěn)地增加，等到流速已達到所需值且柱壓處于穩(wěn)定狀態(tài)后，促使檢測器工作，如此即可有助于檢測器的使用壽命增加。

3 高壓輸液泵的維護

整個液相系統(tǒng)能否通暢、壓力是否穩(wěn)定、流量是否準確主要取決于輸液泵。若壓力的跳動幅度大、流量的精準度不高，會導(dǎo)致基線的變幅增大，噪音擴大，最終使檢驗最終結(jié)果與實際出現(xiàn)偏離。為此，要采用HPLC級別的流動相，運用0.45μm濾膜進行過濾。①流動相使用前須脫氣，避免給在線脫氣機太大的壓力。定期更換流動相，避免水溶液滋生藻類或微生物。②要注意更換濾芯，在排氣泡的時候，水相以5 ml/min的流速，壓力超過10 bar就要更換濾芯。③配制10%異丙醇溶液，清洗柱塞清洗附件。調(diào)節(jié)其打開周期，讓泵里充滿異丙醇溶液，防止鹽析出。④清洗更換溶劑人口過濾頭，如果是玻璃材質(zhì)的，不能用超聲清洗，只能用30%的硝酸溶液浸泡，定期更換。

4 色譜柱的柱前柱后維護

色譜柱屬于消耗品，所以購置到的色譜柱的廠家與儀器的廠家不同的情況很普遍。實際上，不同廠家的管線接頭也許會和柱頭之間存在偏差的可能。因此，在購置色譜柱的過程中，要謹慎行事，嚴格依據(jù)儀器接頭購置柱頭與其相符的色譜柱。

使用流動相前千萬注意，流動相與色譜柱內(nèi)的保存溶劑和系統(tǒng)內(nèi)存留溶劑的混溶性，避免形成乳化小液滴，從而毀壞柱子?？梢允褂卯惐甲鳛檫^渡溶劑，實驗室應(yīng)配備有色譜純的異丙醇作為過渡溶劑，或用于清洗備件。在使用中應(yīng)當注意，過濾是非常重要的環(huán)節(jié)，有效過濾才能夠有效保護色譜柱、儀器。為了避免這種情況，不能使用已經(jīng)存放日期過長的蒸餾水及磷酸鹽溶液，如果條件許可的話，可以采用“在溶液中加入0.0001-0.001M的疊氮化鈉”的方法來處理解決。也可以在溶劑瓶內(nèi)溶劑的上方不斷地吹入比較穩(wěn)定的氬氣從而實現(xiàn)隔絕空氣的目的。另外，切忌將溶劑瓶放置于光線強烈的環(huán)境下，否則會使溶液本身的效用喪失。同時，為了減輕陽光對容積瓶的影響，應(yīng)盡可能地運用琥珀色的溶劑瓶進行防治。當然，也可采取把保護柱安裝于色譜柱之前的方式，以防色譜柱受到污染。此外，要定期用水對全部通道進行沖洗，確保閥口上的鹽沉淀被及時清除。

鑒于在日常分析檢測過程中的對象大部分是復(fù)雜的混合物，但色譜柱的內(nèi)腔容積與填料相當小，考慮到色譜柱的使用時間有限，因此通常會在柱前應(yīng)用保護柱，通過0.45μm的濾膜后才能使用樣品，并定期更換保護柱芯。待樣品做好后，清洗干凈流路與柱子，確保其清潔度達到要求。為節(jié)省光源，增加燈的使用年限，應(yīng)關(guān)閉檢測器開關(guān)，然后選取5%的甲醇與95%的水對流路內(nèi)的鹽進行沖洗，緊接著用5%的水與95%的甲醇繼續(xù)進行沖洗，待其使整個系統(tǒng)達到充盈狀態(tài)。色譜柱首先選擇50%的乙睛水將殘留物清除，然后用純乙睛充滿整個柱子。

5 期間核查

試劑：山梨酸標準溶液；

檢測條件：色柱：Hypersil ODS， 5 EA.m， 4.6 mm×150 mm；流速：1.0 mL/min；

流動相：甲醇、乙酸錢溶液（（ 0.02 mol/L ） （ 5：95，VIV）；

檢測器：二極管陣列檢測器，紫外檢測器，波長230 nm。

6 評定結(jié)果

6.1 技術(shù)要求

①通過六次測量后，得到的定性測量重復(fù)性誤差，RSD定性為1.5%。②定量測量重復(fù)性誤差（6次測量）RSD定量為3.0%。③回收率（6次測量濃度的平均值與標準液濃度）大約處在90%至110%的范圍內(nèi)。

6.2 液相色譜儀期間核查記錄表

選擇以濃度值是20μg/mL的山梨酸為標準物，進樣量是10μL，波長是230 nm，甲醇為其流動相：乙酸錢溶液（0.02 mol/L）（5：95，V/V），流量是1mL/min，下表1為液相色譜儀期間核查記錄表。

6.3 核查結(jié)論

通過對儀器設(shè)備的使用期間的驗證，以滿足實驗工作的要求，保證實驗結(jié)果的準確性，試驗檢定的有效期內(nèi)可以繼續(xù)使用。

7 安捷倫高效液相色譜儀關(guān)機維護

做完實驗后，需立馬清洗色譜柱，確保色譜柱干凈。首先，要關(guān)閉檢測器的開關(guān)，以節(jié)省光源，延長儀器燈的使用時間。同時，將檢測器和色譜柱的連接程序全部切斷，從而避免對檢測池形成不利影響。運用流動相對流路進行長達半個多小時的沖洗，緊接著用15%的甲醇水洗大約10min，再用純甲醇沖大概30min，運用純化水對外流路等處進行沖洗。輸液泵的流速減至0時，才可將穩(wěn)壓器與泵關(guān)閉。若把柱子徹底地浸泡在有機相中放置的話，可以有效防止純有機相封存反相色譜柱。

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