張益明++趙茂森　朱仁武　顧葉春

[摘要] 目的 探討存活素（Survivin）、神經纖維網蛋白1（NRP1）在胃癌中的表達及其對胃癌預后的影響。 方法 應用免疫組化法測定60例胃癌組織及60例正常胃黏膜組織中Survivin、NRP1表達情況，應用Kaplan-Meier計算Survivin陽性、NRP1陽性患者5年生存率，以Cox風險模型分析影響胃癌患者預后的危險因素。 結果 胃癌組織中Survivin陽性表達率為86.67%，NRP1陽性表達率為83.33%，而在胃正常黏膜組織中的表達分別為6.67%、5.00%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。Survivin陽性表達率與TNM分期、累及漿膜層、浸潤深度、淋巴結轉移有關（P<0.05）。NRP1陽性表達率與TNM分期、浸潤深度及淋巴結轉移有關（P<0.05）。60例胃癌患者術后隨訪5年，共56例獲得隨訪，5年存活為25例，5年存活率為44.64%，其中Survivin陽性存活率35.42%（17/56），NRP1陽性存活率為32.61%（15/56）。經Cox風險分析可知，Survivin陽性、NRP1陽性是影響胃癌預后的獨立危險因素。 結論Survivin、NRP1可能與胃癌發(fā)生及進展相關。Survivin、NRP1表達狀態(tài)是胃癌預后的獨立預測因素，其陽性表達可提示患者預后不良。

[關鍵詞] 存活素；神經纖維網蛋白；胃癌；預后

[中圖分類號] R735.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2016）25-0008-04

The impact of Survivin， NRP1 in gastric cancer and its prognosis of gastric cancer

ZHANG Yiming ZHAO Maosen ZHU Renwu GU Yechun

Department of General Surgery， Wenzhou Hospital of Interated Traditional Chinese and Werstern Medicine in Zhejiang Province， Wenzhou 325001， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of Survivin， nerve fiber web protein 1（NRP1）in gastric and its impact on the prognosis of gastric. Methods The Survivin， NRP1 of 60 cases of gastric cancer and 60 cases of normal gastric mucosa were detected with immunohistochemistry method. The 5-year survival rate of Survivin positive， NRP1 positive were applicated with Kaplan-Meier.The risk factors of patients with gastric cancer were analyzed with Cox hazard regression model. Results Survivin expression in gastric cancer was 86.67%， NRP1 positive rate was 83.33%， while expression in normal gastric mucosa were 6.67%， 5.00%（P<0.05）. Survivin expression rate was related with TNM stage， involving the serosa， depth of invasion and lymph node metastasis（P<0.05）. NRP1 positive expression rate was related with TNM stage， depth of invasion and lymph node metastasis（P<0.05）. 60 gastric cancer patients were followed up for 5 years， 56 patients were followed up， 5-year survival of 25 cases， 5-year survival rate was 44.64%， which Survivin positive survival rate 35.42%（17/56）， NRP1 positive survival rate was 32.61%（15/56）. Survivin positive， NRP1 positives were independent risk factors for gastric cancer prognosis with Cox risk analysis. Conclusion Survivin， NRP1 may occur with gastric cancer and related progress. Survivin， NRP1 expression status is an independent predictor of prognosis of gastric cancer， and its expression may indicate a poor prognosis.

