Nguyen Thanh Tuan， Le Bao Thanh， 顏學(xué)武

(1.南京林業(yè)大學(xué)森林資源與環(huán)境學(xué)院， 江蘇 南京 210037；2.越南林業(yè)大學(xué) 森林資源管理與環(huán)境學(xué)院， 越南 河內(nèi) 100803； 3.湖南省林業(yè)科學(xué)院， 湖南 長(zhǎng)沙 410004)

越南松樹枯死病癥狀及原因初步研究

Nguyen Thanh Tuan1，2， Le Bao Thanh2， 顏學(xué)武3*

(1.南京林業(yè)大學(xué)森林資源與環(huán)境學(xué)院， 江蘇 南京 210037；2.越南林業(yè)大學(xué) 森林資源管理與環(huán)境學(xué)院， 越南 河內(nèi) 100803； 3.湖南省林業(yè)科學(xué)院， 湖南 長(zhǎng)沙 410004)

為查明越南松樹枯死的原因，對(duì)越南南部的林同省，中部的承天-順化省，北部的廣寧省的思茅松、馬尾松和南亞松枯死癥狀和原因進(jìn)行了調(diào)查，分別從枯死、瀕死、健康松樹木質(zhì)部中抽取52份樣品，用于線蟲分離鏡檢。調(diào)查發(fā)現(xiàn)松樹在感病后，樹冠部分針葉失去光澤，逐漸褪綠變黃，進(jìn)而褐紅干枯，最后整個(gè)樹冠變?yōu)楹稚蚣t褐色，全株枯死，針葉下垂且當(dāng)年不落；隨著病程的發(fā)展，松脂分泌逐漸減少，直至停止；樹干上有天牛產(chǎn)卵刻槽，死亡的松樹上有天牛的羽化孔。在抽取的松樹樣品中分離鑒定到了泰國(guó)傘滑刃線蟲(BursaphelenchusthailandaeBrassch & Brassch-Bidasak，2002)，為病原的確定和防治工作提供初步的依據(jù)。

越南； 松樹； 天牛； 線蟲

松樹在越南是重要的樹種，樹形好，壽命長(zhǎng)，適應(yīng)性強(qiáng)，主要分布于廣寧省、河江省、老街省、諒山省、宜安省、承天-順化省、林同省等。松樹除為國(guó)民經(jīng)濟(jì)發(fā)展提供木材和樹脂外，還是荒山造林的主要先鋒樹種，營(yíng)造風(fēng)景林療養(yǎng)林的優(yōu)選樹種。在原始林遭到破壞或火災(zāi)后，松樹很易發(fā)展起來(lái)而占據(jù)裸露空間，建立生態(tài)系統(tǒng)。但是，隨著人工松樹林面積不斷增加，病蟲害危害面積也逐年增加。在越南危害松林比較嚴(yán)重的病蟲害主要為松毛蟲、松葉蜂、松落葉病、松樹枯死病等。目前，越南與其他國(guó)家貿(mào)易與交流不斷增多，松樹受到松材線蟲病等外來(lái)有害生物入侵的風(fēng)險(xiǎn)增強(qiáng)。1994年，越南首次在林同省發(fā)現(xiàn)了受線蟲危害的思茅松(P.kesiyaRoyle)，其萎蔫癥狀與松材線蟲病相似[1]。后來(lái)，其他省份也發(fā)現(xiàn)松樹枯死病，但是不清楚其發(fā)病原因，為此，我們開(kāi)展了林間調(diào)查和室內(nèi)實(shí)驗(yàn)分析。

1 材料與方法

1.1調(diào)查地點(diǎn)和松樹樹種

癥狀觀察在越南林同省大叻市(越南南方)、承天-順化省(越南中部)、廣寧省(越南北方)人工松樹林區(qū)進(jìn)行。調(diào)查的松種為思茅松(P.kesiyaRoyle)、馬尾松(P.massonianaLamb)和南亞松(P.merkusiijungh et de Vries)，樹齡為5～30年。

