尹小勇，文先杰，馮國(guó)良，郭小亮，馮超群，李學(xué)輪

(1.順德均安醫(yī)院麻醉科，廣東佛山528329；2.佛山市第一人民醫(yī)院麻醉科)

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右美托咪啶對(duì)失血性休克大鼠血清IL-6、IL-10及TNF-α水平的影響*

尹小勇1，文先杰2，馮國(guó)良1，郭小亮1，馮超群1，李學(xué)輪1

(1.順德均安醫(yī)院麻醉科，廣東佛山528329；2.佛山市第一人民醫(yī)院麻醉科)

目的：觀察右美托咪啶對(duì)失血性休克大鼠血清腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白細(xì)胞介素-10(interleukin-10,IL-10)水平的影響，探討右美托咪啶對(duì)失血性休克大鼠炎癥反應(yīng)的影響。方法：雄性SD大鼠32只，體重220～240 mg，隨機(jī)分為4組，每組8只，分別為假手術(shù)組(S組)，模型組(M組)，生理鹽水組(NS組)和右美托咪啶組(D組)。D組大鼠在大鼠休克模型制備前腹腔注射右美托咪啶30 μg/kg(2 μg/mL)，NS組大鼠則注射等容積的生理鹽水。在模型制備前(T1)、準(zhǔn)備放血前即刻(T2)、液體復(fù)蘇前即刻(T3)、液體復(fù)蘇結(jié)束即刻(T4)及液體復(fù)蘇結(jié)束后120 min分別取股靜脈血2 mL，采用ELISA法檢測(cè)血漿中TNF-α、IL-6、IL-10的表達(dá)。結(jié)果：與T1比較，M組、NS組、D組大鼠血清IL-6、IL-10、TNF-α的含量在T3、T4、T5時(shí)間點(diǎn)含量升高(P<0.05)；與S組比較，M組、NS組、D組大鼠血清IL-6、TNF-α在T3、T4、T5時(shí)間點(diǎn)含量升高(P<0.05)；與NS組比較，D組大鼠血清IL-6、TNF-α含量在T3、T4、T5時(shí)間點(diǎn)含量降低(P<0.05)、IL-10含量增加(P<0.05)。結(jié)論：腹腔注射右美托咪啶可以抑制IL-6和TNF-α的表達(dá)，增加抗炎因子IL-10的表達(dá)，改善失血性休克大鼠炎癥反應(yīng)。

失血性休克；大鼠；炎癥反應(yīng)；IL-6；TNF-α；IL-10

失血性休克是臨床上最常見(jiàn)的休克類型，常需要緊急搶救，尤其是創(chuàng)傷出血性休克，常需要手術(shù)治療。炎性因子包括腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)等致炎因子和白細(xì)胞介素-10 (interleukin-10,IL-10)等抗炎因子，正常情況下機(jī)體維持致炎因子和抗炎因子的動(dòng)態(tài)平衡。右美托咪啶對(duì)失血性休克大鼠血清IL-6、IL-10及TNF-α水平有何影響目前尚不清楚。本研究通過(guò)建立大鼠失血性休克模型，觀察右美托咪啶對(duì)失血性休克大鼠血清IL-6、IL-10及TNF-α水平的影響，探討右美托咪啶對(duì)失血性休克大鼠炎癥反應(yīng)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 雄性SD大鼠32只，體重220～240 mg(廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，隨機(jī)分為4組，每組8只，分別為假手術(shù)組(S組)，模型組(M組)，生理鹽水組(NS組)和右美托咪啶組(D組)。

1.2 方法 大鼠術(shù)前禁食12 h，自由飲水，腹腔注射1 %戊巴比妥納(40 mg/kg)，待動(dòng)物麻醉后，仰臥位固定于大鼠手術(shù)臺(tái)上，用電熱毯保持直腸溫(36.3±0.5)℃，暴露右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈并置管(22 G動(dòng)脈穿刺針)，連續(xù)監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈壓(mean arterial pressure,MAP)、心率(heart rate,HR)，暴露右側(cè)股動(dòng)脈、股靜脈并置管，分別用于抽取血液和液體會(huì)輸，所有手術(shù)均嚴(yán)格無(wú)菌操作，操作完成后穩(wěn)定30 min，假手術(shù)組僅暴露股動(dòng)靜脈而不置管進(jìn)行放血，模型組則由股靜脈緩慢抽取血液2 mL/(kg·min),加肝素保存用于回輸，繼續(xù)抽取或回輸血液使MAP穩(wěn)定在40 mmHg左右60 min后進(jìn)行液體復(fù)蘇120 min，復(fù)蘇時(shí)用自體血全部回輸并追加輸入乳酸林格式液維持MAP在80～100 mmHg。D組大鼠在大鼠休克模型制備前腹腔注射右美托咪啶(批號(hào)：14061032，江蘇新晨醫(yī)藥有限公司)30 μg/kg(2 μg/mL)。NS組大鼠則注射等容積的生理鹽水。