[Key words] Survivin； Neuropil protein； Gastric cancer； Prognosis

胃癌的死亡率居我國惡性腫瘤的首位，癌細胞侵襲及轉移是導致胃癌死亡的重要因素之一，因此對影響胃癌侵襲及轉移的相關因素進行分析對預測胃癌預后具有重要的意義[1-2]。近年來研究指出[3]，通過檢測胃癌相關蛋白凋亡及表達情況對預測胃癌侵襲及轉移具有一定的作用。存活素（Survivin）屬凋亡抑制因子IAPs家族中一員，具有廣譜惡性腫瘤表達特效。Survivin蛋白表達與多種惡性腫瘤侵襲、轉移及預后有關[4-5]。神經纖維網蛋白1（NRP1）是血管內皮生長因子（VEGF）新型的受體，在多種惡性腫瘤細胞中均為高表達，且參與惡性腫瘤發(fā)生及進展過程[6-7]。本研究應用免疫組織化學法檢測胃癌組織Survivin、NRP1表達情況，并結合臨床病理特征，探討Survivin、NRP1表達與胃癌侵襲、轉移及預后的關系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集2010年6月～2011年6月本院普外科胃癌根治手術60例患者的臨床資料，患者術前均未接受過放化療治療，其中男35例，女25例，年齡48～74歲，平均（56.8±2.2）歲。腫瘤直徑< 5 cm 22例，≥5 cm 38例，累及漿膜層 35例，低分化腺癌30例，中高分化腺癌30例。TNM分期：Ⅰ期 20例，Ⅱ期18例，Ⅲ期 14例，Ⅳ期 8例。淋巴結轉移28例，無淋巴結轉移 32例。腫瘤浸潤：T1～T2 32例，T3 28例。病理組織的臨床分類參照WHO胃癌臨床病理學分類，每份病理標本均留取腫瘤組織及距腫瘤5 cm以上的正常胃黏膜組織，病理組織離體后迅速將其置于液氮中保存以便行病理組織學分析。

1.2 免疫組織化學法

應用免疫組化法測定Survivin、NRP1蛋白表達，Survivin鼠抗人單克隆抗體購于Sigma公司，NRP1鼠抗人單克隆抗體購于NeoMarkers公司，Survivin試劑盒購于上海酶聯(lián)實業(yè)有限公司，NRP1試劑盒購于上海鈺博生物科技有限公司。染色步驟具體如下：將胃癌組織及正常胃黏膜組織標本蠟塊切成4 μm厚切片，常溫下乙醇梯度脫水，二甲苯脫蠟，應用3%過氧化氫滅活內源性過氧化物酶，采用0.01 mol/L磷酸緩沖液沖洗標本2次，常溫下應用正常羊血清工作液封閉樣本10 min，依次加入Survivin鼠抗人單克隆抗體及NRP1鼠抗人單克隆抗體，采用磷酸緩沖液沖洗標本2次，加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉素工作液，于37℃恒溫培養(yǎng)箱中（型號：DNP-9022；上海精宏實驗設備有限公司）孵育25 min，經磷酸緩沖液沖洗后，經DAB染色，蘇木素復染，采用中性樹膠封固。

結果判定參考相關文獻[8]：胞漿內呈現(xiàn)棕黃色為Survivin陽性，呈現(xiàn)紅褐色熒光為NRP1陽性。根據(jù)染色深度及染色面積進行計分，Survivin染色深度評分：0分為無顯色或顯色不清，1分為淺黃色，2分為深黃色，3分為褐黃色。染色面積：0分：0%～5%，1分：>5%～35%，2分：>35%～65%，3分：>65%。染色深度與面積之和≥1分則為Survivin免疫組化法染色陽性。NRP1染色深度評分：0分為無顯色或顯色不清，1分為淺紅色，2分為深紅色，3分為紅褐色。染色面積：0分：0%～5%，1分：>5%～35%，2分：>35%～65%，3分：>65%。染色深度與面積之和≥1分則為NRP1免疫組化法染色陽性。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS19.0對數(shù)據(jù)進行分析，計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用率表示，采用χ2檢驗，應用Kaplan-Meier計算生存率，影響胃癌術后預后的危險因素應用Cox回歸分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 Survivin、NRP1在胃癌組織及正常胃黏膜組織中的表達

胃癌組織中Survivin陽性表達率為86.67%，NRP1陽性表達率為83.33%，而在胃正常黏膜組織中的表達分別為6.67%、5.00%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

2.2 Survivin、NRP1表達與胃癌組織臨床特征的關系

Survivin陽性表達率與TNM分期、累及漿膜層、浸潤深度、淋巴結轉移有關（P<0.05）。NRP1陽性表達率與TNM分期、浸潤深度及淋巴結轉移有關（P<0.05）。