1.2調(diào)查方法

根據(jù)當(dāng)?shù)厮闪址植继攸c(diǎn)，設(shè)計(jì)具體踏查路線。主要用目測(cè)方法觀察病株的癥狀表現(xiàn)，觀察以下幾個(gè)方面：針葉變色與枯死脫落情況，針葉陸續(xù)變色，由綠色變成黃綠，再變成黃褐，最后變成紅褐色，整株枯死；死樹的針葉在小枝上下垂倒掛，當(dāng)年不脫落；在松樹上人為制造傷口，流脂情況；樹干有無(wú)天牛危害的痕跡，如侵入孔、蛀道、羽化孔等；木質(zhì)部有無(wú)藍(lán)變現(xiàn)象。癥狀觀察記載以后，直接從調(diào)查松樹木質(zhì)部中取一定量的病木樣本帶回實(shí)驗(yàn)室分析[2]。

1.3調(diào)查時(shí)間

林間調(diào)查時(shí)間為2012年09月23日至2012年10月01日和2013年5月15日至2013年6月1日。兩次調(diào)查共從林同省、承天-順化省和廣寧省的松林中抽取思茅松、馬尾松、南亞松等感病松樹樣品52份。其中，枯死松樹樣品46份，瀕死松樹樣品3份，外觀健康松樹3份。

1.4線蟲分離和種類鑒定

將采集的樣品用貝爾曼漏斗法分離線蟲。用FG固定液(40%的甲醛∶純甘油∶蒸餾水=10∶1∶89)進(jìn)行固定保存，在線蟲懸浮液中加等量的濃度雙倍的固定液即可。放入冰箱或室溫自然。線蟲殺死后應(yīng)馬上固定，防止變形和變質(zhì)，并制成臨時(shí)玻片標(biāo)本。利用光學(xué)顯微鏡(Leica DM LB2)觀察線蟲的形態(tài)特征。形態(tài)特征測(cè)計(jì)采用De Man公式。然后，根據(jù)線蟲的形態(tài)特征描述(質(zhì)量特征)和形態(tài)特征測(cè)計(jì)值(數(shù)量特征)，并參考謝輝的植物線蟲分類系統(tǒng)進(jìn)行線蟲種類鑒定。

線蟲形態(tài)數(shù)據(jù)的測(cè)量包括以下值：n-測(cè)計(jì)的標(biāo)本數(shù)；L-體長(zhǎng)；a-體長(zhǎng)/最大體寬；b-體長(zhǎng)/體前端至食道與腸連接處的距離；c-體長(zhǎng)/尾長(zhǎng)；V-體前端至陰門的距離x100/體長(zhǎng)；St-口針長(zhǎng)度；Sp-交合刺長(zhǎng)度[3]。

2 結(jié)果與分析

2.1針葉變色及脫落情況

松樹感病后，病害癥狀的出現(xiàn)：樹冠部分針葉失去光澤，針葉褪綠變黃進(jìn)而褐紅干枯，全株開(kāi)始枯死，最后整個(gè)樹冠變?yōu)楹稚蚣t褐色，全株枯死，針葉下垂且當(dāng)年不落。

在林同省，發(fā)病時(shí)間多在每年5—11月份，雨季初開(kāi)始發(fā)病(從5月到10月為雨季)，旱季時(shí)候發(fā)病很明顯(11月至次年4月為旱季)。

2.2病樹流脂情況

調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，健康松樹上割開(kāi)傷口，流脂量較大；松樹表現(xiàn)出萎蔫癥狀后，樹脂分泌減少。松樹感病后外部癥狀和松脂分泌關(guān)系如下：松樹針葉開(kāi)始枯死下垂還有松脂分泌，隨著癥狀發(fā)展，樹脂分泌逐漸減少，只有到整株針葉發(fā)黃到紅褐干枯，松脂才停止分泌。因此，用刀刮去部分樹皮，觀察松脂流出情況，初步判別健康樹和疑似罹病樹。對(duì)疑似罹病樹進(jìn)行取樣分離鏡檢，確認(rèn)是否有線蟲。

