劉杰+郭盛+段金廒+嚴(yán)輝+錢(qián)大瑋+唐海濤+唐仁茂

[摘要]對(duì)錦葵科植物黃蜀葵Abelmoschus manihot采收藥用部位花冠過(guò)程中產(chǎn)生的不同組織器官（根、莖、葉和花）中的主要資源性化學(xué)成分進(jìn)行分析評(píng)價(jià)，為其資源化利用提供支撐。分別采用高效液相色譜法（HPLC）、超高效液相色譜串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜法（UPLC-TQ/MS）分析黃蜀葵不同組織器官中黃酮類、核苷類及氨基酸類資源性化學(xué)成分組成及其含量；分別采用紫外-可見(jiàn)分光光度法、粗纖維測(cè)定法（Weende）分析黃蜀葵不同組織器官中可溶性多糖類及總纖維含量。結(jié)果顯示，黃蜀葵花中富含黃酮類資源性化學(xué)成分，主要組成為金絲桃苷、異槲皮苷、棉皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷、楊梅素、槲皮素-3′-O-葡萄糖苷、蘆丁和槲皮素，總量為25.450 mg·g^-1，葉片亦有少量黃酮類資源性化學(xué)成分分布。黃蜀葵不同組織器官均富含可溶性多糖類組分和總纖維，其中莖中總多糖量較高，達(dá)19.76%，根中總纖維量較高，可達(dá)29.88%。在黃蜀葵植物中共檢出21種氨基酸類和9種核苷類資源性化學(xué)成分，其中花中氨基酸類化學(xué)成分種類及含量較為豐富，達(dá)4.737 mg·g^-1；葉中核苷類化學(xué)成分含量較為豐富，為1.474 mg·g^-1。黃蜀葵植物中含有豐富的資源性化學(xué)成分，且不同組織器官中所含成分的組成和含量有所差異，研究結(jié)果為黃蜀葵植物采收花后不同組織器官的精細(xì)化利用與產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā)提供了科學(xué)依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]黃蜀葵； 不同組織器官； 資源性化學(xué)成分； 資源化利用

[Abstract]This research is to analyze the resourceful chemical composition in different tissues （root， stem， leaf and flower） of Abelmoschus manihot and evaluate their utilizing value. The flavonoids， soluble polysaccharides， cellulose， nucleosides and amino acids in the different tissues of A. manihot were determined by HPLC coupled with UV-Vis spectrophotpmetry， and UPLC-TQ/MS. The flowers are rich in the resourceful chemical compositions of flavonoids which mainly consist of hyperoside， isoquercitrin， cotton-8-O-glucuronide， myricetin， quercetin-3′-O-glucoside， rutin and quercetin. The total content of these flavonoids is 25.450 mg·g^-1 in the flowers， while they are trace in the other tissues.Different tissues of A. manihot are rich in soluble polysaccharides and celluloses and the stems have the highest content（19.76%） of soluble polysaccharides， while the roots have the highest content （29.88%） of cellulose. Total of 21 amino acids and 9 nucleosides were detected in this plant， and the flowers have the highest content of amino acids（4.737 mg·g^-1）， while the leaves have the highest content of nucleosides （1.474 mg·g^-1）. A. manihot is rich in the resourceful chemical compositions， and its constituents and contents are various in different tissues of this plant.The results provided a scientific basis for the utilization and industrial development of A. manihot plants.