1.3 檢測(cè)指標(biāo) 在模型制備前(T1)、準(zhǔn)備放血前即刻(T2)、液體復(fù)蘇前即刻(T3)、液體復(fù)蘇結(jié)束即刻(T4)及液體復(fù)蘇結(jié)束后120 min分別取股靜脈血2 mL放入抗凝管中混勻，于-80度冰箱保存?zhèn)溆?，按照試劑說(shuō)明書提供的方法和步驟，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)法檢測(cè)血漿中TNF-α、IL-6、IL-10的表達(dá)。ELISA試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物有限公司。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組內(nèi)比較采用t檢驗(yàn)，組間比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠IL-6含量的表達(dá) 與T1比較，M組、NS組、D組大鼠血清IL-6的含量在T3、T4、T5時(shí)間點(diǎn)含量升高(P<0.05)。與S組比較，M組、NS組和D組大鼠血清IL-6在T3、T4、T5等時(shí)間點(diǎn)含量升高(P<0.05)。與NS組比較，D組大鼠血清IL-6含量在T3、T4、T5時(shí)間點(diǎn)含量降低(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 大鼠各時(shí)點(diǎn)血漿IL-6含量比較(x±s，n=8，pg/mL)

2.2 各組大鼠IL-10含量的表達(dá) 與T1比較，M組、NS組、D組大鼠血清IL-10的含量在T3、T4、T5時(shí)間點(diǎn)含量升高(P<0.05)；與S組比較，M組、NS組和D組大鼠血清IL-10在T3、T4、T5時(shí)間點(diǎn)含量升高(P<0.05)；與NS組比較，D組大鼠血清IL-10含量在T3、T4、T5時(shí)間點(diǎn)含量升高(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 大鼠各時(shí)點(diǎn)血漿IL-10的

2.3 各組大鼠TNF-α含量的表達(dá) 與T1比較，M組、NS組、D組大鼠血清TNF-α的含量在T3、T4、T5時(shí)間點(diǎn)含量升高(P<0.05)；與S組比較，M組、NS組和D組大鼠血清TNF-α在T3、T4、T5時(shí)間點(diǎn)含量升高(P<0.05)；與NS組比較，D組大鼠血清TNF-α含量在T3、T4、T5時(shí)間點(diǎn)含量降低(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 大鼠各時(shí)點(diǎn)血漿TNF-α

3 討論

失血性休克所致的全身炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致多器官功能障礙綜合征發(fā)生發(fā)展的重要原因。大量失血后，交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)興奮，兒茶酚胺釋放增多，引起肺內(nèi)局部的炎癥反應(yīng)增強(qiáng)。根據(jù)細(xì)胞因子在炎性反應(yīng)中的不同作用分為促炎性細(xì)胞因子和抗炎性細(xì)胞因子。休克所致的炎癥反應(yīng)實(shí)際上是促炎性細(xì)胞因子和抗炎性細(xì)胞因子失衡[1]。促炎性細(xì)胞因子主要包括TNF、IL-1、干擾素γ(interferon-γ,IFN-γ)、IL-6、IL-8等，與炎癥的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)?？寡仔约?xì)胞因子主要包括IL-4、IL-10等，有拮抗炎性介質(zhì)的作用,抑制炎癥的發(fā)展加劇。TNF-α是炎癥早期最主要前炎性因子。在炎性反應(yīng)初期，TNF-α除能動(dòng)員血循環(huán)中的中性粒細(xì)胞向炎癥部位聚集外，還能動(dòng)員骨髓白細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)，同時(shí)激活內(nèi)皮細(xì)胞。內(nèi)皮細(xì)胞受TNF-α刺激時(shí)，釋放E-選擇素、L-選擇素、細(xì)胞間黏附分子1(intercellular adhesion molecule，ICAM-1)等黏附因子，進(jìn)一步誘導(dǎo)IL-6等細(xì)胞因子的分泌，共同參與炎性反應(yīng)。

研究表明，右美托咪啶可抑制TNF-α誘導(dǎo)的ICAM-1表達(dá)上調(diào)，抑制炎性反應(yīng)，阻斷炎性細(xì)胞對(duì)血管內(nèi)皮黏附的直接損傷作用[2，3]。同時(shí)，右美托咪啶抑制TNF-α誘導(dǎo)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB p65的表達(dá)，抑制其與ICAM-1啟動(dòng)子結(jié)合，降低ICAM-1的表達(dá)水平,進(jìn)一步抑制炎癥反應(yīng)。一項(xiàng)臨床研究表明，手術(shù)創(chuàng)傷應(yīng)激可直接或間接地引起TNF-α合成及釋放增加，大量的TNF-α進(jìn)入血流，可引起全身炎癥反應(yīng)。右美托咪啶能抑制手術(shù)創(chuàng)傷所致的血清TNF-α、IL-6的至炎因子的增加，對(duì)抗炎因子IL-10的釋放也有一定的抑制作用。本研究結(jié)果表明，失血性休克大鼠腹腔注射右美托咪啶可以抑制IL-6和TNF-α的表達(dá)，增加抗炎因子IL-10的表達(dá)，提示右美托咪啶可以抑制失血性休克大鼠炎癥反應(yīng)的發(fā)生。

綜上所述，腹腔注射右美托咪啶可以抑制IL-6和TNF-α的表達(dá)，增加抗炎因子IL-10的表達(dá)，改善失血性休克大鼠的炎癥反應(yīng)。

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佛山市衛(wèi)計(jì)委醫(yī)學(xué)科研項(xiàng)目(2015045)

文先杰

2016-01-30)