2.3病樹天?？毯奂澳静乃{(lán)變情況

在林間病樹上能觀察到天牛產(chǎn)卵刻痕，只是由于松樹木較高，有時(shí)天?？毯鄄灰装l(fā)現(xiàn)。

圖1 松樹上天?？毯跢ig.1 Scaring the surface of the sapwood

圖2 松枝上天牛蛀道Fig.2 Larval feeding damage on surface of sapwood and tunnel

通過(guò)剝離樹皮，能觀察到天牛幼蟲或其他昆蟲侵害，多數(shù)看見(jiàn)天牛幼蟲與蛀洞，有木屑從蛀洞排出。由于沒(méi)有對(duì)采集的天牛幼蟲進(jìn)行飼養(yǎng)和鑒定，所以不知道什么種類的天牛。

在林間病樹上，不一定都能觀察到木材藍(lán)變現(xiàn)象，一般在松樹感病初期，藍(lán)變現(xiàn)象不明顯，隨著感病時(shí)間的推后，藍(lán)變隨之顯現(xiàn)。

2.4樣品采集情況

采樣地點(diǎn)包括林同省(越南南方)、承天-順化省(越南中部)和廣寧省(越南北方)等越南松樹線蟲病疫區(qū)的3個(gè)省(區(qū))的松林中。共計(jì)收集松木樣品52份。其中林同省松木樣品33份，承天-順化省10份，廣寧省9份。

采樣樹種包括馬尾松、思茅松、南亞松。其中馬尾松11份，思茅松35份，南亞松6份。

采樣時(shí)重點(diǎn)收集枯死松樹，兼有部分瀕死松樹以及少量健康松樹。52份樣品中，枯死松樹樣品46份，瀕死松樹樣品3份，外觀健康松樹3份。采集地點(diǎn)詳細(xì)信息見(jiàn)表1。

圖3 松木內(nèi)的天牛幼蟲

2.5線蟲的形態(tài)描述和種類鑒定

全部52份松木樣品中，線蟲分離情況見(jiàn)表2。

由表2可知，從林同省、承天-順化省和廣寧省采集的52份松樹樣品中，有46份樣品分離到線蟲，線蟲分離比例為88.5%。其中枯死木、瀕死木、健木樣品線蟲的分離比例分別為93%，66.7%，33.3%。思茅松枯死木、瀕死木、健木樣品線蟲分離比例分別為88.6%，66.7%和33.3%。馬尾松樣品線蟲分離比例為90，9%。南亞松樣品線蟲分離比例為83.3%。

圖4 松木藍(lán)變現(xiàn)象

表1 采樣地點(diǎn)及采樣樹種情況總表Tab 1 Samplingsitesandspeciesofpine序號(hào)采樣地點(diǎn)采樣數(shù)量合計(jì)樹種采樣樹木健康狀況馬尾松思茅松南亞松枯死木瀕死木健木1林同省333327332承天-順化省10424103廣寧省9729合計(jì)52113564633

表2 線蟲分離情況統(tǒng)計(jì)結(jié)果Tab 2 Statisticalresultofnematodefromdifferentpine松樹種類枯死木瀕死木健木合計(jì)合計(jì)取樣株數(shù)463352分離線蟲株數(shù)432146線蟲分離比例(%)9366 733 388 5馬尾松取樣株數(shù)110011分離線蟲株數(shù)1010線蟲分離比例(%)90 990 9思茅松取樣株數(shù)293335分離線蟲株數(shù)282131線蟲分離比例(%)88 666 733 388 6南亞松取樣株數(shù)6006分離線蟲株數(shù)55線蟲分離比例(%)83 383 3

泰國(guó)傘滑刃線蟲(BursaphelenchusthailandaeBrassch & Brassch～Bidasak，2002)。泰國(guó)傘滑刃線蟲屬滑刃目(Aphelenchidae)，滑刃總科(Aph-elenchoidoidea)，滑刃科(Aphelenchoidae)，傘滑刃亞科(Bursaphelenchinae)，傘滑刃屬(Bursaphelenchus)[4]。調(diào)查中發(fā)現(xiàn)該線蟲分布于林同省、承天-順化省、廣寧??；寄主為馬尾松、思茅松、南亞松等。

光學(xué)顯微鏡觀察形態(tài)描述如下：

雄蟲：熱殺死后尾部向腹面彎曲，呈“J”形。唇區(qū)縊縮?？卺橀L(zhǎng)度中等，基部略膨大。中食道球長(zhǎng)卵圓形。交合刺中等大小，彎曲明顯成弓形，背面輕微彎曲，喙突前端較鈍圓，基頂發(fā)達(dá)。交合刺遠(yuǎn)端寬而鈍，末端無(wú)盤狀突。交合刺有一特殊部位對(duì)著喙突，在光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)背肢的一半比其余部分黑。尾部向腹面彎曲成爪狀，末端尖細(xì)。