[Key words]Abelmoschus manihot； different organs and tissues； resourceful chemical composition； resourceful utilization

doi：10.4268/cjcmm20162013

黃蜀葵Abelmoschus manihot （L.） Medic.為錦葵科Malvaceae秋葵屬Abelmoschus一年至多年生草本植物，原產(chǎn)于我國(guó)南方地區(qū)，常生于山谷草叢、田邊或溝旁灌叢間，現(xiàn)除西北、東北等地外，全國(guó)大部分地區(qū)均有分布或栽培^[1]。黃蜀葵之干燥花冠為常用中藥，始載于《嘉佑本草》，其后歷代本草多有記述，其味甘性寒，具有清熱利濕、消腫解毒之功，內(nèi)服可用于濕熱壅遏、淋濁水腫等癥的治療，外敷可用于癰疽腫毒、水火燙傷。除其花冠外，其種子、根、莖和葉片也有藥用記載，其功用與花冠相似，但臨床應(yīng)用較少。現(xiàn)代藥理研究表明，黃酮類化學(xué)成分是黃蜀葵花含有的主要活性成分之一，具有保護(hù)肝臟、保護(hù)心腦血管系統(tǒng)及抑制腫瘤細(xì)胞增殖等作用，此外對(duì)慢性腎炎也具有一定的治療作用^[2-4]。另?yè)?jù)文獻(xiàn)報(bào)道，黃蜀葵植物中含有的多糖類^[5]、纖維素類、核苷類及氨基酸類化學(xué)成分均具有潛在的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。

目前，在黃蜀葵資源植物利用過(guò)程中，主要以采摘其花冠用于中醫(yī)臨床或作為中藥制劑黃葵膠囊的主要原料，在此過(guò)程中大量莖、葉、根等組織器官缺乏有效利用途徑而廢棄，造成資源浪費(fèi)與環(huán)境污染。據(jù)此，本研究采用現(xiàn)代分析方法對(duì)黃蜀葵植物在藥材采收過(guò)程中產(chǎn)生的不同組織器官（花、根、莖、葉）中多類型資源性化學(xué)成分（黃酮類、核苷類、氨基酸類、可溶性多糖類及總纖維素）進(jìn)行分析評(píng)價(jià)，以期為黃蜀葵植物資源的精細(xì)化利用提供數(shù)據(jù)支撐^[6]。

1 材料

Waters ACQUITY UPLC系統(tǒng)（包括四元泵溶劑系統(tǒng)，在線脫氣機(jī)和自動(dòng)進(jìn)樣器；Waters公司，Milford，USA）；Xevo TQ 檢測(cè)器（Waters公司）；MassLynxTM質(zhì)譜工作站軟件（Waters公司）；Waters-2695型液相色譜儀（包括四元泵、在線脫氣及自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)、2996型二極管陣列檢測(cè)器；Waters公司，Milford，USA）；UV-2000紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京萊伯泰科儀器有限公司）；FIWE 3/6纖維素測(cè)定儀（北京盈盛恒泰科技有限公司）；Microfuge 22R Centrifuge 離心機(jī)（美國(guó)Beckman Coulter公司）；KQ-500B超聲波清洗機(jī)（功率150 W，昆山市超聲儀器有限公司）；Milli-Q Integral 5 超純水系統(tǒng)（默克密理博公司）；馬弗爐（上海洪紀(jì)儀器設(shè)備公司）；Sartorius BT125D電子分析天平（德國(guó)塞利多斯公司）。

黃酮類化學(xué)對(duì)照品蘆丁、槲皮素購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，楊梅素、異槲皮苷、金絲桃苷、槲皮素-3′-O-葡萄糖苷、棉皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷購(gòu)自阿拉丁試劑公司，純度經(jīng)HPLC測(cè)定均大于98%。

氨基酸類化學(xué)對(duì)照品亮氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸、色氨酸、γ-氨基丁酸、甲硫氨酸、脯氨酸、纈氨酸、?；撬帷⒗野彼?、半胱氨酸、丙氨酸、反式-4-羥基-脯氨酸、蘇氨酸、谷氨酸、賴氨酸、谷氨酰胺、絲氨酸、天冬酰胺、瓜氨酸、精氨酸、組氨酸、鳥(niǎo)氨酸、天冬氨酸均購(gòu)自中國(guó)惠興生化試劑有限公司，純度經(jīng)HPLC測(cè)定均大于98%。