2.3 Survivin、NRP1陽性患者預后因素分析

60例胃癌患者術后隨訪5年，共56例獲得隨訪，5年存活為25例，5年存活率為44.64%，其中Survivin陽性存活率35.42%（17/56），NRP1陽性存活率32.61%（15/56）。腫瘤直徑、累及漿膜層、浸潤深度、TNM分期、淋巴結轉移、Survivin陽性、NRP1陽性與胃癌5年生存率顯著相關（P<0.05）。

2.4 影響胃癌術后生存率的Cox多因素分析

經Cox多因素分析，患者臨床分期、淋巴結轉移、Survivin陽性、NRP1陽性是影響胃癌遠期預后的獨立危險因素。

3 討論

Survivin是目前發(fā)現(xiàn)最強的凋亡抑制因子，具有調節(jié)細胞有絲分裂及抑制細胞凋亡的雙重作用。大量研究發(fā)現(xiàn)[9-12]，Survivin與惡性腫瘤發(fā)生及進展有密切的關系，Survivin不僅能抑制凋亡蛋白酶活性，阻斷凋亡信號傳導，而且能在細胞有絲分裂前期特異性結合紡錘體微管導致腫瘤細胞異常分裂及增殖。孫娟等[13]研究指出Survivin在所有能被檢測的惡性腫瘤組織中均有不同程度的表達，且與多種腫瘤生物學特征有密切的關系。Cheng等[14]研究指出，Survivin在胃癌組織中陽性表達率為85.2%，且Survivin陽性表達與胃癌侵襲、轉移及淋巴管浸潤有密切的關系。本研究應用免疫組化法測定胃癌組織中Survivin表達情況，結果顯示，60例胃癌組織患者中Survivin陽性表達率為86.67%，而在胃正常黏膜組織中的表達分別為6.67%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），且Survivin陽性表達率與TNM分期、累及漿膜層、浸潤深度、淋巴結轉移有關，因此通過檢測胃癌組織中Survivin表達能有效判斷胃癌發(fā)生及進展情況。本研究發(fā)現(xiàn)，Survivin表達與臨床分期、淋巴結轉移等傳統(tǒng)病理學指標一樣，是影響胃癌術后5年生存率的獨立危險因素，因此，作為TNM及淋巴結轉移的補充，可將Survivin陽性表達作為判斷胃癌預后的有價值指標之一。

NRP1在腫瘤發(fā)生及病情進展中的作用機制非常復雜[15]。Shahrabi等[16]發(fā)現(xiàn)NRP1除了在腫瘤細胞中表達外，還可在血管內皮細胞中表達，從而提示NRP1可能在這兩個位置發(fā)揮作用。在內皮細胞中，NRP1作為受體，可與VEGF結合，并增加其活性，從而增強VEGF誘導血管內皮細胞有絲分裂及細胞趨化性，進而促進腫瘤血管生成[17]。研究發(fā)現(xiàn)[18]，部分腫瘤細胞中無VEGF表達，因此NRP1在腫瘤細胞中可通過信號傳導途徑或與VEGF結合形成相關配體從而實現(xiàn)腫瘤的侵襲及轉移過程。Talagas等[19]也發(fā)現(xiàn)，非小細胞肺癌患者腫瘤細胞中NRP1可通過調控P13K/AKT信號通路及上調VEGF表達水平等途徑同時影響肺癌的遠期預后。Shahrabi等[20]研究指出，NRP1表達與腫瘤細胞微血管生成及VEGF表達水平上調有密切的關系。本研究結果顯示，正常胃黏膜組織中NRP1水平顯著低于胃癌組織，NRP1水平與胃癌NRP1mRNA表達量與淋巴結轉移、TNM分期等臨床特征有關，表明NRP1高表達水平可促進腫瘤微血管生成并與胃癌侵襲及轉移等生物學行為關系密切，通過測定胃癌組織中NRP1表達可判斷胃癌侵襲性及轉移性。此外，本研究經Cox風險模型分析顯示，NRP1陽性表達是影響胃癌患者術后預后的獨立危險因子，可作為評價胃癌病情發(fā)生、進展及預后的預測指標。

綜上所述，Survivin、NRP1可能與胃癌發(fā)生及進展密切相關。Survivin、NRP1表達狀態(tài)是胃癌預后的獨立預測因素，其陽性表達可提示患者預后不良。

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（收稿日期：2016-07-01）