雌蟲：體前端結(jié)構(gòu)與雄蟲相似。雌蟲蟲體較纖細(xì)，中等大小。線蟲經(jīng)緩慢加熱殺死后稍向腹面彎曲。頭體交界處縊縮明顯，唇區(qū)高。口針較小，一般長(zhǎng)14 μm左右，針錐細(xì)尖，無(wú)口針基部球，基部微膨大。中食道球長(zhǎng)橢圓形。陰門開(kāi)口位于蟲體中后部，陰門唇明顯突起，無(wú)陰門蓋。尾部細(xì)長(zhǎng)，錐形，末端尖。

線蟲測(cè)量值：主要形態(tài)特征的測(cè)量值與文獻(xiàn)的比較見(jiàn)表3。

表3 泰國(guó)傘滑刃線蟲越南蟲株與標(biāo)準(zhǔn)株的形態(tài)值比較Tab 3 MorphometricscomparisonofB thailandaefromVietnamwithlectotypes形態(tài)指標(biāo)越南截獲泰國(guó)傘滑刃線蟲[4]雄蟲雌蟲雄蟲雌蟲n(條)1010106L(μm)715～903768～1102435～720640～820a26 5～39 132～37 729～4636～41b8 3～12 48 3～13 66 9～9 38 7～13 0c23 6～34 522 8～36 722～3722～37V(%)72～7572～73St(μm)12 5～16 312 8～1511～1512～13Tail(μm)29 1～34 630 2～58 217～2550～65Sp(μm)14 2～18 312～17

A:雄蟲整體; B: 雌蟲整體，活蟲體態(tài); C: 雌蟲頭部和中食道球; D: 雌蟲尾部E: 陰門( 箭頭所指部位為陰門) ; F: 雄蟲尾部及交合刺側(cè)面觀( 箭頭指示交合刺位置) ;

A.雌蟲 B.雄蟲 C.頭部 D.雌蟲尾部 E.陰門 F.側(cè)線 G.交合刺 H.雄蟲尾部及交合刺 I.交合刺腹面觀 J.交合傘(仿Brassch & Brassch-Bidasak，2002)[4]圖6 泰國(guó)傘滑刃線蟲Fig.6 B.thailandae Brassch & Brassch-Bidasak

A.頭部；B.陰門；C.肛門，箭頭所指部位為肛門

3 結(jié)論與討論

本文針對(duì)在越南許多地方發(fā)現(xiàn)大量不明原因枯死松樹這一現(xiàn)象，收集來(lái)自3個(gè)省份的枯死松樹、瀕死松樹以及少量外觀健康松樹樣品共計(jì)52份。對(duì)松樹體內(nèi)的寄生線蟲的種類進(jìn)行了分離鑒定，有46份樣品分離到線蟲，線蟲分離比例為88.5%。其中枯死木、瀕死木、健木樣品線蟲的分離比例分別為93.5%、66.7%、33.3%。思茅松枯死木、瀕死木、健木樣品線蟲分離比例為96.5%、66.7%和33.3%。馬尾松樣品線蟲分離比例為90.9%。南亞松樣品線蟲分離比例為83.3%。首次發(fā)現(xiàn)在越南枯死的松樹木材里有1種傘滑刃屬寄生線蟲：泰國(guó)傘滑刃線蟲(BursaphelenchusthailandaeB.)。這1種線蟲為從越南松木上首次報(bào)道。