核苷及堿基類化學(xué)對(duì)照品胸腺嘧啶、胸苷、2′-脫氧尿苷、2′-脫氧腺苷、腺嘌呤、次黃嘌呤、2′-脫氧肌苷、胞嘧啶、2′-脫氧腺苷-5′-單磷酸均購(gòu)自Sigma公司，純度經(jīng)HPLC測(cè)定均大于98%。

葡萄糖對(duì)照品購(gòu)自Sigma公司，葡萄糖醛酸對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

乙腈、甲醇、甲酸均為色譜純，購(gòu)自Merck公司（德國(guó)），其他試劑均為分析純，購(gòu)自上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

黃蜀葵植株于2015年9月（花采收期）采自南京中醫(yī)藥大學(xué)藥苑，其原植物經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)段金廒教授鑒定為黃蜀葵A. manihot。樣品采集后，分解成花、根、莖、葉不同部位。以上各樣品采集后，40 ℃干燥，粉碎成粗粉，置干燥器中備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃酮類化學(xué)成分的分析與評(píng)價(jià)

2.1.1 供試品溶液制備 取樣品粗粉1.0 g，精密稱定，置于50 mL具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20 mL，超聲處理1 h，補(bǔ)足失重，離心，取上清液，4 ℃保存，備用。

2.1.2 對(duì)照品溶液制備 分別精密稱定對(duì)照品金絲桃苷1.49 mg、異槲皮苷1.52 mg、棉皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷1.53 mg、楊梅素1.51 mg、槲皮素-3′-O-葡萄糖苷1.50 mg、蘆丁1.42 mg、槲皮素1.22 mg置于10 mL量瓶中，用70%甲醇溶解并稀釋至刻度，配制成混合對(duì)照品溶液，于4 ℃保存，備用。

2.1.3 色譜分析條件 色譜柱AlltimaTM C₁₈色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）。流動(dòng)相乙腈（A）- 0.1%甲酸水（B），梯度洗脫0～10 min，16%A；10～40 min，16%～25% A；40～50 min，25%～35% A；50～55 min，35%～60% A；55～56 min，60%～16% A；56～60 min，16%A。體積流量1 mL min^-1，檢測(cè)波長(zhǎng)360 nm，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量10 μL。典型樣品色譜圖見(jiàn)圖1。

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及線性關(guān)系考察 分別精密吸取2.1.2項(xiàng)下制備的混合對(duì)照品溶液2， 6， 10， 20， 30 μL，注入液相色譜儀測(cè)定；另取混合對(duì)照品溶液加70%甲醇稀釋10倍后，精密吸取5 μL注入液相色譜儀測(cè)定。以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積的積分值為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。最低檢測(cè)限（LOD）與最低定量限（LOQ）分別在信噪比（S/N）為3和10時(shí)測(cè)定，見(jiàn)表1。由表1可知，所測(cè)定7種黃酮類化學(xué)成分，其在一定的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r>0.999 5），且具有較高的靈敏度。

2.1.5 精密度 取混合對(duì)照品溶液，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算其RSD。結(jié)果顯示，蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、棉皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷、楊梅素、槲皮素-3′-O-葡萄糖苷、槲皮素峰面積的RSD依次為1.2%， 1.3%， 1.5%， 2.2%， 2.3%， 1.6%， 0.30%，表明其精密度良好。

2.1.6 重復(fù)性 精密稱取黃蜀葵花粗粉6份，按照前述方法分別制備供試品溶液，依次進(jìn)樣，分別記錄蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、棉皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷、楊梅素、槲皮素-3′-O-葡萄糖苷、槲皮素的峰面積積分值，計(jì)算其含量及RSD。結(jié)果顯示上述所測(cè)定成分含量的RSD依次為1.8%， 1.1%， 1.5%， 1.6%， 1.7%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.7 穩(wěn)定性 取重復(fù)性試驗(yàn)所制備的供試品溶液1份，12 h內(nèi)每隔2 h進(jìn)樣1次，記錄峰面積，結(jié)果顯示蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、棉皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷、楊梅素、槲皮素-3′-O-葡萄糖苷、槲皮素峰面積的RSD依次為1.8%， 2.1%， 0.9%， 1.2%， 2.0%，結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.8 加樣回收率 取黃蜀葵花粗粉6份，每份約0.5 g，精密稱定，分別加入與樣品中各成分含量等量的對(duì)照品，依法制備供試品溶液并進(jìn)樣分析，計(jì)算回收率。結(jié)果蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、棉皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷、楊梅素、槲皮素-3′-O-葡萄糖苷、槲皮素的平均回收率分別為100.4%， 98.8%， 98.7%， 95.6%， 97.4%， 98.9%， 96.4%，RSD為2.3%， 2.0%， 2.5%， 2.3%， 2.4%， 2.0%， 2.8%，表明本方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確度較好。

2.1.9 樣品測(cè)定及結(jié)果分析 取黃蜀葵花、根、莖及葉片按2.1.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依次進(jìn)樣分析，結(jié)果見(jiàn)表2。由表可知，各黃酮類化學(xué)成分主要集中于花部位，其總量可達(dá)25.45 mg g^-1，其中尤以棉皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷、槲皮素-3′-O-葡萄糖苷、金絲桃苷、和異槲皮苷含量較高。在根中未檢測(cè)到黃酮類成分，莖中有少量的金絲桃苷分布，在葉片亦有金絲桃苷、異槲皮苷等少量黃酮類化學(xué)成分存在，其總量為2.70 mg·g^-1。可供進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用。

2.2 可溶性多糖類化學(xué)成分的分析與評(píng)價(jià)

2.2.1 供試品溶液的制備^[7] 取樣品粗粉1.0 g，精密稱定，置于100 mL具塞錐形瓶中，加入50 mL 80%乙醇，室溫靜置1 h后超聲提取30 min，在75 ℃水浴回流2 h后，趁熱抽濾，熱乙醇洗滌殘?jiān)娓?，加?0 mL蒸餾水，稱重，回流提取2 h，取出放冷，加蒸餾水補(bǔ)足失重，搖勻，15 000 r·min^-1離心10 min，取上清液，即得用于中性多糖和酸性多糖的含量測(cè)定的供試品溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)105 ℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品10.10 mg，置100 mL量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，即得101.0 mg·L^-1的葡萄糖對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密稱取經(jīng)105 ℃干燥至恒重的葡萄糖醛酸對(duì)照品10.12 mg，置100 mL量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，即得101.2 mg·L^-1的葡萄糖醛酸對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 參考文獻(xiàn)方法^[7]，精密量取葡萄糖對(duì)照品儲(chǔ)備液0.2， 0.4， 0.6， 0.8， 1.0 mL， 分別置10 mL干燥具塞試管中，加蒸餾水至1.0 mL，搖勻，精密加入5%苯酚溶液2.0 mL，混勻，再精密加入濃硫酸7.0 mL，充分混勻，置沸水浴中加熱20 min，冷卻至室溫后，于490 nm處測(cè)吸光度，以空白溶液為對(duì)照。繪制葡萄糖和葡萄糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，以吸光度（Y）為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品溶液濃度（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得用于測(cè)定中性多糖的葡萄糖對(duì)照品回歸方程為Y=2.163 8X+0.099 3，r=0.996 4，線性范圍為20.20～101.0 mg·L^-1。