通過(guò)調(diào)查，在越南人工松樹林區(qū)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)松材線蟲，但不能對(duì)其放松警惕，越南具備松材線蟲萎蔫病的發(fā)病因素。思茅松、馬尾松、南亞松是越南主要用材樹種，其中思茅松是林同省優(yōu)良樹種，大面積思茅松人工林在森林資源中占有重要的地位。馬尾松、思茅松和南亞松對(duì)松材線蟲具有高度敏感性。越南自然氣候條件復(fù)雜多樣，年平均溫度22～27 ℃，適合松材線蟲的生長(zhǎng)發(fā)育。松材線蟲的重要轉(zhuǎn)播介體一松墨天牛(Monochamusalternatus)廣泛分布。從越南外調(diào)運(yùn)木材，進(jìn)口貨物包袋箱等又會(huì)擴(kuò)大線蟲的傳播途徑。因此，一定要加強(qiáng)監(jiān)測(cè)和檢疫，杜絕其傳入越南，防患于未然。

由于現(xiàn)場(chǎng)取樣調(diào)查路程遠(yuǎn)，調(diào)查時(shí)間短，范圍有限(3個(gè)省)，所以試驗(yàn)樣品數(shù)量不多，樣品調(diào)查僅具代表性。本文在對(duì)松樹寄生線蟲人工培養(yǎng)過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)有一定比例的松樹寄生線蟲不能夠在灰葡萄孢PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，以至于不能夠?qū)⑦@部分線蟲鑒定到種。在以后的研究中，松樹寄生線蟲的人工培養(yǎng)是一個(gè)值得探討的問(wèn)題。

[1] Pham Quang Thu，Okiomi Yamane.Bênh tuyn trùng hai thng ba lá(PinuskesiyaRoyle)，nguyên nhan và gii pháp phòng trù，2004.

[2] 葉建仁.松材線蟲病診斷與防治技術(shù)[M].北京：中國(guó)林業(yè)出版社，2010.

[3] 謝輝.植物線蟲分類學(xué)[M].北京：高等教育出版社，2005.

[4] 顧劍鋒，王江嶺.傘滑刃屬線蟲形態(tài)和分子鑒定[M].廈門：廈門大學(xué)出版社，2011.

NematodesspeciessurveyandidentificationinthepinewoodinVietnam

Nguyen Thanh Tuan1，2， Le Bao Thanh2， YAN Xuewu3*

(1.College of Forest Resources and Environment of Nanjing Forest University， Nanjing 210037， China；2.College of Forest Resources and Environment of Vietnam Forest University， Hanoi 100803， Vietnam；3.Hunan Academy of Forestry， Changsha 410004， China)

Pine wilt desease has caused great damage to the forestry and ecological system.It became the most destructive threat to pine wood production，and it has been regarded as important inspection object.This reseach takes nematodes as materials which were atained from blasted pines in Viet Nam country，because a lot of pines were dead for unknown reasons in many parts of Viet Nam country.The morphological identification of the nematode were conducted.A survey of nematodes on pine wood was conducted in Viet Nam country(Lam Dong province，Thua Thien Hue province，Quang Ninh province)from september 2012 to june 2013.Collect 52 samples from 3 provinces.These samples were taken from dead，dying and exterior healthy pines.We separated and cultured nematodes gained from blasted pines；measured and calculated the numerical value of V，a，b and so on；and described modality.Parasitic nematodes on pine were also identified.The results showed that one species of the genusBursaphelenchuswere identified asB.thailandae.They were isolated from new hosts，Kesiya pine(P.kesiyaR.)，Massoniana pine(P.massonianaL.)，Merkusii pine(P.merkusiiJ.)，respectively.Bursaphelenchusxylophiluswas not found so far in Vietnam country，whileBursaphelenchusdistributed widely in 3 provinces in Vietnam.Nematodes were isolated from 46 samples in 52 samples of pine trees.Nematode isolated ratio was 88.5%.The isolated ratio of dead，dying and healthy pine samples were 93.5%，66.7% and 33.3% respectively.The isolated ratio of dead，dying and healthyP.kesiyasamples were 96.5%，66.7% and 33.3% respectively.The isolated ratio ofP.massonianasamples was 90.9%.The isolated ratio ofP.merkusiisamples was 83.3%.This is the first report about nematodes on pine wood distribution in Viet Nam.

Vietnam； pine； pine parasite nematode； nematode identification

2015-12-23

Nguyen Thanh Tuan(1977-)，男，講師，研究方向?yàn)樯植±怼?/p>

*為通訊作者。

S 791.24

A

1003-5710(2016)01-0006-06

10.3969/j.issn.1003-5710.2016.01.000

(文字編校：張 珉)

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