精密量取葡萄糖醛酸對(duì)照品儲(chǔ)備液0.2， 0.4， 0.6， 0.8， 1.0 mL， 分別置 10 mL干燥具塞試管中，加蒸餾水至1.0 mL，搖勻，精密加入12.5 mol·L^-1四苯硼鈉硫酸溶液5.0 mL，混勻，置沸水浴中加熱10 min后，自來(lái)水水浴冷卻至室溫后，混勻，再精密加入0.125%咔唑無(wú)水乙醇溶液0.2 mL，充分混勻，置沸水浴中加熱15 min， 自來(lái)水水浴冷卻5 min后，混勻，于512 nm處測(cè)吸光度，以空白溶液為對(duì)照。分別繪制葡萄糖和葡萄糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，以吸光度（Y）為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品溶液濃度（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。得用于測(cè)定酸性多糖的葡萄糖醛酸對(duì)照品回歸方程為Y=6.909 5X+0.127 7，r=0.998 9，線性范圍為20.24～101.2 mg·L^-1。

2.2.4 精密度、重復(fù)性及穩(wěn)定性試驗(yàn) 取2.2.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液2份，每份0.5 mL，分別按2.2.3項(xiàng)下方法顯色，依法連續(xù)測(cè)定6次吸光度，得中性多糖和酸性多糖精密度RSD分別為1.0%和1.2%，表明該方法精密度良好。取黃蜀葵花樣品6份，每份1.0 g，按2.2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別按2.2.3項(xiàng)下方法測(cè)定，分別得中性多糖和酸性多糖的RSD 1.8%和2.0%。表明該方法重復(fù)性良好。另取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下1份樣品，顯色后分別于0， 10， 30， 60， 90， 120 min時(shí)測(cè)定中性多糖和酸性多糖的吸光度值，結(jié)果顯示中性多糖及酸性多糖在120 min內(nèi)吸光度RSD分別為1.4%和1.3%，表明供試品顯色后溶液在2 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.5 加樣回收率試驗(yàn) 取黃蜀葵花粗粉6份，每份約0.5 g，精密稱定，置具塞試管中，分別加入等量的葡萄糖對(duì)照品溶液，依法測(cè)定，得到中性多糖均回收率為96.50%，RSD為2.5%。另取相同的樣品6份，分別加入等量的葡萄糖醛酸對(duì)照品溶液，依法測(cè)定，得到酸性多糖的平均回收率為102.5%，RSD為2.8%，表明本方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確度較好。

2.2.6 樣品測(cè)定結(jié)果及分析 分別取黃蜀葵花、根、莖及葉片，按2.2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按照2.2.3項(xiàng)下方法經(jīng)顯色后分析其可溶性多糖類組分含量，分析結(jié)果見(jiàn)表3。由表可知，黃蜀葵各組織器官均富含可溶性多糖類組分。莖中總多糖量最高，達(dá)19.76%，總多糖含量由高至低依次為莖>花>葉>根。黃蜀葵不同組織器官中酸性多糖組分含量差異較大，其中莖中酸性多糖量可達(dá)13.07%，而根中僅為0.88%。

2.3 總纖維素類化學(xué)成分的分析與評(píng)價(jià)

2.3.1 測(cè)定方法^[8-9] 參照Weende法，精密稱取干燥至恒重的黃蜀葵花、根、莖、葉片粗粉各2.0 g，精密稱定，加乙醚脫脂后，干燥，加入煮沸的質(zhì)量濃度為1.25%硫酸溶液150 mL，并加入數(shù)滴正辛醇（消泡劑），煮沸30 min，除去硫酸，用熱蒸餾水約30 mL清洗樣品3次，再加入已煮沸的質(zhì)量濃度為1.25%的KOH溶液150 mL，并加入數(shù)滴正辛醇，煮沸30 min后，加熱蒸餾水約30 mL清洗樣品3次，再用丙酮25 mL清洗3次，將清洗殘留物及玻璃坩堝一并置于烘箱中130 ℃烘干1 h，在干燥器中冷卻至室溫并精密稱定質(zhì)量，即為組纖維含灰分質(zhì)量（W₁）。將試樣和玻璃坩堝于500 ℃馬弗爐中灼燒3 h，在干燥器中冷卻至室溫并精密稱定質(zhì)量，即為灰分質(zhì)量（W₂）。根據(jù)計(jì)算公式：粗纖維=（W₁-W₂）/W × 100%，計(jì)算樣品中總纖維素類成分含量，其中W₁為粗纖維含灰分質(zhì)量，W₂為灰分質(zhì)量，W為樣品質(zhì)量。

2.3.2 總纖維含量分析 黃蜀葵花、根、莖及葉片中總纖維類分析結(jié)果見(jiàn)表3。由表可知，黃蜀葵不同組織器官中除花外均富含纖維類物質(zhì)，其中根中總纖維量最高，可達(dá)29.88%；莖、葉中總纖維量分別為26.61%， 19.88%，可供進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用。

2.4 核苷及氨基酸類化學(xué)成分的分析與評(píng)價(jià)

2.4.1 供試品溶液制備 取樣品粗粉約1.0 g，精密稱定，置于50 mL具塞錐形瓶中，精密加入40 mL蒸餾水，稱重，靜置30 min后，超聲提取30 min，再稱重，用蒸餾水補(bǔ)足失重，搖勻，3 000 r·min^-1條件下離心10 min，取上清液適量，過(guò)0.22 μm濾膜，冷藏備用。

2.4.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取24種氨基酸對(duì)照品適量，置于10 mL量瓶中，加蒸餾水定容，制成含天冬氨酸（0.183 g·L^-1）、亮氨酸（0.129 g·L^-1）、苯丙氨酸（0.177 g·L^-1）、異亮氨酸（0.143 g·L^-1）、色氨酸（0.130 g·L^-1）、γ-氨基丁酸（0.128 g·L^-1）、甲硫氨酸（0.117 g·L^-1）、脯氨酸（0.177 g·L^-1）、纈氨酸（0.127 g·L^-1）、?；撬幔?.224 g·L^-1）、酪氨酸（0.111 g·L^-1）、半胱氨酸（0.194 g·L^-1）、α-丙氨酸（0.142 g·L^-1）、反式-4-羥基-脯氨酸（0.306 g·L^-1）、蘇氨酸（0.192 g·L^-1）、谷氨酸（0.184 g·L^-1）、賴氨酸（0.136 g·L^-1）、谷氨酰胺（0.116 g·L^-1）、絲氨酸（0.288 g·L^-1）、天冬酰胺（0.187 g·L^-1）、瓜氨酸（0.140 g·L^-1）、精氨酸（0.136 g·L^-1）、組氨酸（0.120 g·L^-1）、鳥(niǎo)氨酸（0.145 g·L^-1）的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。

精密稱取9種核苷及堿基類對(duì)照品適量，置于10 mL量瓶中，加蒸餾水定容，制成含胸腺嘧啶（0.444 g·L^-1）、胸苷（0.124 g·L^-1）、2′-脫氧尿苷（0.108 g·L^-1）、2′-脫氧腺苷（0.145 g·L^-1）、腺嘌呤（0.122 g·L^-1）、次黃嘌呤（0.104 g·L^-1）、2′-脫氧肌苷（0.106 g·L^-1）、胞嘧啶（0.144 g·L^-1）、2′-脫氧腺苷-5′-單磷酸（0.108 g·L^-1）的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.4.3 色譜分析條件^[10-11] 色譜柱ACQUITY UPLC BEH Amide色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相含5 mmol·L^-1甲酸銨、5 mmol·L^-1乙酸銨和0.2%甲酸的水溶液（A），含1 mmol·L^-1甲酸銨、1 mmol·L^-1乙酸銨和0.2%甲酸的乙腈溶液（B）；梯度洗脫0～3 min，10% A；3～9 min，10%～18% A；9～15 min，18%～20% A；15～16 min，20%～46% A；16～18 min，46%A；18～19 min，46%～10% A；19～20 min，10% A；流速0.4 mL·min^-1，柱溫35 ℃，進(jìn)樣體積2 μL。典型樣品色譜圖見(jiàn)圖2。

2.4.4 質(zhì)譜檢測(cè)條件^[10-11] 離子化模式ESI⁺，毛細(xì)管電壓3.0 KV，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）檢測(cè)，離子源溫度150 ℃，脫溶劑氣流量和溫度分別為1 000 L·h^-1，500 ℃，碰撞氣流量為0.15 mL·min^-1、錐孔氣流量為0.15 mL·min^-1，50 L·h^-1，所測(cè)氨基酸與核苷類物質(zhì)的碰撞能量和錐孔電壓同文獻(xiàn)[11]。

2.4.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及線性關(guān)系考察 取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，加水稀釋成系列濃度的混合對(duì)照品溶液，按照2.4.3和2.4.4項(xiàng)條件測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)Y，質(zhì)量濃度（mg·L^-1）為橫坐標(biāo)X，得到線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)。分別在S/N為3和10時(shí)測(cè)定得到LOD值和LOQ值。結(jié)果見(jiàn)表4。由表可知，其在一定的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，且具有較高的靈敏度，適用于黃蜀葵不同部位中核苷氨基酸類化合物的含量測(cè)定。

2.4.6 精密度 取混合對(duì)照品溶液，按照上述色譜、質(zhì)譜條件分別于重復(fù)進(jìn)樣6次測(cè)定，得到峰面積，以峰面積的RSD來(lái)評(píng)價(jià)其精密度。結(jié)果見(jiàn)表5，所有被測(cè)成分峰面積RSD均小于5.0%，表明其精密度良好。

2.4.7 重復(fù)性 精密稱取黃蜀葵花粗粉6份，按照前述方法分別制備供試品溶液，依次進(jìn)樣，分別記錄各待測(cè)成分的峰面積積分值，計(jì)算其含量，依據(jù)其含量的RSD評(píng)價(jià)其重復(fù)性。結(jié)果顯示上述所測(cè)定成分含量的RSD均小于5.0%，表明該方法重復(fù)性良好，見(jiàn)表5。

2.4.8 穩(wěn)定性 取重復(fù)性試驗(yàn)所制備的供試品溶液1份，12 h內(nèi)每隔2 h進(jìn)樣1次，記錄峰面積，并計(jì)算其RSD。結(jié)果顯示，上述所測(cè)定成分峰面積的RSD均小于4.0%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定，見(jiàn)表5。

2.4.9 加樣回收率 取黃蜀葵花粗粉6份，每份約0.5 g，精密稱定，分別加入與樣品中各成分含量等量的對(duì)照品，依法制備供試品溶液并進(jìn)樣分析，計(jì)算回收率及RSD，結(jié)果見(jiàn)表5。結(jié)果顯示所有待測(cè)化合物其回收率介于94.70%～105.7%，其RSD均小于4.0%，表明本方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確度較好。

2.4.10 樣品測(cè)定結(jié)果及分析 取黃蜀葵花、根、莖及葉片分別按2.4.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依次進(jìn)樣分析，結(jié)果見(jiàn)表6。由表6可知，在黃蜀葵花、根、莖及葉片中共檢出17種組成蛋白質(zhì)的游離氨基酸類化學(xué)成分，另檢測(cè)出4種非蛋白質(zhì)氨基酸γ-氨基丁酸、反式-4-羥基-脯氨酸、瓜氨酸和鳥(niǎo)氨酸。其中游離氨基酸總量以花含量較高，可達(dá)4.737 mg·g^-1。各氨基酸中以谷氨酰胺含量相對(duì)較高，其在花中可達(dá)1.010 mg·g^-1。

各樣品中共測(cè)得8種核苷類化學(xué)成分，且以葉片中核苷類化學(xué)成分總量較高，可達(dá)1.474 mg·g^-1，其次為花，可達(dá)0.738 mg·g^-1；根和莖中核苷類化學(xué)成分含量相對(duì)較低，其總量分別為0.136和0.153 mg·g^-1?？勺鬟M(jìn)一步開(kāi)發(fā)。

3 討論

資源的利用價(jià)值在于其可利用物質(zhì)的多用性和多宜性特點(diǎn)^[13]。本研究結(jié)果表明，黃蜀葵在其藥用部位采收過(guò)程中產(chǎn)生的各組織器官黃酮類、可溶性多糖類、纖維類、核苷類和游離氨基酸類化學(xué)成分分布及含量差異較大，據(jù)此可依據(jù)各類資源性化學(xué)成分的潛在利用價(jià)值進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā)，以提高黃蜀葵植物資源利用效率。研究顯示，黃酮類化學(xué)成分在其傳統(tǒng)藥用部位花中種類及含量較高，而在其他部位含量較低或難以檢測(cè)到，表明該類化學(xué)成分在黃蜀葵植物中的分布具有一定的局限性。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道^[12]，黃蜀葵植物中含有的黃酮類化學(xué)成分具有廣泛的藥理活性，除可用于治療腎炎及腎纖維化外，尚具有保護(hù)心腦缺血損傷、促進(jìn)血管新生等作用，故以其為主要原料除用于慢性腎炎治療藥物黃葵膠囊的生產(chǎn)外，尚可用于相關(guān)心腦血管系統(tǒng)藥物的研發(fā)。

本研究顯示，黃蜀葵花、根、莖和葉片中均富含可溶性多糖類組分，尤其是莖中總多糖量高達(dá)19.76%。有研究顯示^[14-15]，黃蜀葵植物多糖類組分多具有凝膠特性及可降解性，因此可以黃蜀葵莖為主要原料提取制備多糖類資源性物質(zhì)用作食品工業(yè)的可食性包裝材料及增稠劑、穩(wěn)定劑等及中藥凝膠劑的基質(zhì)^[16]。此外，由于該類多糖組分具有較好的保水性、吸附性及高黏性，也可用于環(huán)境治理。研究結(jié)果尚顯示，黃蜀葵根、莖及葉均富含粗纖維，可以其為主要原料，經(jīng)生物發(fā)酵用于制備纖維素酶、工業(yè)乙醇等，或經(jīng)無(wú)氧炭化制備生物炭；也可以其為主要原料，復(fù)合黃蜀葵多糖膠用于復(fù)合纖維板或木塑板的制備^[17]。

源于自然生物資源的氨基酸類及核苷類化學(xué)成分為維持生命活動(dòng)重要的營(yíng)養(yǎng)保健成分，為重要的資源性化學(xué)物質(zhì)。本研究顯示，黃蜀葵花、根、莖及葉均富含游離氨基酸類化學(xué)成分。核苷類組分在黃蜀葵葉及花中含量相對(duì)較高，也可用于相關(guān)產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)。

黃蜀葵植物資源在藥材生產(chǎn)及產(chǎn)業(yè)化加工過(guò)程中，產(chǎn)生大量的根、莖、葉等廢棄物，目前尚未得到充分利用，一方面造成資源的極大浪費(fèi)，另一方面也增加了環(huán)境承載壓力。同科同屬植物黃秋葵A. esculentus，其不同部位在醫(yī)藥、食品、畜牧、觀賞園藝等方面均得到不同程度的開(kāi)發(fā)利用^[18]，為黃蜀葵植物非藥用部位的資源化利用提供了借鑒。本研究結(jié)果為該類生物資源的精細(xì)化利用提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，對(duì)提升黃蜀葵資源利用效率，創(chuàng)新黃蜀葵資源價(jià)值，構(gòu)建基于黃蜀葵藥用生物資源的循環(huán)利用策略提供支撐。

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[責(zé)任編輯 丁廣治]